Bước đầu nghiên cứu nhân giống in vitro một số giống hồ tiêu (Piper Nigrum L.) sạch virut

27(3): 39-45 T¹p chÝ Sinh häc 9-2005<br /> <br /> <br /> <br /> B−íc ®Çu nghiªn cøu nh©n gièng in vitro mét sè gièng Hå tiªu<br /> (Piper nigrum L.) s¹ch virut<br /> <br /> §OµN THÞ ¸I THUYÒN, TH¸I XU¢N DU, §ç §¡NG GI¸P<br /> ViÖn Sinh häc nhiÖt ®íi<br /> NGUYÔN T¡NG T¤N<br /> ViÖn Khoa häc Kü thuËt N«ng nghiÖp miÒn Nam<br /> <br /> Trong nh÷ng n¨m gÇn ®©y, viÖc t¨ng diÖn gièng ®−îc trång phæ biÕn t¹i c¸c tØnh miÒn<br /> tÝch trång hå tiªu å ¹t ®' dÉn tíi t×nh tr¹ng c©y §«ng Nam Bé do ViÖn Khoa häc Kü thuËt<br /> hå tiªu bÞ bÖnh, trong ®ã cã bÖnh do virut g©y N«ng nghiÖp miÒn Nam cung cÊp, gåm c¸c<br /> ra. KÕt qu¶ ®iÒu tra t×nh h×nh bÖnh virut ë hå gièng: Vinh Linh (ViÖt Nam); Lada<br /> tiªu t¹i mét sè tØnh miÒn §«ng Nam Bé cho Belangtoeng (In®«nªxia); Karimunda (Ên §é).<br /> thÊy cã 42-93% v−ên hå tiªu cã triÖu chøng<br /> C©y hå tiªu ®−îc trång trong bÇu ®Êt t¹i<br /> nhiÔm virut biÓu hiÖn trªn l¸ vµ c©y nh− ®èm<br /> v−ên −¬m cña ViÖn Sinh häc nhiÖt ®íi. Sau 2-3<br /> hoa l¸, nh¨n phiÕn l¸, xo¨n mÐp l¸, tãp ngän,<br /> tuÇn, c©y ra chåi non. C¾t c¸c chåi cã chiÒu dµi<br /> c©y lïn dÞ d¹ng,… [3, 6]. Virut ®−îc ph¸t hiÖn<br /> tõ 2-3cm vµ c¸c cµnh cã tõ 5-6 ®èt. C¸c chåi<br /> trong mÉu l¸ hå tiªu lµ c¸c virut ToMV ®−îc röa s¹ch vµ s¸t trïng b»ng cån 700. MÉu<br /> (tobacco mosaic virus), PVX (potato virus X), cÊy ®−îc khö trïng bÒ mÆt b»ng dung dÞch tÈy<br /> PVY (potato virus Y) vµ CMV (cucumber javel kho¶ng 30-40 phót hoÆc 0,1% HgCl2-10<br /> mosaic virus) [2, 3]. phót hoÆc kÕt hîp víi sö dông chÊt kh¸ng sinh<br /> §' cã mét sè c«ng tr×nh nghiªn cøu nh©n 0,5% xªfotaxin tõ 1-24 giê.<br /> gièng c©y hå tiªu kh¸ng bÖnh Phytophthora C¸c chåi non v« trïng ®−îc nu«i cÊy trªn<br /> b»ng kü thuËt t¸i sinh chåi tõ nu«i cÊy rÔ, m«i tr−êng Murashige and Skoog, 1962 (MS)<br /> ®o¹n th©n, cuèng vµ m¶nh l¸ cña c©y Piper cã bæ sung 6-benzylaminopurin-BA (0-5,0<br /> columbrinum L.; hoÆc t¸i sinh c©y tõ ph«i mg/l), indole-3-butyric axit-IBA (0-1,0 mg/l)<br /> s«ma, ®Ønh sinh tr−ëng cña Piper nigrum cv. hoÆc thidiazuron-TDZ (0-0,22 mg/l) ®Ó t¹o<br /> Karimunda, Panniyur-1; hoÆc tõ nu«i cÊy m« chåi. §Ó nghiªn cøu sù t¸i sinh chåi tõ m« sÑo,<br /> sÑo cña Piper longum L. [1, 4, 5, 7] nh−ng chóng t«i bæ sung BA (0-10 mg/l), IBA (0,5<br /> ch−a cã c«ng tr×nh nghiªn cøu ë ViÖt Nam vÒ mg/l) vµ kinetin (0,5 mg/l) vµo m«i tr−êng nu«i<br /> nh©n gièng c©y hå tiªu s¹ch virut. cÊy.<br /> Néi dung chÝnh cña bµi b¸o nµy lµ nghiªn §èi víi m«i tr−êng t¹o rÔ, chóng t«i sö dông<br /> cøu kh¶ n¨ng lo¹i bá mÇm bÖnh néi sinh trong c¸c chåi lín dµi 3-4cm cã tõ 2-3 cÆp l¸ cÊy trªn<br /> mÉu cÊy hå tiªu bëi sö dông mét sè chÊt m«i tr−êng MS cã kho¸ng ®a l−îng gi¶m mét<br /> kh¸ng sinh; ¶nh h−ëng cña c¸c chÊt ®iÒu hßa nöa vµ bæ sung axit-1-napthalen axªtic NAA<br /> sinh tr−ëng thùc vËt ®Õn sù h×nh thµnh chåi, (0,2-0,5 mg/l) hoÆc than ho¹t tÝnh.<br /> t¸i sinh chåi, c©y tõ m« sÑo ë c¸c ®èt cÊy<br /> còng nh− sö dông kü thuËt ELISA ®Ó x¸c ®Þnh TÊt c¶ c¸c mÉu cÊy ®−îc ®Æt trong ®iÒu kiÖn<br /> gièng s¹ch virut trong nh©n gièng in vitro mét phßng nu«i cÊy ë nhiÖt ®é 27oC-29oC, c−êng ®é<br /> chiÕu s¸ng 2000 lux, thêi gian chiÕu s¸ng: 12-14<br /> sè gièng hå tiªu (Piper nigrum L.) ®−îc trång<br /> giê/ngµy.<br /> ë c¸c tØnh miÒn Nam ViÖt Nam.<br /> §Ó kiÓm tra mÉu s¹ch virut, c¸c gièng hå<br /> I. PH¦¥NG PH¸p nghiªn cøu tiªu ®−îc gi¸m ®Þnh b»ng kü thuËt ELISA tr−íc<br /> vµ sau khi nu«i cÊy in vitro ®èi víi c¸c lo¹i<br /> C¸c gièng hå tiªu ®−îc nghiªn cøu lµ c¸c virut ToMV, PVX, PVY vµ CMV.<br /> 39<br />  ii. kÕt qu¶ vµ th¶o luËn t«i cã thÓ nhËn ®−îc 25-30% sè mÉu s¹ch hoµn<br /> toµn mÇm bÖnh néi sinh.<br /> 1. Sö dông chÊt kh¸ng sinh trong qu¸ tr×nh<br /> 2. ¶nh h−ëng cña vÞ trÝ ®èt cÊy vµ c¸c chÊt<br /> khö trïng mÉu cÊy<br /> ®iÒu hoµ sinh tr−ëng thùc vËt (§HSTTV)<br /> Hå tiªu lµ mét c©y l©u n¨m, cã nhiÒu mÇm lªn kh¶ n¨ng h×nh thµnh chåi hå tiªu<br /> bÖnh néi sinh nh− nÊm, khuÈn n»m bªn trong m«.<br /> Bëi vËy, mét trong nh÷ng vÊn ®Ò quan träng ®Çu Sau khi ®−îc v« trïng 20 ngµy, c¸c ®èt hå<br /> tiªn cÇn gi¶i quyÕt trong nu«i cÊy in vitro hå tiªu tiªu b¾t ®Çu ®©m chåi míi. Chåi dµi<br /> lµ ph¶i lo¹i bá hoµn toµn mÇm bÖnh néi sinh ®ã. 5-6cm ®−îc c¾t thµnh c¸c ®èt dµi kho¶ng<br /> C¸c ph−¬ng ph¸p khö trïng bÒ mÆt th«ng th−êng 2cm. Mçi ®èt mang mét cÆp l¸ ®−îc cÊy trªn<br /> ®Òu kh«ng thµnh c«ng trong viÖc khö trïng c©y hå m«i tr−êng MS cã bæ sung c¸c chÊt §HSTTV<br /> tiªu. kh¸c nhau. Sau 3-4 tuÇn nu«i cÊy, tõ n¸ch l¸<br /> xuÊt hiÖn chåi míi.<br /> Nguyªn liÖu ban ®Çu lµ c¸c chåi míi h×nh<br /> thµnh cña c©y gièng ®−îc trång c¸ch ly trong nhµ Qua theo dâi ¶nh h−ëng cña vÞ trÝ ®èt cÊy<br /> l−íi vµ phun thuèc trõ nÊm bÖnh, ®' qua kiÓm tra lªn kh¶ n¨ng h×nh thµnh chåi, chóng t«i nhËn<br /> virut. thÊy cã sù kh¸c biÖt râ rÖt vÒ kh¶ n¨ng nµy ë<br /> Qua thùc nghiÖm cho thÊy c¸c mÉu qua xö lý c¸c lo¹i ®èt. ë ®èt ngän, hÇu nh− kh«ng xuÊt<br /> ngay c¶ khi sö dông c¸c chÊt cã kh¶ n¨ng diÖt hiÖn chåi míi, ngay c¶ ë nång ®é BA cao (5<br /> mÇm bÖnh bÒ mÆt cao nh− 0,1-1%HgCl2 (tõ 5-10 mg/l). §èt gi÷a vµ ®èt gèc dÔ dµng t¹o chåi<br /> phót), mÉu cÊy vÉn bÞ nhiÔm trë l¹i sau mét thêi míi h¬n, sè chåi míi h×nh thµnh cã thÓ tíi 4-6<br /> gian nu«i cÊy. Do ®ã, nÕu chØ sö dông c¸c chÊt chåi/®èt (b¶ng 1). Trong ®ã, sù t¹o chåi míi ë<br /> khö trïng bÒ mÆt nh− n−íc tÈy javel hoÆc HgCl2, ®èt gèc lµ nhiÒu h¬n so víi ®èt ngän vµ ®èt<br /> ®Òu kh«ng cho kÕt qu¶ kh¶ quan; toµn bé mÉu sÏ gi÷a.<br /> bÞ nhiÔm sau mét thêi gian dµi nu«i cÊy. Khi nghiªn cøu ¶nh h−ëng cña tæ hîp c¸c chÊt<br /> §Ó mÉu ®−îc v« trïng hoµn toµn, chóng t«i ®' §HSTTV, chóng t«i nhËn thÊy, ë c¸c m«i tr−êng<br /> kÕt hîp sö dông mét sè chÊt kh¸ng sinh nh−: chØ bæ sung BA, kh¶ n¨ng t¹o chåi thÊp ë tÊt c¶<br /> penixillin, streptomyxin vµ xªfotaxin. Trong ®ã, c¸c ®èt cÊy. ThËm chÝ víi nång ®é BA cao (> 5<br /> xªfotaxin võa cã t¸c dông diÖt khuÈn, nÊm bªn mg/l) hoÆc TDZ ë nång ®é 0,02-0,22 mg/l, chåi<br /> ngoµi vµ võa diÖt ®−îc c¸c mÇm bÖnh néi sinh h×nh thµnh còng Ýt h¬n so víi c«ng thøc cã bæ<br /> trong mÉu cÊy. sung NAA hoÆc IBA. Kh«ng ph¶i nång ®é<br /> C¸c b−íc khö trïng mÉu cÊy lÇn l−ît ®−îc xytokinin vµ auxin cao quyÕt ®Þnh sù t¹o chåi ë<br /> thùc hiÖn nh− sau: mÉu sau khi s¸t trïng b»ng cån mÉu cÊy mµ lµ tû lÖ thÝch hîp gi÷a xytokinin/auxin<br /> 70%, ®−îc xö lý trong n−íc tÈy javel (10%)-15 sÏ lµm t¨ng kh¶ n¨ng t¹o chåi ë hå tiªu. Trong c¸c<br /> phót. Sau ®ã ng©m trong dung dÞch 0,1% HgCl2- thÝ nghiÖm, chóng t«i nhËn thÊy ë nång ®é BA = 2<br /> 10 phót. B−íc kÕ tiÕp lµ l¾c trong dung dÞch 0,5% mg/l, IBA = 0,5 mg/l sè chåi ®−îc h×nh thµnh ë<br /> xªfotaxin trªn m¸y l¾c tõ 1-24 giê. Sau mçi b−íc, ®èt gi÷a vµ ®èt gèc cao nhÊt. §iÒu nµy chøng tá,<br /> mÉu ®Òu ®−îc röa 3 lÇn b»ng n−íc cÊt v« trïng. khi bæ sung mét l−îng xytokinin vµ auxin thÝch<br /> hîp, sÏ lµm t¨ng râ rÖt sè chåi h×nh thµnh ë ®èt<br /> Tuy nhiªn, c¸c mÉu ®' qua khö trïng sau 20- cÊy. Khi bæ sung thªm NAA hoÆc IBA trong m«i<br /> 45 ngµy vÉn cã thÓ bÞ t¸i nhiÔm trë l¹i t¹i nh÷ng vÞ tr−êng t¹o chåi víi nång ®é 0,5-1,0 mg/l lµm t¨ng<br /> trÝ tiÕp xóc víi m«i tr−êng nu«i cÊy do mÇm bÖnh<br /> kh¶ n¨ng h×nh thµnh m« sÑo ë c¸c gèc cÊy. ë<br /> néi sinh cßn trong mÉu.<br /> nång ®é auxin (NAA, IBA) cao (≥ 1,0 mg/l), m«<br /> §Ó lµm gi¶m sù t¸i nhiÔm khuÈn mÉu cÊy, sÑo cµng nhiÒu vµ øc chÕ sù h×nh thµnh chåi cña<br /> chóng t«i bæ sung 0,5% xªfotaxin trong m«i mÉu cÊy (b¶ng 1). Tuy nhiªn, chóng t«i nhËn thÊy<br /> tr−êng nu«i cÊy ban ®Çu. Sau ®ã, cÊy truyÒn mÉu cã sù kh¸c biÖt vÒ tÝnh chÊt ë c¸c m« sÑo h×nh<br /> qua m«i tr−êng kh«ng cã chÊt kh¸ng sinh ®Ó t¹o thµnh tõ ë hai lo¹i auxin nµy, m« sÑo h×nh thµnh tõ<br /> chåi míi. Nh− vËy, mÉu lµ nh÷ng chåi non ph¸t m«i tr−êng cã IBA cã mµu vµng nh¹t, cøng vµ dÔ<br /> sinh tõ mÉu v« trïng vµ kh«ng cã kh¶ n¨ng t¸i ph¸t sinh chåi bÊt ®Þnh h¬n so víi m« sÑo ®−îc<br /> nhiÔm trë l¹i. h×nh thµnh trong m«i tr−êng bæ sung NAA cã<br /> Víi ph−¬ng ph¸p khö trïng mÉu trªn, chóng mµu tr¾ng, xèp.<br /> 40<br />  B¶ng 1<br /> <br /> Kh¶ n¨ng t¹o chåi tõ ®èt cÊy ë c¸c nghiÖm thøc<br /> Sè l−îng chåi vµ møc ®é m« sÑo h×nh thµnh<br /> Xytokinin Auxin TDZ<br /> §èt ngän §èt gi÷a §èt gèc<br /> (mg/l) (mg/l) (mg/l)<br /> Chåi M« sÑo Chåi M« sÑo Chåi M« sÑo<br /> BA IBA<br /> 2,0 0 1 - 1-2 - 2 -<br /> 2,0 0,5 1-2 - 4-5 + 5-6 ++<br /> 2,0 1,0 1 - 2 + 2-3 +++<br /> 5,0 0 1 - 2 - 2 -<br /> 5,0 0,5 1 + 2 + 2 +<br /> 5,0 1,0 1 + 2 - - +++<br /> NAA<br /> 2,0 0,25 1 + 1 + 2 +<br /> 2,0 0,5 1 ++ 1-2 ++ 0-1 ++<br /> 2,0 0,1 1 ++ 0 +++ 0 +++<br /> 0,02 1 - 1-2 - 2-3 -<br /> 0,20 1 - 2-3 - 3-4 -<br /> <br /> Ghi chó: Møc ®é h×nh thµnh m« sÑo: -: kh«ng h×nh thµnh; +: Ýt; ++: trung b×nh; +++: nhiÒu.<br /> <br /> 3. ¶nh h−ëng cña c¸c chÊt §HSTTV lªn con hoµn chØnh (b¶ng 2).<br /> kh¶ n¨ng biÖt ho¸ chåi tõ m« sÑo 4. T¹o rÔ<br /> C¸c m« sÑo h×nh thµnh tõ nu«i cÊy ®èt th©n Trong c¸c thùc nghiÖm t¹o rÔ cho c©y hå<br /> ®−îc dïng lµm nguyªn liÖu cho nghiªn cøu kh¶ tiªu, chóng t«i sö dông m«i tr−êng 1/2 MS cã bæ<br /> n¨ng biÖt ho¸ chåi tõ m« sÑo cña c©y hå tiªu. sung NAA (0,1-1,0 mg/l) hoÆc IBA (0,5-1,0<br /> mg/l). ë nh÷ng thÝ nghiÖm cã bæ sung NAA,<br /> Qua c¸c thÝ nghiÖm biÖt ho¸ chåi tõ m« sÑo,<br /> sau 15 ngµy nu«i cÊy cho thÊy: trong m«i tr−êng<br /> chóng t«i nhËn thÊy tÝnh chÊt cña m« sÑo cã<br /> cã nång ®é NAA thÊp (0,1-0,2 mg/l) rÔ h×nh<br /> ph¶n øng kh¸c nhau ®èi víi c¸c chÊt §HSTTV<br /> thµnh kho¶ng 2-3 rÔ/chåi; víi nh÷ng nång ®é<br /> trªn c©y hå tiªu.<br /> NAA cao h¬n (0,5-1,0 mg/l) sè rÔ h×nh thµnh rÊt<br /> M«i tr−êng MS cã bæ sung BA (5 mg/l), Kin nhiÒu, tõ 10-15 rÔ/chåi, tuy nhiªn rÔ th−êng rÊt<br /> (0,5 mg/l) vµ IBA (0,5 mg/l) thÝch hîp nhÊt cho ng¾n, kÐm ph¸t triÓn vµ ë d−íi gèc chåi h×nh<br /> kh¶ n¨ng biÖt ho¸ chåi tõ m« sÑo. ë tæ hîp m«i thµnh c¸c khèi m« sÑo. Nång ®é NAA cµng cao,<br /> tr−êng nµy, tû lÖ m« sÑo t¹o chåi vµ sè chåi trªn khèi m« sÑo cµng nhiÒu vµ g©y øc chÕ sù ph¸t<br /> mét mÉu cÊy lín nhÊt (10,3 chåi/mÉu). triÓn cña rÔ. §èi víi m«i tr−êng cã IBA, sù t¹o<br /> rÔ còng x¶y ra, tuy sè l−îng rÔ Ýt h¬n nh−ng rÔ<br /> M«i tr−êng víi nång ®é BA cao (>5 mg/l) ph¸t triÓn m¹nh h¬n so víi m«i tr−êng cã NAA.<br /> hoÆc bæ sung TDZ ®Òu g©y øc chÕ kh¶ n¨ng biÖt Tuy nhiªn, Philip V. P et al. (1992) ®' sö dông<br /> ho¸ chåi tõ m« sÑo; mét sè chåi ®−îc h×nh thµnh m«i tr−êng 1/2 MS cã chøa nång ®é NAA cao<br /> nh−ng tû lÖ chåi bÞ dÞ d¹ng rÊt lín vµ chåi kÐm (1 mg/l) ®Ó t¹o rÔ gièng hå tiªu Panniyur-1,<br /> ph¸t triÓn khi cÊy truyÒn qua m«i tr−êng t¹o c©y Karimunda. Nh− vËy, sù ra rÔ cña c©y hå tiªu in<br /> 41<br /> vitro thÝch hîp ë m«i tr−êng 1/2MS cã bæ sung s¹ch virut, chóng t«i ®' tiÕn hµnh lÊy mÉu kiÓm<br /> NAA (0,1-0,2 mg/l). tra b»ng kü thuËt ELISA ë 3 giai ®o¹n: tr−íc khi<br /> ®−a vµo nu«i cÊy, giai ®o¹n nh©n chåi in vitro<br /> 5. KiÓm tra gièng hå tiªu s¹ch virut b»ng kü<br /> vµ sau khi ®−a c©y con ra v−ên −¬m. KÕt qu¶<br /> thuËt ELISA<br /> x¸c ®Þnh gièng s¹ch virut ®−îc tr×nh bµy ë b¶ng<br /> §Ó x¸c ®Þnh c¸c gièng hå tiªu hoµn toµn 3.<br /> B¶ng 2<br /> <br /> Kh¶ n¨ng biÖt ho¸ chåi tõ m« sÑo cña c©y hå tiªu ë c¸c nghiÖm thøc<br /> Xytokinin Auxin TDZ % mÉu Sè<br /> NhËn xÐt<br /> (mg/l) (mg/l) (mg/l) t¹o chåi chåi/mÉu<br /> <br /> BA Kin IBA<br /> 0 0 0 0 0 - Kh«ng h×nh thµnh chåi tõ m« sÑo, mÉu cÊy<br /> sÏ dÇn dÇn ho¸ n©u vµ chÕt.<br /> 2,0 0,5 0,5 56,3 3,6 - NhiÒu m« sÑo bÞ ho¸ n©u, kh«ng cã kh¶<br /> n¨ng biÖt ho¸ chåi.<br /> - Mét sè mÉu t¹o thÓ chåi, nh−ng kh«ng ph¸t<br /> triÓn ®−îc thµnh chåi hoµn chØnh.<br /> <br /> 3,0 0,5 0,5 100 9,7 - T¹o nhiÒu chåi tõ m« sÑo.<br /> - Chåi ph¸t triÓn hoµn chØnh, chåi lín h¬n<br /> c¸c m«i tr−êng kh¸c.<br /> - T¸i t¹o chåi míi nhiÒu tõ mÉu m« sÑo ë<br /> nh÷ng lÇn cÊy truyÒn tiÕp theo.<br /> <br /> 5,0 0,5 0,5 100 10,3 - M« sÑo Ýt bÞ ho¸ n©u vµ chÕt.<br /> - M« sÑo t¹o nhiÒu chåi míi, chåi ph¸t<br /> triÓn thµnh chåi hoµn chØnh nhiÒu.<br /> - Kh¶ n¨ng t¹o chåi ë nh÷ng lÇn cÊy<br /> truyÒn tiÕp theo cña mÉu m« sÑo cao.<br /> <br /> 10,0 0,5 0,5 5,7 0,8 - M« sÑo bÞ ho¸ n©u vµ chÕt rÊt nhiÒu.<br /> - Cã thÓ t¹o chåi nh−ng kh¶ n¨ng ph¸t<br /> triÓn thµnh chåi hoµn chØnh rÊt thÊp.<br /> <br /> 0,5 47,1 2,0 - T¹o chåi yÕu.<br /> - M« sÑo bÞ ho¸ n©u vµ chÕt dÇn dÇn<br /> <br /> 1,0 48,3 2,6 - Chåi bÞ dÞ d¹ng ë l¸ vµ th©n.<br /> <br /> 1,5 52,2 1,5 - T¹o chåi tõ m« sÑo, nh−ng kh«ng ph¸t<br /> triÓn thµnh chåi hoµn chØnh<br /> <br /> III. KÕT LUËN l©y nhiÔm bªn ngoµi mµ cßn cã t¸c dông diÖt<br /> ®−îc c¸c mÇm bÖnh néi sinh bªn trong mÉu<br /> hå tiªu.<br /> 1. Sö dông chÊt kh¸ng sinh xªfotaxin<br /> (0,5%) kÕt hîp víi c¸c ph−¬ng ph¸p khö trïng 2. M«i tr−êng MS cã bæ sung BA = 2,0<br /> bÒ mÆt, kh«ng nh÷ng lo¹i bá ®−îc c¸c nguån mg/l, IBA = 0,5 mg/l thÝch hîp nhÊt cho qu¸<br /> <br /> 42<br /> tr×nh t¹o chåi tõ ®èt ë c©y hå tiªu, trong ®ã 4. Kh¶ n¨ng h×nh thµnh chåi tõ m« sÑo tèt<br /> kh¶ n¨ng t¹o chåi ë nh÷ng ®èt cµng gÇn gèc nhÊt trªn m«i tr−êng MS cã BA = 5,0 mg/l,<br /> cµng cao. IBA = 0,5 mg/l vµ Kin = 0,5 mg/l.<br /> 3. Sö dông kü thuËt ELISA lµ cÇn thiÕt ®Ó 5. C©y hå tiªu dÔ dµng t¹o rÔ trªn m«i<br /> x¸c ®Þnh gièng s¹ch virut trong quy tr×nh nh©n tr−êng 1/2 MS cã bæ sung NAA ë nång ®é<br /> gièng in vitro c©y hå tiªu. thÊp (0,1-0,2 mg/l).<br /> <br /> B¶ng 3<br /> <br /> X¸c ®Þnh gièng s¹ch virut PVX, PVY, CMV, ToMV b»ng kü thuËt ELISA<br /> PVX PVY CMV ToMV<br /> Tªn gièng<br /> OD KL OD KL OD KL OD KL<br /> Tr−íc khi nu«i cÊy<br /> VÜnh linh 0,160 - 0,304 - 0,364 - 0,145 -<br /> Lada 0,146 - 0,297 - 0,329 - 0,153 -<br /> Tiªu gèc ghÐp 0,151 - 0,291 - 0,281 - 0,130 -<br /> Chåi c©y in vitro<br /> VÜnh linh 0,143 - 0,296 - 0,240 - 0,121 -<br /> Lada 0,114 - 0,301 - 0,251 - 0,121 -<br /> Karimunda 0,144 - 0,337 - 0,241 - 0,145 -<br /> Tiªu gèc ghÐp 0,146 - 0,246 - 0,285 - 0,139 -<br /> C©y con 5 th¸ng tuæi<br /> ngoµi v−ên −¬m<br /> VÜnh linh 0,152 - 0,339 - 0,299 - 0,143 -<br /> Lada 0,161 - 0,359 - 0,337 - 0,140 -<br /> Karimunda 0,152 - 0,321 - 0,350 - 0,145 -<br /> Tiªu gèc ghÐp 0,148 - 0,297 - 0,237 - 0,135 -<br /> §èi chøng 1,200 + 1,706 + 0,539 + 0,566 +<br /> Ghi chó: OD: trÞ sè OD; KL: kÕt luËn; -: kh«ng cã virut; + : cã virut.<br /> <br /> <br /> TµI liÖu tham kh¶o miÒn §«ng Nam Bé. TuyÓn tËp C«ng tr×nh<br /> nghiªn cøu KHCN., 189-195.<br /> 4. Joseph B., Joseph D., 1996: Plant Cell Tiss.<br /> 1. Bhat S., Chandel K. P. S., Malik S. K., Org., 41(1): 87-90.<br /> 1995: Plant Cell Rep., 14: 398-402.<br /> 5. Kellar S. M., Krishnamurthy K., 1998:<br /> 2. Bysov A. S., 2001: Virus and viral diseases of Plant Cell Rep., 17(9): 721-725.<br /> black pepper (Piper nigrum L.) in condition of 6. Nguyen T. T., Boico A. L. et al., 2001: Virus<br /> closed ground and tropical, subtropical<br /> and viral disease of black Ppepper (Piper<br /> agrocenoses. The theasis for obtaining PhD<br /> nigrum L.) in South East of Viet Nam. III<br /> degree. Kyiv National Univercity, Kyiv.<br /> Intenational Conference “Bioresoeuri and<br /> 3. §oµn T. A. T, Th¸i X. D vµ cs., 1999-2000: Viruses”, Kyiv, Ucraina.<br /> B−íc ®Çu nghiªn cøu chuÇn ®o¸n bÖnh virus 7. Philip V. P et al., 1992: Plant Cell Rep., 12:<br /> c©y Hå tiªu (Piper nigrum L.) t¹i mét sè tØnh 41-44.<br /> 43<br />  H×nh. Nh©n gièng in vitro c©y hå tiªu (Piper nigrum L.) s¹ch virót<br /> 1. Nu«i cÊy ®Ønh sinh tr−ëng; 2. BiÖt ho¸ chåi tõ m« sÑo; 3. T¹o côm chåi tõ ®èt<br /> th©n; 4. C©y con hoµn chØnh cÊy tõ côm chåi; 5. C©y con in vitro sau 3 tuÇn ngoµi<br /> v−ên −¬m<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> 44<br />  PRELIMINARY STUDY on the MICROPROPAGATION IN VITRO OF<br /> BLACK PEPPER (Piper nigrum L.)<br /> <br /> doan thi ai thuyen, thai xuan du, do dang giap, nguyen tang ton<br /> <br /> SUmmary<br /> <br /> The plant regeneration from the single node or the callus culture of black pepper (Piper nigrum L.) was<br /> described. Various combinations of media, growth regulators and explant sterization were compared.<br /> Problems, probably caused by endogenous pathogens associated with tissue exudated, often occurred during<br /> the establishment of culture. The method to sterilize the black pepper plants using antibiotic agent such as<br /> cefotaxin was described.<br /> For the shoot initiation and the establishment, the optimal concentration of black pepper growth was BA<br /> 2mg/l, IBA 0.5 mg/l. The high concentrations of BA (5-10 mg/l) had no effect on the shoot regeneration from<br /> callus and the development of lateral branches.<br /> The MS medium containing BA 5.0 mg/l, Kin 0.5 mg/l and IBA 0.5 mg/l was the best medium for the<br /> subsequent growth and the shoot regeneration from callus under the current condition.<br /> Shoots were rooted on 1/2 MS medium containing NAA 0.1-0.2 mg/l. In vitro plants were then<br /> transferred to pots in the nursery house. After 8-10 weeks, the plants with height of 20-25 cm were transferred<br /> to field for testing.<br /> <br /> Ngµy nhËn bµi: 20-10-2004<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> 45<br />