zunia.vn

Tuyển sinh 2024 dành cho Gen-Z

zunia.vn

» Luận Văn - Báo Cáo

» Báo cáo khoa học

BÁO CÁO NGHIÊN CỨU KHOA HỌC KỸ THUẬT: PHÁT HIỆN MỘT SỐ GEN ĐỘC LỰC CỦA ESCHERICHIA COLI TRÊN THỊT BÒ, HEO VÀ TRONG PHÂN BÒ, HEO BẰNG KỸ THUẬT MULTIPLEX-PCR

Chia sẻ: Linh Ha | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:7

Báo xấu

76
lượt xem 21
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

ĐẶT VẤN ĐỀ E. coli là một trong những vi khuẩn thường trực trong đường ruột người và động vật. Người ta chia E. coli thành nhiều nhóm. Nhóm STEC (Shiga toxin producing E. coli) mang nhiều gen độc lực như gen eae chịu trách nhiệm sản sinh intimin giúp vi khuẩn bám dính vào niêm mạc ruột và gây hư hại vi nhung mao ruột; gen hly sản sinh độc tố gây...

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: BÁO CÁO NGHIÊN CỨU KHOA HỌC KỸ THUẬT: PHÁT HIỆN MỘT SỐ GEN ĐỘC LỰC CỦA ESCHERICHIA COLI TRÊN THỊT BÒ, HEO VÀ TRONG PHÂN BÒ, HEO BẰNG KỸ THUẬT MULTIPLEX-PCR

NGHIEÂN CÖÙU KHOA HOÏC KYÕ THUAÄT 53 PHAÙT HIEÄN MOÄT SOÁ GEN ÑOÄC LÖÏC CUÛA ESCHERICHIA COLI TREÂN THÒT BOØ, HEO VAØ TRONG PHAÂN BOØ, HEO BAÈNG KYÕ THUAÄT MULTIPLEX-PCR DETECTING SOME VIRULENCE GENES OF ESCHERICHIA COLI IN CATTLE AND SWINE FAECES, ON BEEF AND PORK MEAT BY MULTIPLEX-PCR Traàn Thanh Phong, Nguyeãn Ngoïc Tuaân, Buøi Thò Thu Trang vaø Leâ Thò Mai Khanh Khoa Chaên nuoâi Thuù y, Ñaïi hoïc Noâng Laâm Tp. Hoà Chí Minh ABSTRACT be raised due to its high occurence in animal feces and on beef meat. On 20 samples of feces from clinically healthy ÑAËT VAÁN ÑEÀ cattle (10 animals) and pigs (10); 8 samples of beef meat and 23 pork to determine total Escherichia E. coli laø moät trong nhöõng vi khuaån thöôøng tröïc coli (E. coli) according to FAO (1992) and to detect trong ñöôøng ruoät ngöôøi vaø ñoäng vaät. Ngöôøi ta chia their virulence genes. On 161 samples include 32 E. coli thaønh nhieàu nhoùm. Nhoùm STEC (Shiga toxin samples of feces taken from scour calves (10 producing E. coli) mang nhieàu gen ñoäc löïc nhö gen animals), scour piglets (6), scour weaner pigs (16); eae chòu traùch nhieäm saûn sinh intimin giuùp vi khuaån 46 samples of feces from clinically healthy cattle (21 baùm dính vaøo nieâm maïc ruoät vaø gaây hö haïi vi nhung animals), pigs (25), and 34 samples of beef meat and mao ruoät; gen hly saûn sinh ñoäc toá gaây dung giaûi 49 pork meat to isolate E. coli and detect their hoàng caàu; gen stx1, stx2 saûn sinh caùc ñoäc toá Shiga virulence genes. E. coli was isolated on MAC/CT- gaây hoäi chöùng vieâm keát traøng xuaát huyeát (HC = SMAC (Mac Conkey/Cefixime tellurite sorbitol-MAC) hemorrhagic colitis) vaø hoäi chöùng huyeát nieäu (HUS agar at 370C for 24 hours. For each sample, 4-10 = hemolytic uremic syndrome) ôû ngöôøi; gen stx2e typical colonies of E. coli were collected for extraction saûn sinh ñoäc toá vero gaây beänh phuø thuõng vaø tieâu of DNA by heat. Multiplex-PCR was used to detect chaûy ôû heo cai söõa. Trong khi ñoù nhoùm ETEC gene eae, hly, stx1 and stx2 (PCR1), and gene stx2e, (Enterotoxigenic E. coli) mang gen lt-I saûn sinh sta, stb, lt-I (PCR2) of isolated E. coli. ñoäc toá ruoät keùm chòu nhieät (heat labile toxin = LT) vaø gen st saûn sinh ñoäc toá ruoät chòu nhieät (heat Total E. coli on cattle feces were lower than stable toxin = ST), ñoù laø hai loaïi ñoäc toá gaây tieâu pig (9.5*106 vs 102*106 MPN/1gam), in beef meat chaû y treâ n ngöôø i vaø vaä t nuoâ i . Nhoù m EPEC was higher than pork (14.8*104 vs 0.4*104 MPN/ (Enteropathogenic E. coli) mang gen eae saûn sinh 1gam). The prevalence of the virulence genes in protein intimin. E. coli isolates from animal species and feces conditions was determined. In scour calves the Muïc tieâu cuûa baøi baùo laø xaùc ñònh taàn soá caùc gen frequency of E. coli isolates possessing stx1, hly, ñoäc löïc cuûa E. coli treân thòt boø vaø heo, trong phaân eae, stx2 and stb was 40%, 30%, 30%, 20% and boø vaø heo ñeå naâng cao hieåu bieát veà E. coli gaây beänh 20%, respectively. With scour weaner pigs the cho vaät nuoâi vaø gaây ngoä ñoäc thöïc phaåm cho ngöôøi prevalence of gene stb, stx2, stx2e, sta, eae and tieâu duøng. hly in E. coli isolates was 81.3%, 50%, 31.3%, 25%, 12.5% and 6.3%, respectively. In clinically healthy VAÄT LIEÄU VAØ PHÖÔNG PHAÙP cattle E. coli isolates carrying gene stx2, stx1, hly and stb were 42.9%, 38.1%, 19% and 14.3%. For Laáy maãu clinically healthy pig, the detected genes were stb, stx2e, hly, eae and stx2 at the rate of 28%, 16%, Thòt heo vaø thòt boø ñöôïc laáy töø cô sôû gieát moå ôû 8%, 8% and 4%. On beef meat, E. coli isolates cao ñieåm haï thòt baèng caùch söû duïng gaïc thaám öôùt carrying gene stx1, stx2, eae, hly and stb were 50%, nöôùc muoái sinh lyù 0,9% tieät truøng ñeå chaø xaùt maïnh 32.4% , 23.5% , 26.5% and 2.9%, respectively. On treân beà maët thòt (200 cm2). pork meat, the detected genes were stx2, eae, hly at the rate of 22.5%, 4.1% and 4.1%. Thu thaäp maãu phaân boø, heo töø caùc cô sôû chaên nuoâi baèng caùch duøng muoãng voâ truøng laáy phaàn giöõa In general, E. coli possessing virulence gene cuïc phaân ñaëc (khoaûng 25 g) hoaëc taêm boâng ngoaùy was present in healthy cattle and swine feces, in vaøo tröïc traøng beâ, heo tieâu chaûy cho vaøo moâi tröôøng feces of scour calves and pigglets, also on beef and Carry Blair, baûo quaûn ôû 8-100C, chuyeån nhanh veà pork meat, specially E. coli had the genes Shiga phoøng thí nghieäm. toxin producing (stx1, stx2 and stx2e). The risk of E. coli with virulence genes to public health should Ñaïi hoïc Noâng Laâm Tp. HCM Taïp chí KHKT Noâng Laâm nghieäp, soá 3/2007
NGHIEÂN CÖÙU KHOA HOÏC KYÕ THUAÄT 54 Ñònh löôïng vaø ñònh tính E. coli 700C trong 10 phuùt. Sau khi raõ ñoâng, ly taâm 13000 voøng/ phuùt trong 3 phuùt, laáy phaàn dòch phía treân Ñònh löôïng E. coli theo qui trình cuûa FAO (1992): laø DNA xeùt nghieäm. maãu ñöôïc pha loaõng thích hôïp vaø caáy chuyeån vaøo Phaùt hieän caùc gen ñoäc löïc moâi tröôøng LTB (Lauryl tryptone broth) ôû 350C/24 giôø. Choïn nhöõng oáng döông tính chuyeån sang EC Phaùt hieän taùm gen ñoäc löïc cuûa E. coli baèng hai (enrichment coli) uû 44,50C/24-48 giôø vaø sau ñoù ria treân thaïch EMB, uû 370C/24 giôø. Choïn khuaån laïc phaûn öùng multiplex-PCR: PCR1 phaùt hieän caùc gen stx1, stx2, eae vaø hly vôùi ñoái chöùng döông laø EDL ñieån hình, giöõ goác treân thaïch NA ñeå thöû IMViC. Tính toång soá E. coli baèng caùch tra baûng MPN. Song 933; PCR2 phaùt hieän caùc gen stx2e, sta, stb, lt-I song ñoù, choïn 4-10 khuaån laïc ñieån hình cuûa E. coli vôùi ñoái chöùng döông laø H44. ñeå ly trích DNA nhaèm phaùt hieän caùc gen ñoäc löïc PCR1 phaùt hieän caùc gen stx1, stx2, eae, hly töø caùc maãu ñònh löôïng. Maãu ñònh tính (phaùt hieän gen ñoäc löïc) ñöôïc caáy Trình töï caùc ñoaïn moài söû duïng trong multiplex ria tröïc tieáp treân thaïch MAC/CT-SMAC (Mac – PCR1 (Theo Paton vaø Paton, 1998) Conkey/cefexime tellurite sorbitol-MAC), uû 370C Hoãn hôïp phaûn öùng 50 µl, goàm caùc thaønh phaàn trong 24 giôø. Khuaån laïc ñieån hình E. coli treân MAC sau (Paton vaø Paton, 1998): PCR buffer 1X (75 mM coù maøu ñoû hoàng, troøn vaø loài, treân CT-SMAC choïn tris-HCl ôû pH=8.8, 20 mM NH4(SO4)2); MgCl2 2mM; khuaån laïc hoàng laãn traéng. moãi loaïi dNTP 200µM; moãi ñoaïn moài 250mM; Taq 0,5UI (ABgene); DNA xeùt nghieäm 1 µl vaø nöôùc caát Ly trích DNA 2 laàn vöøa ñuû 50 µl. Phaûn öùng PCR coù 35 chu kyø nhieät. Moãi chu kyø Moãi maãu choïn ñaïi dieän khoaûng 4-10 khuaån laïc goàm bieán tính 1 phuùt ôû 95-0C; uû baét caëp 2 phuùt ôû ñieån hình E. coli cho vaøo eppendorf chöùa saün 0,5ml nöôùc caát hai laàn voâ truøng, ñun soâi 10 phuùt, tröõ ôû - 650C trong 10 chu kyø ñaàu vaø sau ñoù giaûm daàn ñeán Ñoaïn moài Trình töï oligonucleotide (5’ 3’) Kích côõ (bp) Eae – F GACCCGGCACAAGCATAAGC 384 CCACCTGCAGCAACAAGAGG Eae – R Hly – F GCATCATCAAGCGTACGTTCC 534 AATGAGCCAAGCTGGTTAAGCT Hly –R Stx1 – F ATAAATCGCCATTCGTTGACTAC 180 AGAACGCCCACTGAGATCATC Stx1 – R Stx2 – F GGCACTGTCTGAAACTGCTCC 255 TCGCCAGTTATCTGACATTCTG Stx2 – R 1 2 EDL 4 5 6 993 534 bp (hly) 384 bp (eae) 255 bp (stx2) 180 bp (stx1) Hình 1. Ñieän di saûn phaåm multiplex–PCR ñeå phaùt hieän gen eae, hly, stx1, stx2 EDL933 laø maãu ñoái chöùng döông (stx1, stx2, eae, hly) vaø 1, 2, 4, 5,6 laø caùc maãu xeùt nghieäm Taïp chí KHKT Noâng Laâm nghieäp, soá 3/2007 Ñaïi hoïc Noâng Laâm Tp. HCM
NGHIEÂN CÖÙU KHOA HOÏC KYÕ THUAÄT 55 LT-I 150 ng, STa 150 ng, STb 45 ng, Taq – 600C vaøo chu kyø 16 cho ñeán chu kyø cuoái; vaø keùo duoãi 1,5 phuùt ô’ 720C vaø taêng daàn leân 2,5 phuùt töø polymerase 0,5 UI (ABgene), DNA xeùt nghieäm 3 chu kyø 25 ñeán 35. µl vaø nöôùc caát 2 laàn vöøa ñuû 50 µl. Sau khi khueách ñaïi, saûn phaåm PCR ñöôïc ñieän di Quy trình nhieät goàm: tieàn bieán tính ôû 940C/5 treân gel agarose 1%, moãi gieáng chöùa 10 µl saûn phaåm phuùt, 25 chu kyø nhieät (bieán tính 940C/45 giaây, uû khueách ñaïi troän vôùi 2 µl loading dye. Thôøi gian baét caëp 520C/45 giaây vaø keùo duoãi ôû 720C/1 phuùt), ñieän di 35 phuùt, 100 V, 250 mA. Gel ñöôïc ngaâm vôùi vaø keùo daøi chuoãi 720C/10 phuùt (Nguyeãn Ngoïc Haûi, TBE coù 0,1% ethidium bromide trong 30 phuùt. 2002). Keát quaû ñöôïc ñoïc döôùi ñeøn UV, ethidium bromide Sau khi khueách ñaïi, saûn phaåm PCR ñöôïc ñieän di lieân keát vôùi DNA seõ phaùt saùng vaø caùc baêng DNA treân gel agarose 1%, moãi gieáng chöùa 10 µl saûn phaåm ñöôïc xaùc ñònh baèng caùch so saùnh vôùi maãu ñoái chöùng khueách ñaïi troän vôùi 2 µl loading dye. Thôøi gian ñieän döông EDL 933. di 35 phuùt, 100 V, 250 mA. Gel ñöôïc ngaâm trong TBE coù 0,1% ethidium bromide trong 30 phuùt. PCR2 phaùt hieän caùc gen stx2e, sta, stb, lt-I (Daãn lieäu cuûa Blanco vaø ctv, 1997) Keát quaû ñöôïc ñoïc döôùi ñeøn UV, ethidium bromide lieân keát vôùi DNA seõ phaùt saùng vaø caùc Hoãn hôïp phaûn öùng 50µl goàm PCR buffer 1X (75 baêng DNA ñöôïc xaùc ñònh baèng caùch so saùnh vôùi mM tris-HCl ôû pH=8.8, 20 mM NH4(SO4)2); MgCl2 maãu ñoái chöùng döông H44 vaø thang DNA chuaån (ladder).44 L 4 5 6 1,5 mM; moãi loaïi dNTP 200 µM, moài Stx2e 225 ng, Ñoaïn moài Trình töï oligonucleotide (5’ 3’) Kích côõ (bp) CCTTAACTAAAAGGAATATA Stx2e - F 230 CTGGTGGTGTATGATTAATA Stx2e - R LT-I - F GGCGACAGATTATACCGTGC 696 CCGAATTCTGTTATATATGTC LT-I - R STa - F TTAATAGCACCCGGTACAAGCAGG 147 CTTGACTCTTCAAAAGAGAAAATTAC STa - R STb - F ATCGCATTTCTTCTTGCATC 172 GGGCGCCAAAGCATGCTCC STb - R 1 H44 L 4 5 6 696 bp (lt-I) 500 bp 230 bp (stx2e) 172 bp (stb) Hình 2. Keát quaû ñieän di saûn phaåm PCR ñeå phaùt hieän gen stx2e, lt-I, sta vaø stb H44: ñoái chöùng döông (lt-I, stb, stx2e); Lad: thang chuaån; 1, 4, 5, 6 maãu xeùt nghieäm Ñaïi hoïc Noâng Laâm Tp. HCM Taïp chí KHKT Noâng Laâm nghieäp, soá 3/2007
NGHIEÂN CÖÙU KHOA HOÏC KYÕ THUAÄT 56 Baûng 1. Toång soá vi khuaån E. coli trong phaân vaø thòt cuûa boø, heo Soá Keát quaû phaùt hieän Toång soá E. coli (X ± SE) Loaïi maãu maãu gen ñoäc löïc cuûa E. coli (MPN/g) 9,5*106 ± 7,4*106 Phaân boø 10 Khoâng phaùt hieän Phaân 102*106 ± 46,3*106 Phaân heo 10 Khoâng phaùt hieän 14,8*104 ± 4,2*104 Thòt boø 8 Khoâng phaùt hieän Thòt 0,4*104 ± 1,1*104 Thòt heo 23 Khoâng phaùt hieän Töø nhöõng lyù do treân, chuùng toâi cho raèng öu ñieåm KEÁT QUAÛ VAØ THAÛO LUAÄN cuûa phöông phaùp ñònh löôïng laø xaùc ñònh ñöôïc toång soá vi khuaån E. coli nhöng khoâng bao goàm nhöõng Toång soá vi khuaån E. coli vaø keát quaû phaùt hieän doøng E. coli mang gen ñoäc löïc, ñaëc bieät laø nhoùm caùc gen ñoäc löïc cuûa E. coli phaân laäp ñöôïc töø STEC maø tieâu bieåu laø O157:H7 taùc nhaân gaây ngoä phaân vaø thòt boø, heo baèng qui trình ñònh löôïng ñoäc thöïc phaåm ñöôïc quan taâm haøng ñaàu. Do vaäy, toång soá E. coli xaùc ñònh ñöôïc baèng qui trình ñònh Keát quaû xaùc ñònh toång soá E. coli cuûa 10 maãu löôïng chæ phaûn aùnh möùc ñoä oâ nhieãm phaân vaøo thöïc phaân boø bình thöôøng, 10 maãu phaân heo bình phaåm nhöng khoâng thích hôïp cho vieäc phaùt hieän thöôøng, 8 maãu thòt boø vaø 23 maãu thòt heo theo qui caùc gen ñoäc löïc. trình ñònh löôïng ñöôïc trình baøy ôû baûng 1. Keát quaû phaùt hieän moät soá gen ñoäc löïc stx2e, Keát quaû ôû baûng 1 cho thaáy E. coli trong phaân boø sta, stb, lt-I, stx1, stx2, eae, vaø hlyA töông ñoái thaáp hôn phaân heo, thòt boø cao hôn thòt heo. TCVN 7046 – 2002 qui ñònh E. coli treân 1 Toång soá 161 maãu khaûo saùt goàm 10 phaân beâ tieâu gam thòt töôi khoâng quaù 100 vi khuaån, nhö vaäy 8 chaûy, 22 phaân heo con tieâu chaûy, 21 phaân boø bình maãu thòt boø ñeàu khoâng ñaït, 6/23 maãu thòt heo ñaït thöôøng, 25 phaân heo bình thöôøng, 34 beà maët thòt tieâu chuaån (26,1%). boø, vaø 49 beà maët thòt heo. Ñoái vôùi maãu phaân, ria tröïc tieáp treân thaïch MAC, nuoâi caáy ôû 370C. Maãu Toång soá E. coli trung bình treân 1 gam thòt heo thòt ñöôïc caáy chuyeån töø moâi tröôøng loûng CVP qua töông ñoái thaáp hôn treân thòt boø maëc duø E. coli thaïch CT-SMAC. Muïc tieâu cuûa khaûo saùt naøy laø taàm trung bình treân 1 gam phaân heo cao hôn treân phaân soaùt söï hieän dieän cuûa vi khuaån E. coli mang gen boø. Ñieàu naøy coù theå do söï khaùc nhau trong caùch ñoäc löïc. Do vaäy, chuùng toâi khoâng tieán haønh PCR gieát moå, vaän chuyeån vaø baøy baùn. Boø ñöôïc gieát moå cho töøng khuaån laïc rieâng leû maø choïn 4-10 khuaån thuû coâng, khoâng söû duïng nöôùc trong quaù trình haï laïc ñieån hình E. coli ñaïi ñieän cho maãu roài chuyeån thòt, ñöôïc pha loïc taïi loø moå vaø vaän chuyeån ñeán chôï vaøo cuøng moät eppendorf ñeå taùch chieát DNA. Quy leû baèng caùc phöông tieän thoâ sô. Trong khi gieát moå trình m-PCR1 ñeå phaùt hieän gen stx2e, sta, stb, lt- heo, quaøy thòt ñöôïc röûa saïch baèng nöôùc, vaän chuyeån I vaø qui trình m-PCR2 ñeå phaùt hieän gen stx1, stx2, ñeán chôï leû roài môùi pha loïc, ngoaøi ra ngöôøi baùn thòt eae, vaø hlyA. Keát quaû PCR ñöôïc ghi nhaän ôû baûng 2. cuõng thöôøng caïo saïch beà maët thòt tröôùc khi pha loïc, do ñoù thòt heo ít vaáy nhieãm hôn. Gen ñoäc löïc cuûa E. coli phaân laäp ñöôïc töø phaân beâ tieâu chaûy vaø phaân boø bình thöôøng Maëc duø soá löôïng E. coli trong caùc maãu phaân boø, Keát quaû ôû baûng 2 cho thaáy tæ leä maãu phaân beâ heo raát cao, keå caû E. coli treân thòt boø, heo. Tuy nhieân tieâu chaûy coù E. coli mang gen ñoäc löïc stx1, stx2, trong 51 maãu E. coli phaân laäp ñöôïc töø phaân vaø thòt eae, hly, vaø stb ñöôïc phaùt hieän laàn löôït laø 40%, theo qui trình ñònh löôïng ñeàu khoâng phaùt hieän ñöôïc 20%, 30%, 30% vaø 20%. Khoâng phaùt hieän ñöôïc gen gen ñoäc löïc baèng kyõ thuaät multiplex - PCR. stx2e, sta vaø lt-I. Nhö vaäy coù 7/10 (70%) maãu phaân mang moät trong taùm gen ñoäc löïc, haàu heát chuùng Nhieàu nghieân cöùu cho thaáy raèng ôû nhieät ñoä cao thuoäc nhoùm STEC (5/10 maãu), chæ coù 2/10 maãu mang (≥ 440C) nhöõng doøng E. coli gaây beänh phaùt trieån gen saûn sinh ñoäc toá ruoät chòu nhieät (ETEC). yeáu daàn, trong khi E. coli coäng sinh (flora) phaùt trieån nhanh hôn. Hill vaø Carlisle coøn ghi nhaän raèng Trong 21 maãu phaân boø bình thöôøng, coù 13 maãu neáu taêng sinh trong moâi tröôøng ôû 44,50C coù theå (61,9%) phaùt hieän ñöôïc moät trong taùm gen ñoäc löïc laøm maát plasmid maõ hoùa nhöõng yeáu toá ñoäc löïc vaø cuûa E. coli, trong ñoù coù 12/21 (57,1%) maãu mang laøm giaûm soá löôïng nhöõng doøng E. coli gaây beänh coù caùc gen thuoäc nhoùm STEC vaø 4/21 (19,0%) maãu trong thöïc phaåm (daãn lieäu cuûa Doyle vaø Padhye, mang gen saûn sinh ñoäc toá chòu nhieät thuoäc nhoùm 1989). Nhö vaäy taêng sinh theo qui trình cuûa FAO ETEC. Gen stx2 vaø stx1 ñöôïc phaùt hieän vôùi tæ leä (1992) khoâng thích hôïp cho vieäc phaùt hieän caùc gen cao nhaát (42,9% vaø 38,1%), keá ñeán laø caùc gen hly ñoäc löïc cuûa nhöõng doøng E. coli gaây beänh. Taïp chí KHKT Noâng Laâm nghieäp, soá 3/2007 Ñaïi hoïc Noâng Laâm Tp. HCM
NGHIEÂN CÖÙU KHOA HOÏC KYÕ THUAÄT 57 Baûng 2. Keát quaû phaùt hieän gen ñoäc löïc stx2e, sta, stb, lt-I, stx1, stx2, eae, vaø hlyA Gen ñoäc löïc S oá maãu coù gen ñoäc löïc Soá M aãu m-PCR1 m-PCR2 maãu STEC ETEC Chung s tx2e sta stb lt-I stx1 stx2 eae hlyA P haân beâ 10 5 2 7 0 0 2 0 4 2 3 3 tieâu chaûy 50,0% 20,0% 70,0% 0 0 20,0 40,0 20,0 30,0 30,0 P haân boø 21 12 4 13 0 1 3 0 8 9 1 4 bình 57,1% 19,0% 61,9% 0 4,8 14,3 38,1 42,9 4,8 19,0 thöôøn g Beà maët 34 19 1 21 3 0 1 0 11 17 8 9 thòt boø 55,9% 2.9% 61,8% 8,8 0 2,9 32,4 50,0 23,5 26,5 T oån g 65 36 7 41 3 1 6 0 23 28 12 16 coän g 55,4 10,8 63,1 4,6 1,5 9,2 35,4 43,1 18,5 24,6 P haân heo 06 2 33,3% 3 3 2 0 2 0 2 0 0 0 con tieâu 50,0% 50,0% 33,3 0 33,3 0 33,3 0 0 0 chaûy P haân heo 16 10 13 14 5 4 13 0 0 8 2 1 cai söõa 62,5% 81,3% 87,5% 31,3 25,0 81,3 0 0 50,0 12,5 6,3 tieâu chaûy Phaân heo 25 5 7 10 4 0 7 0 0 1 2 2 bình 20% 28% 40,0% 16,0 28,0 0 0 4,0 8,0 8,0 thöôøn g Beà maët 49 12 0 12 0 0 0 0 0 11 2 2 thòt heo 24,5% 0% 24,5% 0 0 0 0 0 22,5 4,1 4,1 T oån g 96 29 23 39 11 4 23 0 0 22 6 5 coän g 30,2% 23,9% 40,6% 11,5 4,2 24,0 0 0 22,9 6,3 5 ,2 vaø stb (19,0% vaø 14,3%), thaáp nhaát laø caùc gen eae, Ñeå taêng khaû naêng phaùt trieån cuûa nhoùm E. coli sta (4,8%), chöa phaùt hieän ñöôïc gen lt-I. mang gen ñoäc löïc STEC (Shiga toxin E. coli) treân thòt, chuùng toâi söû duïng moâi tröôøng MAC boå sung theâm Gen ñoäc löïc cuûa E. coli phaân laäp ñöôïc töø phaân ñöôøng sorbitol, khaùng sinh cefixime vaø tellurite. Treân heo con tieâu chaûy/phaân bình thöôøng CT-SMAC, E. coli O157H7, vaø khoaûng 6% caùc serotype non-O157H7 cuûa STEC taïo khuaån laïc khoâng maøu hoaëc Tæ leä maãu phaân heo cai söõa tieâu chaûy coù E. coli maøu xaùm vôùi taâm ñuïc, caùc E. coli khaùc cho khuaån laïc mang gen ñoäc löïc stx1, stx2, eae, hly, stx2e, sta vaø maøu hoàng gioáng nhö treân MAC. stb laàn löôït laø 0%; 50%; 12,5%; 6,3%; 31,3%; 25%; vaø 81,3%. Coù 14/16 (87,5%) maãu mang moät trong Treân thòt boø, 21/34 (61,8%) maãu nhieãm E. coli taùm gen ñoäc löïc, trong ñoù coù 10/16 maãu (62,5%) mang gen ñoäc löïc. Taàn soá phaùt hieän ñöôïc gen stx1, mang gen saûn sinh ñoäc toá shiga (STEC) vaø 13/16 stx2, eae, hly vaø stb laàn löôït laø 32,4% ; 50% ; maãu (81,3%) mang gen sinh ñoäc toá ruoät chòu nhieät 23,5% ; 26,5% vaø 2,9%, chöa phaùt hieän ñöôïc gen (ETEC). sta vaø lt-1 (Baûng 2). Gen stx2e gaây beänh phuø thuõng treân heo cai söõa ñöôïc phaùt hieän trong 3 maãu thòt Trong khi ñoù, phaân heo con tieâu chaûy chæ phaùt boø, coù theå do söï nhieãm phaân heo thòt mang truøng hieän ñöôïc gen stx1, stx2e vaø stb vôùi tæ leä baèng nhau trong quaù trình haï thòt. 33,3%. Töông töï, 12/49 (24,5%) maãu thòt heo nhieãm E. Ñoái vôùi phaân heo bình thöôøng, trong 25 maãu coù coli mang gen ñoäc löïc. Phaùt hieän ñöôïc 11/49 (22,5%) 10 maãu mang ít nhaát moät trong taùm gen ñoäc löïc maãu mang gen stx2, 2/49 (4,1%) maãu mang gen (chieám 40%), trong ñoù coù 5/25 maãu (20%) mang eae vaø hly, khoâng phaùt hieän ñöôïc gen stx1 vaø caùc gen saûn sinh ñoäc toá Shiga (STEC) vaø 7/25 maãu gen cuûa nhoùm ETEC. Toùm laïi E. coli mang gen (28,0%) mang gen sinh ñoäc toá ruoät chòu nhieät ñoäc löïc phaùt hieän ñöôïc treân thòt heo thaáp hôn thòt (ETEC). Gen stb ñöôïc phaùt hieän vôùi tæ leä cao nhaát boø (24,5% so vôùi 61,8%). (28%), keá ñeán laø gen stx2e (16%) vaø gen eae, hly vaø stx2 laàn löôït laø 8%, 8% vaø 4%. Chöa phaùt hieän THAÛO LUAÄN ñöôïc gen stx1, sta vaø lt-I. Keát quaû khaûo saùt cho thaáy tæ leä maãu phaân coù E. Gen ñoäc löïc cuûa E. coli phaân laäp ñöôïc töø beà coli mang gen saûn sinh ñoäc toá Shiga (STEC) ôû phaân maët thòt boø vaø heo boø bình thöôøng vaø phaân beâ tieâu chaûy laàn löôït laø Ñaïi hoïc Noâng Laâm Tp. HCM Taïp chí KHKT Noâng Laâm nghieäp, soá 3/2007
NGHIEÂN CÖÙU KHOA HOÏC KYÕ THUAÄT 58 Toång soá E. coli ñöôïc xaùc ñònh baèng qui trình 57,1% vaø 50%. Trong khi ñoù, coù 20% maãu phaân heo bình thöôøng mang gen saûn sinh ñoäc toá Shiga. ñònh löôïng chæ phaûn aùnh möùc ñoä oâ nhieãm phaân Ngöôïc laïi, trong phaân heo cai söõa tieâu chaûy, tæ leä cuûa thöïc phaåm nhöng khoâng thích hôïp cho vieäc naøy laø 62,5%. Ngoaøi ra, E. coli mang gen ñoäc löïc phaùt hieän caùc gen ñoäc löïc cuûa nhoùm STEC vaø ETEC. phaùt hieän ñöôïc treân thòt heo thaáp hôn thòt boø Trong taùm gen ñoäc löïc cuûa E. coli trong caùc loaïi (24,5% so vôùi 61,8%).Nhö vaäy STEC hieän dieän khaù maãu phaân tích, stx1 hieän dieän nhieàu nhaát trong phoå bieán trong phaân boø bình thöôøng, phaân beâ tieâu chaûy, phaân heo cai söaõ tieâu chaûy vaø treân thòt boø phaân boø bình thöôøng, phaân beâ tieâu chaûy vaø treân thòt boø gieát moå thuû coâng; gen stx2 hieän dieän nhieàu gieát moå thuû coâng hoaëc xuaát hieän khoâng thöôøng xuyeân trong phaân heo bình thöôøng vaø treân thòt trong phaân boø bình thöôøng, phaân heo con tieâu chaûy, heo. Keát quaû cuûa chuùng toâi töông töï nhö nhaän ñònh treân thòt boø gieát moå thuû coâng vaø hieän dieän ôû möùc trung bình treân thòt heo; gen stb vaø stx2e hieän dieän cuûa Beutin vaø ctv (1995). Hoï ñaõ cho raèng nhöõng nhieàu trong phaân heo cai söõa tieâu chaûy. Gen hly doøng STEC toàn taïi trong phaân bình thöôøng cuûa thuù nuoâi khoûe maïnh, nhaát laø trong phaân thuù thuoäc hieän dieän ôû möùc trung bình trong phaân boø, beâ tieâu loaøi nhai laïi. Ngöôøi tieâu duøng caûm nhieãm STEC do chaûy vaø thòt boø nhöng khaù thaáp trong phaân heo vaø aên phaûi thöùc aên bò nhieãm hoaëc tieáp xuùc tröïc tieáp thòt heo. Nhö vaäy, phaân boø vaø beâ coù theå laø nguoàn vôùi STEC töø ñoäng vaät. Ngöôøi nhieãm STEC coù theå löu cöõu chính cuûa STEC. tieâu chaûy hoaëc traàm troïng hôn thì vieâm keát traøng TAØI LIEÄU THAM KHAÛO xuaát huyeát (HC) hoaëc hoäi chöùng huyeát nieäu (HUS) ñe doïa ñeán tính maïng cuûa ngöôøi vaø ñoäng vaät (Karmali, 1989); treû em coù theå töû vong do tieâu chaûy Beutin L., Geier D., Steinruck H., Zimmermann vaø toån thöông thaän caáp (Nataro vaø Kaper, 1998). S., and Scheutz F., 1993. Prevalence and some properties of verotoxin (Shiga – like toxin) – producing Escherichia coli in seven different Do ñoù, veä sinh toát cho thuù haï thòt, veä sinh trong species of healthy domestic animals. J. Clin. luùc haï thòt vaø phaân phoái laø bieän phaùp haøng ñaàu ngaên Microbiol. 31:2483 – 2488. ngöøa vaáy nhieãm STEC töø phaân ñeán thòt nhaèm ñaûm baûo veä sinh an toaøn thöïc phaåm cho ngöôøi tieâu duøng. Beutin L., Geier D., Zimmermann S., and Karch Gen stx2e chòu traùch nhieäm saûn sinh ñoäc toá vero H., 1995. Virulence markers of Shiga - like toxin chæ ñöôïc phaùt hieän ôû E. coli trong phaân heo con producing Escherichia coli strains originating from healthy domestic animals of difference species. J. theo meï tieâu chaûy (33%), phaân heo cai söaõ tieâu Clin. Microbiol. 33:631–635. chaûy (31,3%) vaø phaân heo bình thöôøng (16%). Ñieàu naøy phuø hôïp vôùi keát luaän cuûa Beutin vaø ctv (1993), stx2e laø moät bieán chuûng cuûa stx2, bieán chuûng naøy Blanco M., Blanco J.E, Gonzales E.A., Mora A., chæ hieän dieän ôû E. coli trong phaân heo. Keát quaû Jasen W., Gomes T.A.T., Zerbini L.F., Yano T., khaûo saùt naøy cho thaáy trong phaân heo bình thöôøng de Castro A.F.P., and Blanco J., 1997. Genes vaãn hieän dieän caùc doøng E. coli sinh ñoäc toá vero gaây coding for enterotoxins and verotoxins in porcine Escherichia coli strains belonging to different beänh tieâu chaûy vaø phuø thuõng cho heo con, ñaëc bieät O:K:H serotypes: Relationship with phenotype. J. laø treân heo sau cai söõa. Do ñoù, veä sinh toát taïi chuoàng Cli. Mircobiol. 35:2958-2963. nuoâi heo con, quaûn lyù “cuøng vaøo, cuøng ra” vaø quaûn lyù dinh döôõng hôïp lyù laø bieän phaùp phoøng ngöaø tieâu Doyle M.P. and Padhye V.V., 1989. Escherichia chaûy vaø phuø thuõng cho heo con. coli. In Foodborne bacterial pathogens (Ed: M.P. Ngoaøi ra, caùc gen sinh ñoäc toá ruoät cuûa E. coli thuoäc Doyle). Marcel Decker Inc. NY. pp235-281. nhoùm ETEC, ñaëc bieät laø gen stb hieän dieän khaù phoå bieán trong E. coli ôû phaân heo cai söõa tieâu chaûy (81,3%), FAO, 1992. Microgiological analysis in the food control laboratory. phaân heo con theo meï tieâu chaûy (33,3%), trong phaân boø vaø heo bình thöôøng thì tæ leä naøy thaáp hôn. Theo Blanco vaø ctv (1997), gen stb xuaát hieän vôùi tæ leä cao Handl C.E., Olsson E., and Flock J.I., 1992. nhaát 78,4% (58/74 maãu) so vôùi caùc gen ñoäc löïc khaùc Evaluation of three different STb assays and cuûa E. coli phaân laäp töø phaân heo con tieâu chaûy. OÂng comparision of enterotoxin pattern over a five-year period in Swedish porcine Escherichia coli. Diagn. keát luaän raèng ñoäc toá STb goùp phaàn ñaùng keå trong hoäi Microbiol. Infect. Dis. 15:505-510. chöùng tieâu chaûy ôû heo. Nhaän ñònh naøy cuõng phuø hôïp vôùi keát quaû nghieân cöùu cuûa Handl vaø ctv (1992), Harel vaø ctv (1991). Harel J., Lapointe H., Fallara A., Lorrtie A., Bigras-Poulin M., Lariviere S., and Fairbrother KEÁT LUAÄN J.M., 1991. Detection of genes for fimbrial antigens and enterotoxins associated with Escherichia coli Taïp chí KHKT Noâng Laâm nghieäp, soá 3/2007 Ñaïi hoïc Noâng Laâm Tp. HCM
NGHIEÂN CÖÙU KHOA HOÏC KYÕ THUAÄT 59 serogroups isolated from pig with diarrhea. J. Clin. Nguyen Ngoc Hai, 2002. Maladie de l’edemedu Microbiol. 29:745-752 porc au Vietnam: carateuørisation des sou ches Escherichia coli r esponsables, facteurs de Karmali M. A., 1989. Infection by verocytotoxin – pathogenicite et vaccination. PhD Thesis. producing Escherichia coli . J. Clin. Microbiol. Rev. Universite de Toulouse, France. 2:15–38. Paton A. W. and Paton J. C., 1998. Detection and characterization of Shiga toxigenic. Escherichia coli Nataro J. P., and Kaper J. B., 1998. Diarrheagenic Escherichia coli. Clin. Microbiol. Reviews. 11:142–201. by using multiplex – PCR assays for stx1, stx2, eaeA, enterohemorrhagic Escherichia coli hlyA, rfb O111, and rfb O157. J. Clin. Microbiol. 36:598–602. Ñaïi hoïc Noâng Laâm Tp. HCM Taïp chí KHKT Noâng Laâm nghieäp, soá 3/2007

CÓ THỂ BẠN MUỐN DOWNLOAD

LV.15: Bộ Đồ Án Tốt Nghiệp Chuyên Ngành Cơ Khí

65 tài liệu

2428 lượt tải

THÔNG TIN

TRỢ GIÚP

HỖ TRỢ KHÁCH HÀNG

Theo dõi chúng tôi

Chịu trách nhiệm nội dung:

Nguyễn Công Hà - Giám đốc Công ty TNHH TÀI LIỆU TRỰC TUYẾN VI NA

LIÊN HỆ

Địa chỉ: P402, 54A Nơ Trang Long, Phường 14, Q.Bình Thạnh, TP.HCM

Hotline: 093 303 0098

Email: support@tailieu.vn

Giấy phép Mạng Xã Hội số: 670/GP-BTTTT cấp ngày 30/11/2015 Copyright © 2022-2032 TaiLieu.VN. All rights reserved.