Hoàn thiện quy trình xét nghiệm đột biến gen JAK2 và CALR trong bệnh tăng sinh tủy mạn tính

Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 6 * 2019 Nghiên cứu Y học<br /> <br /> <br /> HOÀN THIỆN QUY TRÌNH XÉT NGHIỆM ĐỘT BIẾN GEN JAK2 & CALR<br /> TRONG BỆNH TĂNG SINH TỦY MẠN TÍNH<br /> Trần Tuấn Anh*, Trần Mai Hồng*, Nguyễn Lê Anh*, Nguyễn Thùy Trang*, Nguyễn Vũ Bảo Anh*,<br /> Nguyễn Hà Thanh*, Bạch Quốc Khánh*, Dương Quốc Chính*<br /> TÓM TẮT<br /> Mục tiêu: Hoàn thiện quy trình xét nghiệm đột biến gen JAK2 và CALR. Ứng dụng quy trình xét nghiệm<br /> gen JAK2, CALR xác định đột biến gen ở bệnh nhân tăng sinh tủy mạn tính.<br /> Đối tượng: Tổng số 51 mẫu của bệnh nhân thuộc nhóm tăng sinh tủy mạn tính, âm tính với nhiễm sắc thể<br /> Ph 1, được chẩn đoán và theo dõi điều trị tại Viện Huyết học - Truyền máu Trung ương.<br /> Phương pháp: Nghiên cứu tiến cứu kết hợp hồi cứu, mô tả cắt ngang<br /> Kết quả: Hoàn thiện quy trình xét nghiệm đột biến gen JAK2 và CALR gồm: giải trình tự gen JAK2, CALR<br /> bằng phương pháp NGS; xác định đột biến JAK2V617F bằng phương pháp mồi suy biến; đơn giản hóa quy trình<br /> xét nghiệm đột biến CALR type 1 và type 2 bằng phương pháp PCR mồi đặc hiệu. Ứng dụng quy trình hoàn<br /> thiện trên 51 bệnh nhân tăng sinh tủy mạn tính với kết quả phân tích đột biến: JAK2V617F chiếm 83,3% ở bệnh<br /> nhân đa hồng cầu nguyên phát và 66,7% ở bệnh nhân xơ tủy nguyên phát. Với bệnh tăng tiểu cầu tiên phát, đột<br /> biến CALR type 1 chiếm 11,4% và CALR type 2 chiếm 5,7% và JAK2V617F chiếm 71,4%.<br /> Kết luận: Nghiên cứu đã hoàn thiện quy trình xét nghiệm đột biến gen JAK2V617F bằng phương pháp mồi<br /> suy biến; xây dựng quy trình PCR để phát hiện đột biến CALR type 1, type 2; và quy trình NGS phát hiện đột<br /> biến ít gặp. Bộ quy trình hoàn thiện đã được ứng dụng trong phân tích đột biến cho 51 bệnh nhân MPNs.<br /> Từ khóa: MPNs, CALR, JAK2<br /> ABSTRACT<br /> OPTIMIZATION OF DETECTION PROTOCOLS FOR JAK2 AND CALR MUTATION<br /> IN MYELOPROLIFERATIVE NEOPLASM<br /> Tran Tuan Anh, Tran Mai Hong, Nguyen Le Anh, Nguyen Thuy Trang, Nguyen Vu Bao Anh,<br /> Nguyen Ha Thanh, Bach Quoc Khanh, Duong Quoc Chinh<br /> * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol. 23 – No. 6 - 2019: 409 - 415<br /> Objectives: Optimizaion of detection protocols for JAK2 and CALR mutation. Then applying these<br /> protocols for Myeloproliferative neoplasm patients.<br /> Subjects: 51 Ph 1 negative MPNs patients have been diagnosed and treated in National Institute of<br /> Hematology and Blood Transfusion.<br /> Methods: Prospective, retrospective, and cross-sectional study.<br /> Results: The protocols for detecting JAK2 and CALR mutation included: JAK2 and CALR gene sequencing<br /> by NGS; detect JAK2V617F by degraded primer PCR; simplify protocol for detecting CALR type 1 and type 2 by<br /> specific primer PCR. When these protocols were applied for 51 MPNs patients, the results obtained: JAK2V617F<br /> 83.3% and 66.7% in polycythaemia vera and primary myelofibrosis respectively; CALR type 1 11.4%, CALR<br /> type 2 5.7% and JAK2V617F 71.4% in essential thrombocythemia.<br /> Conclusion: The optimizesd detection protocols for JAK2 and CALR mutation are effective and easy to<br /> <br /> *Bệnh viện Nhi Đồng 1 **Đại Học Y Dược TP. Hồ Chí Minh* Viện Huyết học -Truyền máu TW<br /> Tác giả liên lạc: TS. Dương Quốc Chính ĐT: 0962168505 Email: chinh.duong@nihbt.org.vn<br /> <br /> <br /> Hội Nghị Khoa Học BV. Truyền máu Huyết học 409<br /> Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 6 * 2019<br /> <br /> apply in any molecular diagnostic laboratory and the analysis results of 51 MPNs patients confirmed the<br /> effectiveness of the methods.<br /> Key words: MPNs, CALR, JAK2<br /> ĐẶT VẤN ĐỀ ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNG PHÁPNGHIÊNCỨU<br /> Tăng sinh tủy mạn tính (Myeloproliferative Đối tượng<br /> neoplasm – MPNs) là nhóm bệnh lý đơn dòng Tổng số 51 mẫu của bệnh nhân thuộc nhóm<br /> của tế bào gốc tạo máu. Bệnh gây nên do sự tăng tăng sinh tủy mạn tính, âm tính với nhiễm sắc<br /> sinh không kiểm soát của các tế bào gốc sinh thể Ph 1, được chẩn đoán và theo dõi điều trị tại<br /> máu trong tủy xương, tiến triển mạn tính do liên Viện Huyết học - Truyền máu Trung ương.<br /> quan đến khả năng biệt hóa đến giai đoạn Phương pháp<br /> trưởng thành của tế bào dẫn tới tăng sinh các tế<br /> Thiết kế nghiên cứu<br /> bào trưởng thành ở máu ngoại vi(5).<br /> Mô tả cắt ngang, tiến cứu kết hợp hồi cứu.<br /> Bệnh được đặc trưng bởi sự xuất hiện của<br /> các đột biến trên gen JAK2, CALR hoặc MPL. Đột Kỹ thuật PCR phát hiện đột biến JAK2V617F,<br /> biến trên những gen này là đặc trưng quan trọng CALR type 1, type 2<br /> được sử dụng cho chẩn đoán, tiên lượng và lựa Kỹ thuật PCR mồi đặc hiệu sử dụng mồi bổ<br /> chọn phương thức điều trị bệnh. sung hoàn toàn với alen mang đột biến và chỉ sai<br /> Kể từ những công bố đầu tiên về đột biến khác với alen bình thường tại một vị trí đột biến.<br /> trên gen JAK2 (2005)(2) và đột biến gen CALR Với một sai khác duy nhất mồi vẫn có thể bắt<br /> (2013)(9), các phòng nghiên cứu và xét nghiệm cặp vào sợi alen bình thường để tạo nên các<br /> sinh học phân tử đã xây dựng nhiều phương đoạn sản phẩm không đặc hiệu.<br /> pháp khác nhau để phát hiện đột biến gồm: PCR Kỹ thuật PCR mồi suy biến sử dụng mồi suy<br /> đặc hiệu alen, PCR phân tích đoạn, giải trình tự biến có sửa đổi 1 nucleotide trong phạm vi 5<br /> Sanger, giải trình tự NGS (Next-Generation nucleotide đầu 3’ của mồi. Như vậy mồi suy<br /> Sequencing)(2,9,10,14). biến sẽ khác alen bình thường tại 2 vị trí: (1) vị trí<br /> Khi vận dụng những phương pháp trên đột biến và (2) vị trí suy biến có chủ ý nằm trong<br /> trong xét nghiệm thường quy thì ngoài tính phạm vi 5 nu đầu tiên đầu 3’ của mồi. Thiết kế<br /> chính xác, độ nhạy và độ đặc hiệu; còn một yếu này nhằm giảm khả năng bắt cặp của mồi với<br /> tố quan trọng hơn cả là mức độ ổn định của mỗi alen bình thường trong khi vẫn khuếch đại<br /> quy trình xét nghiệm. Bên cạnh đó, cần hiểu rõ thành công alen đột biến; như vậy sẽ giải quyết<br /> mặt hạn chế và vận dụng điểm mạnh của mỗi được tình trạng hình thành các băng sản phẩm<br /> phương pháp xét nghiệm trong những trường không đặc hiệu.<br /> hợp cụ thể; đồng thời việc đơn giản hóa quy KẾT QUẢ<br /> trình kỹ thuật cũng cần được cân nhắc khi xây Hoàn thiện quy trình xét nghiệm đột biến gen<br /> dựng một quy trình xét nghiệm thường quy. Do JAK2<br /> đó, chúng tôi thực hiện đề tài “Hoàn thiện quy<br /> Kết quả hoàn thiện quy trình xét nghiệm đột<br /> trình xét nghiệm đột biến gen JAK2 và CALR<br /> biến JAK2V617F<br /> trong bệnh tăng sinh tủy mạn tính”.<br /> Kết quả điện di trong Hình 1 cho thấy hiện<br /> Mục tiêu<br /> tượng xuất hiện băng sản phẩm không đặc hiệu<br /> Hoàn thiện quy trình xét nghiệm đột biến<br /> trùng với kích thước băng đột biến JAK2V617F ở<br /> gen JAK2 và CALR. Ứng dụng quy trình xét<br /> tất cả các mẫu. Kết quả điện di trong Hình 2<br /> nghiệm gen JAK2, CALR xác định đột biến gen ở<br /> không xuất hiện băng sản phẩm không đặc hiệu<br /> bệnh nhân tăng sinh tủy mạn tính.<br /> ở tất cả các mẫu mà chỉ xuất hiện băng đột biến<br /> <br /> <br /> 410 Hội Nghị Khoa Học BV. Truyền máu Huyết học<br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 6 * 2019 Nghiên cứu Y học<br /> <br /> và đặc hiệu ở những mẫu dương tính với đột biến JAK2V617F (Hình 1, 2).<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Hình 1. Kết quả ứng dụng quy trình phát hiện đột biến JAK2V617F theo phương pháp PCR mồi đặc hiệu<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Hình 2. Kết quả hoàn thiện quy trình phát hiện đột biến JAK2V617F bằng phương pháp PCR mồi suy biến<br /> Hoàn thiện quy trình xét nghiệm đột biến gen<br /> CALR<br /> Kết quả giải trình tự gen CALR bằng phương<br /> pháp NGS<br /> Hình 4 là kết quả phân tích dữ liệu NGS<br /> bằng phần mềm IGV: với mẫu 30205 mang mất<br /> đoạn chèn 5 nucleotide “TTGTC” hay CALR Hình 3. Kết quả phân lập gen CALR exon 1 đến exon<br /> type 2 (Hình 4a) và mẫu 30124 không phát hiện 9, có chiều dài ~6 kb<br /> được bất thường (Hình 4b).<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Hình 4. Kết quả phân tích dữ liệu NGS gen CALR bằng phần mềm IGV<br /> Kết quả hoàn thiện quy trình xét nghiệm đột nucleotide xuất hiện băng nội kiểm 192 bp và<br /> biến CALR type 1, type 2 băng đặc hiệu đột biến 161 bp (Hình 5b).<br /> Kết quả xét nghiệm đột biến CALR type 1, type 2 Hình 6 thể hiện kết quả xác định đột biến<br /> bằng phương pháp PCR mồi đặc hiệu chèn 5 nucleotide “TTGTC” hay CALR type 2<br /> bằng phương pháp PCR mồi đặc hiệu, mẫu<br /> Hình 5 biểu hiện kết quả xác định mất đoạn<br /> dương tính xuất hiện băng nội kiểm 265 bp và<br /> gen CALR bằng phương pháp PCR mồi đặc<br /> băng đặc hiệu đột biến 156 bp.<br /> hiệu: mẫu dương tính đột biến mất đoạn 52<br /> nucleotide hay CALR type 1 xuất hiện băng nội Kết quả xác định mất đoạn gen CALR bằng phương<br /> kiểm 141 bp và băng đặc hiệu đột biến 89 bp pháp giải trình tự Sanger<br /> (Hình 5a); mẫu dương tính đột biến mất đoạn 31 Kết quả xác nhận giá trị hay tính chính xác<br /> <br /> <br /> Hội Nghị Khoa Học BV. Truyền máu Huyết học 411<br /> Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 6 * 2019<br /> <br /> của quy trình xét nghiệm mất đoạn CALR type 1 với 83,3% ở bệnh nhân đa hồng cầu nguyên phát<br /> được thể hiện trong Hình 7 và mất đoạn 31 và 66,7% ở bệnh nhân xơ tủy nguyên phát. Với<br /> nucleotide được thể hiện trong Hình 8. bệnh tăng tiểu cầu tiên phát, đột biến CALR type<br /> Kết quả ứng dụng trong phân tích đột biến gen 1 chiếm 11,4% và CALR type 2 chiếm 5,7% và<br /> cho nhóm bệnh nhân tăng sinh tủy mạn tính JAK2V617F chiếm 71,4% (Bảng 1).<br /> Bệnh nhân đa hồng cầu nguyên phát và xơ<br /> tủy nguyên phát chỉ mang đột biến JAK2V617F<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Hình 5. Kết quả xác định (a) đột biến CALR type 1 và (b) mất đoạn 31 nucleotide<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Hình 6. Kết quả xác định đột biến CALR type 2 chèn 5 nucleotide “TTGTC”<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Hình 7. Kết quả phân tích vùng đứt gãy đột biến CALR type 1<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Hình 8. Kết quả phân tích vùng đứt gãy mất đoạn 31 nucleotide gen CALR<br /> <br /> <br /> 412 Hội Nghị Khoa Học BV. Truyền máu Huyết học<br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 6 * 2019 Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Bảng 1. Kết quả thống kê đột biến gen JAK2, CALR trong 51 bệnh nhân MPNs<br /> Đột biến gen<br /> Tổng<br /> Âm tính JAK2 V617F CALR type 1(*) CALR type 2<br /> Số trường hợp (n) 4 25 5 2 36<br /> TTCTP<br /> Tỷ lệ với chẩn đoán (%) 11,4% 71,4% 11,4% 5,7% 100%<br /> Số trường hợp (n) 2 10 0 0 12<br /> ĐHCNP<br /> Tỷ lệ với chẩn đoán (%) 16,7% 83,3% 0% 0% 100%<br /> Số trường hợp (n) 1 2 0 0 3<br /> XTNP<br /> Tỷ lệ với chẩn đoán (%) 33,3% 66,7% 0% 0% 100%<br /> Số trường hợp (n) 7 37 5 2 51<br /> Tổng<br /> Tỷ lệ với chẩn đoán (%) 13,7% 72,5% 9,8% 4% 100%<br /> (*) 5 mẫu đột biến mất đoạn gồm 4 mẫu đột biến CALR type 1 mất 52 nucleotide và một mẫu đột biến hiếm gặp mất đoạn 31<br /> nucleotide<br /> BÀN LUẬN với mồi suy biến thì ngoài nucleotide sai khác tại<br /> Tăng sinh tủy mạn tính là nhóm bệnh lý vị trí đột biến còn chủ ý tạo thêm một sai khác<br /> được đặc trưng bởi sự xuất hiện của đột biến nữa so với alen bình thường tại vị trí thứ 3 từ<br /> trên các gen JAK2, CALR hoặc MPL. Năm 2005, đầu 3’ của mồi. Như vậy, với 2 sai khác mồi suy<br /> bốn nhóm nghiên cứu độc lập về hội chứng tăng biến sẽ mất khả năng bắt cặp alen bình thường.<br /> sinh tủy đã lần lượt công bố đột biến trên gen Kết quả áp dụng quy trình hoàn thiện từ năm<br /> JAK2 làm biến đổi acid amin valine ở codon 617 2018 đến nay cho thấy hiện tượng sản phẩm<br /> thành phenylalanine – được ký hiệu là không đặc hiệu được giải quyết triệt để và đã<br /> JAK2V617F(2,6,11,12). Đây là đột biến điểm xuất hiện giúp ổn định xét nghiệm thường quy đột biến<br /> trong hơn 95% trường hợp đa hồng cầu và trong JAK2V617F (Hình 2).<br /> hơn 60% trường tăng tiểu cầu tiên phát hoặc xơ Trong tăng sinh tủy mạn tính đột biến trên<br /> tủy nguyên phát. Phương pháp được sử dụng gen CALR tuy mới được phát hiện gần đây<br /> rộng rãi nhất để phát hiện đột biến JAK2V617F là (2013) nhưng đã cho thấy vai trò quan trọng<br /> PCR đặc hiệu alen. Trên cơ sở đó, chúng tôi đã trong sinh bệnh học của bệnh, với tần suất từ<br /> xây dựng quy trình xét nghiệm đột biến 17% đến 27% ở bệnh nhân tăng tiểu cầu tiên<br /> JAK2V617F bằng phương pháp PCR mồi đặc phát hoặc xơ tủy nguyên phát(9). Cho đến nay,<br /> hiệu. Sau hơn 4 năm áp dụng (2012 - 2017), quy hơn 50 đột biến đã được công bố trên gen CALR<br /> trình này còn tồn tại một vấn đề là nhiều mẻ xét exon 9 trong đó 2 thể phổ biến nhất là CALR<br /> nghiệm băng sản phẩm đột biến xuất hiện type 1 mất 52 nucleotide (chiếm hơn 50%) và<br /> không đặc hiệu ở cả mẫu âm tính, gây khó khăn CALR type 2 chèn 5 nucleotide “TTGTC” (chiếm<br /> trong phân tích kết quả (Hình 1). Qua tham khảo hơn 30%)(4).<br /> tài liệu, chúng tôi nhận thấy hiện tượng xuất Nhờ vào những ưu điểm vượt trội về cỡ<br /> hiện sản phẩm không đặc hiệu thường gặp phải mẫu lớn trong một mẻ chạy, đòi hỏi rất ít lượng<br /> khi xác định các đột biến điểm bằng PCR mồi ADN/ARN đầu vào và độ chính xác cao mà<br /> đặc hiệu. Nguyên nhân của hiện tượng này là do công nghệ giải trình tự NGS đã được ứng dụng<br /> mồi đặc hiệu cho alen đột biến chỉ sai khác với rộng rãi trong nhiều bệnh lý huyết học. Hơn<br /> alen bình thường 1 nucleotide, vì vậy mồi đặc nữa, NGS còn một thế mạnh là phát hiện được<br /> hiệu vẫn có thể bắt cặp alen bình thường với nhiều dạng đột biến như: biến đổi đơn<br /> hiệu suất thấp hơn. Nhằm ổn định quy trình xét nucleotide (SNV), chèn và mất đoạn nhỏ<br /> nghiệm và giải quyết triệt để hiện tượng sản (ins/dels), biến đổi số lượng bản sao (CNV)(10,14,15).<br /> phẩm không đặc hiệu, chúng tôi đã thay đổi Trên cơ sở đó, chúng tôi đã ứng dụng thành<br /> thiết kế của mồi đặc hiệu sang mồi suy biến. Đối công giải trình tự NGS để phân tích đột biến trên<br /> <br /> <br /> <br /> Hội Nghị Khoa Học BV. Truyền máu Huyết học 413<br /> Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 6 * 2019<br /> <br /> toàn bộ gen CALR (exon 1 đến exon 9). Khi phân chứng và xác nhận giá trị thông qua việc giải<br /> tích dữ liệu NGS chúng tôi đã xác định được trình tự đoạn sản phẩm đặc hiệu (89 bp) trên hệ<br /> những trường hợp mang đột biến CALR type 2 thống AB3500, kết quả phân tích trong Hình 7.<br /> và các biến thể chèn 5 nucleotide tương tự (Hình Trong nghiên cứu này, chúng tôi cũng xác định<br /> 4a). Tuy nhiên không xác định được đột biến một trường hợp mang mất đoạn 31 nucleotide<br /> CALR type 1 mà thay vào đó là những mẫu gọi hiếm gặp (Hình 5b). Mất đoạn này cũng được<br /> ra hàng loạt biến thể trong vùng ~50 bp khi phân chúng tôi xây dựng quy trình xét nghiệm bằng<br /> tích trên CLC và không phát hiện thấy đột biến PCR mồi đặc hiệu và xác nhận giá trị bằng<br /> khi phân tích trên IGV (Hình 4b). Như vậy kết phương pháp giải trình tự theo nguyên lý<br /> quả trên CLC cho thấy sự bất thường về dữ liệu Sanger (Hình 8). Nhằm đơn giản hóa hơn nữa<br /> sau khi phân tích. quy trình xét nghiệm đột biến gen CALR chúng<br /> Qua tìm hiểu nghiên cứu của Kluk (2016), tôi tiếp tục xây dựng quy trình PCR xác định đặc<br /> chúng tôi biết được hạn chế khi phân tích đột hiệu đột biến CALR type 2, kết quả được thể<br /> biến bằng công nghệ NGS của Illumina là không hiện trong Hình 6.<br /> thể xác định được những mất đoạn lớn hơn 25 Sau khi đã hoàn thiện quy trình xét nghiệm<br /> bp(10). Đây là lý do mà chúng tôi không thể xác đột biến gen JAK2 và gen CALR, chúng tôi đã áp<br /> định đột biến CALR type 1 mất đoạn 52 bp khi dụng bộ quy trình hoàn thiện cho 51 mẫu bệnh<br /> phân tích kết quả NGS. Như vậy quy trình xét nhân MPNs. Kết quả về tỷ lệ đột biến gen cũng<br /> nghiệm bằng NGS giúp phân tích hiệu quả đột tương đồng với nghiên cứu của tác giả Kim,<br /> biến trên gen CALR ngoại trừ những mất đoạn Seon Young và Lin, Yani(8,13). Với đột biến gen<br /> >25 bp. Một số giải pháp đã được bổ sung để CALR, chúng tôi mới phát hiện trên các bệnh<br /> phát hiện những mất đoạn này gồm: phân tích nhân tăng tiểu cầu tiên phát (11,4% type 1 và<br /> đường cong biến tính (HRM), PCR phân tích 5,7% type 2) mà chưa có trường hợp nào với<br /> đoạn trên máy điện di mao quản, giải trình tự bệnh lý xơ tủy nguyên phát. Điều này có thể do<br /> trực tiếp theo phương pháp Sanger(3,5). Cả 3 giải số lượng bệnh nhân xơ tủy nguyên phát của<br /> pháp trên đều cho phép phát hiện đột biến chúng tôi chưa đủ lớn.<br /> CALR type 1 và những mất đoạn khác, tuy nhiên KẾT LUẬN<br /> đây đều là những phương pháp khá phức tạp và<br /> Nghiên cứu đã hoàn thiện quy trình xét<br /> yêu cầu thiết bị đặc thù. Với HRM được thực<br /> nghiệm đột biến gen JAK2V617F bằng phương<br /> hiện trên máy realtime PCR và khá nhạy cảm;<br /> pháp mồi suy biến; xây dựng quy trình PCR để<br /> PCR phân tích đoạn đòi hỏi máy điện di mao<br /> phát hiện đột biến CALR type 1, type 2; và quy<br /> quản. Đối với giải trình tự theo phương pháp<br /> trình NGS phát hiện đột biến ít gặp. Bộ quy trình<br /> Sanger, việc phân tích kết quả đột biến mất đoạn<br /> hoàn thiện đã được ứng dụng trong phân tích<br /> tương đối khó khăn do hiện tượng chồng đỉnh<br /> tín hiệu khi giải trực tiếp từ sản phẩm PCR. đột biến cho 51 bệnh nhân MPNs.<br /> Phương pháp này đòi hỏi phải tinh sạch đoạn TÀI LIỆU THAM KHẢO<br /> sản phẩm chứa vùng mất đoạn bằng thôi gel. 1. Arber DA, Orazi A, Hasserjian R, et al (2016). The 2016 revision<br /> to the World Health Organization classification of myeloid<br /> Trong nghiên cứu này chúng tôi đơn giản hóa<br /> neoplasms and acute leukemia. Blood, 127(20):2391–2405.<br /> quy trình xét nghiệm đột biến CALR type 1 bằng 2. Baxter EJ, et al (2005). Acquired mutation of the tyrosine kinase<br /> phương pháp PCR mồi đặc hiệu. Kết quả trong JAK2 in human myeloproliferative disorders. The Lancet,<br /> 365(9464):1054–1061.<br /> Hình 5a cho thấy mẫu dương tính đột biến CALR 3. Chi J, Manoloukos M, Pierides C, et al (2015). CALReticulin<br /> type 1 thì ngoài băng nội kiểm còn xuất hiện mutations in myeloproliferative neoplasms and new<br /> thêm một băng sản phẩm kích thước 89 bp. Tính methodology for their detection and monitoring. Annals of<br /> Hematology, 94(3):399–408.<br /> chính xác của quy trình xét nghiệm được kiểm<br /> <br /> <br /> <br /> 414 Hội Nghị Khoa Học BV. Truyền máu Huyết học<br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 6 * 2019 Nghiên cứu Y học<br /> <br /> 4. Chi J, Nicolaou KA, et al (2014). CALReticulin gene exon 9 12. Levine RL, Wadleigh M, Cools J, et al (2005). Activating<br /> frameshift mutations in patients with thrombocytosis. Leukemia, mutation in the tyrosine kinase JAK2 in polycythemia vera,<br /> 28(5):1152–1154. essential thrombocythemia, and myeloid metaplasia with<br /> 5. Doyle LJ, Betz BL, Weigelin HC, et al (2019). Comparison of myelofibrosis. Cancer Cell, 7(4):387–397.<br /> real‐time PCR vs PCR with fragment length analysis for the 13. Lin Y, et al (2015). The Prevalence of JAK2, MPL and CALR<br /> detection of CALR mutations in suspected myeloproliferative Mutations in Chinese Patients with BCR-ABL1 –Negative<br /> neoplasms. International Journal of Laboratory Hematology, Myeloproliferative Neoplasms. American Journal of Clinical<br /> 25(7):1429-1431. Pathology, 144(1):165–171.<br /> 6. James C, et al (2005). A unique clonal JAK2 mutation leading to 14. Murugesan G, Guenther-Johnson J, et al (2016). Validation of a<br /> constitutive signalling causes polycythaemia vera. Nature, molecular diagnostic assay for CALR exon 9 indels in<br /> 434(7037):1144–1148. myeloproliferative neoplasms: identification of coexisting JAK2<br /> 7. Jones AV, et al (2015). Evaluation of methods to detect CALR and CALR mutations and a novel 9 bp deletion in CALR.<br /> mutations in myeloproliferative neoplasms. Leukemia Research, International Journal of Laboratory Hematology, 38(3):284–297.<br /> 39(1):82–87. 15. Palumbo GA, Stella S, Pennisi MS, et al (2019). The Role of New<br /> 8. Kim SY, Im K, Park SN, Kwon J, Kim JA (2015). CALR, JAK2, Technologies in Myeloproliferative Neoplasms, Frontiers in<br /> and MPL Mutation Profiles in Patients with Four Different Oncology, 9: 321.<br /> Subtypes of Myeloproliferative Neoplasms. American Journal of 16. Pavlov I, Hadjiev E, Alaikov T, et al (2018). CALReticulin<br /> Clinical Pathology, 143(5):635–644. Mutations in Bulgarian MPN Patients. Pathology & Oncology<br /> 9. Klampfl T., et al (2013). Somatic Mutations of CALReticulin in Research, 24(1):171–174.<br /> Myeloproliferative Neoplasms. New England Journal of Medicine,<br /> 369(25):2379–2390.<br /> Ngày nhận bài báo: 22/07/2019<br /> 10. Kluk MJ, Lindsley RC, Aster JC, et al (2016). Validation and<br /> Implementation of a Custom Next-Generation Sequencing Ngày phản biện nhận xét bài báo: 15/08/2019<br /> Clinical Assay for Hematologic Malignancies. Journal of Ngày bài báo được đăng: 15/10/2019<br /> Molecular Diagnostics, 18(4):507–515.<br /> 11. Kralovics R, Passamonti F, Buser AS, et al (2005). A Gain-of-<br /> Function Mutation of JAK2 in Myeloproliferative Disorders.<br /> New England Journal of Medicine, 352(17): 1779–1790.<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Hội Nghị Khoa Học BV. Truyền máu Huyết học 415<br />