Bài giảng Cấy chuyền nuôi cấy thứ cấp tạo dòng tế bào động vật

Chia sẻ: Lavie Lavie | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:37

Thêm vào BST

Báo xấu

222
lượt xem 11
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Bài giảng Cấy chuyền nuôi cấy thứ cấp tạo dòng tế bào động vật bao gồm những nội dung về cấy chuyền & nuôi cấy thứ cấp; hợp dòng (Confluency); tạo dòng tế bào động vật; phân lập các dòng tế bào và một số nội dung khác. Mời các bạn tham khảo.

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Bài giảng Cấy chuyền nuôi cấy thứ cấp tạo dòng tế bào động vật

CẤY CHUYỀN NUÔI CẤY THỨ CẤP TẠO DÒNG Tế bào động vật dttloan@hcmus.edu.vn
CẤY CHUYỀN & NUÔI CẤY THỨ CẤP - Tách TB khỏi môi trường cũ, xác định lại mật độ TB, tái nuôi cấy. - Sự phù hợp giữa mật độ TB – diện tích/không gian nuôi TB – thể tích môi trường tối ưu  TB tăng sinh tốt. - Sự hợp dòng - Kìm hãm tiếp xúc - Passage - Chu kì TB – thời gian nhân đôi
.American Type Culture Collection
HỢP DÒNG (CONFLUENCY) • TB PHỦ KÍN BỀ MẶT NUÔI CẤY • MẬT ĐỘ TẾ BÀO TỐI ƯU ĐỂ CẤY CHUYỀN ~80% • QUÁ ÍT, TB RƠI VÀO PHA LAG VÀ KHÔNG TĂNG SINH. • QUÁ NHIỀU: TB NGỪNG PHÂN CHIA HOẶC CHỒNG LẤP LÊN NHAU VÀ HÌNH THÀNH CỤM TB GIỐNG KHỐI U.
KÌM HÃM TIẾP XÚC • KHI TB TIẾP XÚC VỚI NHAU  NGỪNG TĂNG TRƯỞNG • TB DỪNG Ở PHA G0 CỦA CHU KÌ TẾ BÀO (CELL CYCLE) • THỜI GIAN NHÂN ĐÔI: DOUBLING-TIME • HOẶC CÁC TB BỊ BIẾN ĐỔI CÓ THỂ TIẾP TỤC TĂNG SINH VÀ CHỒNG LẤP LÊN NHAU • PHÁT TRIỂN QUÁ MỨC RỒI CHẾT
PASSAGE • TB ĐƯỢC TÁCH LÊN BỀ MẶT PLASTIC VÀ CẤY (SEED) TRỞ LẠI. • KÍ HIỆU: P# (SỐ PASSAGE).
CLIP 3: CẤY CHUYỀN, NUÔI CẤY THỨ CẤP
TẠO DÒNG TẾ BÀO ĐỘNG VẬT • CELL LINE • GENOTYPE • CELL STRAIN • GENE EXPRESSION • CELL CLONE • PHENOTYPE • CELL LINEAGE • MICRO/TISSUE ENVIRONMENT • CONTINOUS CELL LINE GENERATION NUMBER • IMMORTAL CELL LINE PASSAGE NUMBER • TRANSFORMED CELL LINE DOUBLING TIME • FINITE/INFINITE CELL LINE CELL CYCLE
Hela_Henrietta Lacks
PHÂN LẬP CÁC DÒNG TẾ BÀO Mô Nuôi cấy tb đơn hay nuôi cấy mô in vitro Nuôi cấy sơ cấp Cấy chuyền Nuôi cấy thứ cấp Cấy chuyền Dòng tb Cell Line Phân lập từng tb đơn Cấy chuyền liên tục Sự bất tử của tb Tạo dòng tb Mất kiểm soát Sự già yếu tăng trưởng tb của tb Dòng tế bào bị biến đổi Dòng tb bất tử
CELL LINE Các tế bào trong cùng một mô, cùng cơ quan được nuôi cấy gọi là dòng tế bào (?). Nuôi cấy sơ cấp -> cấy chuyền, khi đó những tế bào trong nuôi cấy đó được xem như là một dòng tế bào (?).  Một cell line có chứa các tế bào hoặc có kiểu hình tương tự nhau hoặc khác nhau. Các loại tế bào này có sự đồng nhất về kiểu gen hay không?
CELL CLONE Cell clone: subculture cell line: NCTC 1 tế bào từ cell line (in vitro). Cell clone Tất cả các tế bào trong một cell clone giống nhau hoàn toàn về kiểu hình và kiểu gen
TBG TỪ MÁU DÂY RỐN Cell clone????? Cell line??????
Marker TBG tạo TBG TBG sinh dưỡng TBG giống Tế bào tiền thân máu trung mô không giới hạn thể phôi đa tiềm năng CD34 + - - + - CD133 + * * + - CD14 * - - * + CD45 + - - - + CD44 + + + * + CD54 * + + * + CD73 - + * * - CD90 + + + * - CD105 - + + * + CD166 * + * * +
PHƯƠNG PHÁP TẠO CELL LINE
PHƯƠNG PHÁP TẠO CELL LINE
PHƯƠNG PHÁP TẠO CELL LINE Sau khi thu nhận Sau 24 h Ficoll Sau 1 lần cấy Sau 7 ngày Sau 72 h chuyền