BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO<br />
TRƢỜNG ĐẠI HỌC SỬ PHẠM TP. HỒ CHÍ MINH<br />
KHOA SINH HỌC<br />
---------------------<br />
<br />
BÁO CÁO TỔNG KẾT<br />
ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP CƠ SỞ<br />
<br />
ĐỀ TÀI :<br />
BƢỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU SỬ DỤNG VI SINH VẬT ĐỂ<br />
SẢN XUẤT CHẾ PHẨM PROBIOTIC PHÒNG VÀ TRỊ<br />
BỆNH ĐƢỜNG RUỘT CHO HEO<br />
MÃ SỐ CS. 2005. 23. 92<br />
<br />
CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI<br />
TS. Trần Thanh Thúy<br />
<br />
TP. HỒ CHÍ MINH - 2006<br />
<br />
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO<br />
TRƢỜNG ĐẠI HỌC SỬ PHẠM TP. HỒ CHÍ MINH<br />
KHOA SINH HỌC<br />
---------------------<br />
<br />
BÁO CÁO TỔNG KẾT<br />
ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP CƠ SỞ<br />
<br />
ĐỀ TÀI :<br />
BƢỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU SỬ DỤNG VI SINH VẬT ĐỂ<br />
SẢN XUẤT CHẾ PHẨM PROBIOTIC PHÒNG VÀ TRỊ<br />
BỆNH ĐƢỜNG RUỘT CHO HEO<br />
MÃ SỐ CS. 2005. 23. 92<br />
<br />
CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI<br />
TS. Trần Thanh Thúy<br />
<br />
TP. HỒ CHÍ MINH - 2006<br />
<br />
MỤC LỤC<br />
MỞ ĐẦU ................................................................................................................................... 1<br />
CHƢƠNG 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU .................................................................................... 3<br />
1.1. Tổng quan về probiotic ....................................................................................................... 3<br />
1.1.1. Lƣợc sử nghiên cứu probiotic .......................................................................................... 3<br />
1.1.2. Thành phần và đặc điểm vi sinh vật đƣợc sử dụng trong probiotic ................................. 3<br />
1.1.3. Cơ chế tác động của probiotic.......................................................................................... 5<br />
1.1.4. Vai trò của probiotic ........................................................................................................ 8<br />
1.1.5. Tình hình nghiên cứu và sử dụng probiotic trên TG và VN .......................................... 11<br />
1.2. Sơ lƣợc về vi sinh vật probiotic ........................................................................................ 13<br />
A. Vi khuẩn lactic .................................................................................................................... 13<br />
1.2.1.<br />
Đặc điểm hình thái ......................................................................................... 14<br />
1.2.2.<br />
Phân loại vi khuẩn lactic ................................................................................ 14<br />
1.2.3. Quá trình lên men lactic ................................................................................................. 16<br />
1.2.3.1. Lên men lactic đồng hình ............................................................................................ 16<br />
1.2.3.2. Lên men Lactic dị hình ............................................................................................... 17<br />
1.2.4. Các yếu tố ảnh hƣởng đến sự sinh trƣởng, phát triển của vi khuẩn lactic ..................... 17<br />
1.2.4.1. Nguồn cacbon ............................................................................................................. 17<br />
1.2.4.2. Nguồn nitơ .................................................................................................................. 18<br />
1.2.4.3. Các muối vô cơ ........................................................................................................... 18<br />
1.2.4.4. Các chất sinh trƣởng ................................................................................................... 18<br />
1.2.4.5. Oxy.............................................................................................................................. 19<br />
1.2.4.6. Nhiệt độ ....................................................................................................................... 19<br />
1.2.4.7. pH................................................................................................................................ 20<br />
1.2.5. ứng dụng của vi khuẩn lactic trong sản xuất các chế phẩm sình học phục vụ đời sống 20<br />
B. Nấm men ............................................................................................................................. 21<br />
1.3. Tổng quan về heo .............................................................................................................. 24<br />
1.3.1.<br />
Vị trí phân loại của heo .................................................................................. 24<br />
1.3.2. Đặc điểm sinh lý tiêu hóa ở heo con .............................................................................. 24<br />
1.3.2.1. Đặc điểm bộ máy tiêu hóa .......................................................................................... 24<br />
1.3.2.2. Thành phần hệ vi sinh vật đƣờng ruột ........................................................................ 25<br />
1.3.3. Các bệnh đƣờng ruột ở heo con ..................................................................................... 25<br />
1.3.3.1. Bệnh tiêu chảy ở heo con do E. coli ........................................................................... 25<br />
1.3.3.2. Tiêu chảy do Saimonella (Phó thƣơng hàn)................................................................ 26<br />
1.3.4. Các biện pháp phòng và điều trị .................................................................................... 26<br />
1.3.4.1. Phòng bệnh.................................................................................................................. 26<br />
1.3.4.2. Điều trị ........................................................................................................................ 27<br />
<br />
CHƢƠNG 2. VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ........................................... 29<br />
2.1. Vật liệu .............................................................................................................................. 29<br />
2.1.1. Nguyên liệu .................................................................................................................... 29<br />
2.1.2. Môi trƣờng (xem Phần phụ lục) ..................................................................................... 29<br />
2.2. Phƣơng pháp nghiên cứu .................................................................................................. 29<br />
2.2.1. Phân lập vi khuẩn lactic theo phƣơng pháp Koch [13] .................................................. 29<br />
2.2.2. Xác định khả năng sinh axit tổng bằng phƣơng pháp cấy chấm điểm [12], [13], [25],<br />
[36], [37] .................................................................................................................................. 29<br />
2.2.3.<br />
Định lƣợng axit lactic bằng phƣơng pháp chuẩn độ Therner [12], [13], [25],<br />
[36], [37]<br />
30<br />
2.2.4.<br />
Nghiên cứu các đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa .................................... 30<br />
2.2.5. Xác định hoạt tính ức chế vỉ khuẩn kiểm định bằng phƣơng pháp khoan lỗ thạch [12],<br />
[13], [25], [36], [37]. ................................................................................................................ 32<br />
2.2.6. Hoạt tính đề kháng với các chất kháng sinh của vi khuẩn lactic ................................... 33<br />
2.2.7. Phƣơng pháp bảo quản giống VK lactic bằng phƣớng pháp đông khô ......................... 34<br />
2.2.8. Xác định gián tiếp mật độ tế bào bằng phƣơng pháp đếm số khuẩn lạc mọc trên môi<br />
trƣờng thạch [12], [13], [36], [37] ........................................................................................... 35<br />
2.2.9. Khảo sát sự sinh trƣởng và và các yếu tố ảnh hƣởng đến khả năng sinh trƣởng của vi<br />
khuẩn lactic bằng phƣơng pháp đo mật độ quang [12], [13] ................................................... 35<br />
2.2.10.<br />
Khảo sát sự ảnh hƣởng của các yếu tố môi trƣờng đến khả năng tạo sinh<br />
khối của tế bào nấm men bằng phƣơng pháp cân sinh khối tƣơi ............................................. 38<br />
2.2.11.<br />
Phƣơng pháp tổ hợp giống vi khuẩn lactic [12], [13], [36], [37] ............... 38<br />
2.2.12. Tạo chế phẩm probiotic ............................................................................................... 39<br />
2.2.13. Phƣơng pháp thử nghiệm chế phẩm trên heo con sau cai sữa ..................................... 40<br />
CHƢƠNG 3. KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN............................................................................. 42<br />
3.1. Phân lập tuyển chọn các chủng VSV có các đặc tính phù hợp với yêu cầu tạo chế phẩm<br />
probiotic ................................................................................................................................... 42<br />
3.1.1.<br />
Phân lập và sơ bộ tuyển chọn Vklactic .......................................................... 42<br />
3.1.2.Tuyển chọn các chủng VK lactic - probiotic .................................................................. 42<br />
3.1.2.1. Khả năng sinh axit lactic của các chủng ..................................................................... 43<br />
3.1.2.2. Khả năng đối kháng với các vi khuẩn kiểm định........................................................ 44<br />
3.1.2.3. Khảo sát hoạt tính đề kháng với các chất kháng sinh ................................................. 46<br />
3.2. Nghiên cứu các đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa của 3 chủng vi khuẩn lactic tuyển<br />
chọn .......................................................................................................................................... 48<br />
3.2.1.<br />
Các đặc điểm hình thái của chủng B, N4, L2 .................................................. 48<br />
3.2.2. Các đặc điểm sinh lý, sinh hóa của 3 chủng B, N4, L2................................................... 48<br />
3.3. Nghiên cứu đặc điểm sinh học của chủng nấm men ......................................................... 52<br />
3.3.1. Khả năng đề kháng các kháng sinh của chủng Saccharomyces cerevisiae.................... 52<br />
3.3.2. Khảo sát khả năng đối kháng với các vi khuẩn kiểm định ............................................ 53<br />
3.3.3. Nghiên cứu các đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa chủng nấm men ......................... 54<br />
3.4. Ảnh hƣởng một số điều kiện môi trƣờng đến sự tạo thành sinh khối các chủng nghiên<br />
cứu............................................................................................................................................ 55<br />
A. Vi khuẩn lactic .................................................................................................................... 55<br />
<br />
3.4.1. Ảnh hƣởng của môi trƣờng nuôi cấy ............................................................................. 55<br />
3.4.2. Ảnh hƣởng của các điều kiện môi trƣờng đến sự tạo thành sinh khối của các chủng vi<br />
khuẩn lactic .............................................................................................................................. 57<br />
3.4.2.1. Nhiệt độ nuôi cấy ........................................................................................................ 57<br />
3.4.2.2. pH ban đầu .................................................................................................................. 59<br />
3.4.2.3. Nguồn thức ăn nitơ ..................................................................................................... 60<br />
3.4.2.4. Nồng độ cao nấm men ................................................................................................ 62<br />
3.4.2.5. Nguồn thức ăn cacbon ................................................................................................ 63<br />
3.4.2.6. Nồng độ saccharose .................................................................................................... 64<br />
3.4.3. Động thái quá trình tạo sinh khối tế bào của các chủng vi khuẩn lactic trong điều kiện<br />
tối ƣu ........................................................................................................................................ 65<br />
B. Nấm men ............................................................................................................................. 66<br />
3.5. Tạo chế phẩm probiotic .................................................................................................... 68<br />
3.5.1. Đông khô các chủng VSV.............................................................................................. 68<br />
3.5.2.<br />
Xác định tỷ lệ phối trộn các chủng trong các chế phẩm ................................ 68<br />
3.5.3. Đóng gói tạo chế phẩm probiotic ................................................................................... 71<br />
3.6. Kiểm tra chất lƣợng chế phẩm .......................................................................................... 72<br />
3.6.1. Khả năng sống sót của các chủng vsv sau quá trình đông khô ...................................... 72<br />
3.6.2. Khả năng đối kháng với các VK kiểm định của các chủng trong chế phẩm ................. 73<br />
3.7. Xây dựng quy trình công nghệ tạo chế phẩm probiotic .................................................... 75<br />
3.8. Bƣớc đầu thử nghiệm chế phẩm P-SP-01 trên heo con sau cai sữa .................................. 76<br />
3.8.1. Tỷ lệ tiêu chảy ở heo con sau cai sữa ............................................................................ 76<br />
3.8.2. Tăng trọng ở heo con sau cai sữa ................................................................................... 78<br />
3.8.3. Hệ số tiêu tốn thức ăn .................................................................................................... 79<br />
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ...................................................................................................... 82<br />
TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TRONG NƢỚC .......................................................... 84<br />
PHỤ LỤC.................................................................................................................................... i<br />
<br />