Khảo sát tác dụng bảo vệ tế bào gan của lá chùm ngây (moringa oleifera lam.) phòng ngừa tổn thương do rƣợu gây ra trên dòng tế bào HEPG2

Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số 1 * 2018<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> KHẢO SÁT TÁC DỤNG BẢO VỆ TẾ BÀO GAN<br /> CỦA LÁ CHÙM NGÂY (MORINGA OLEIFERA LAM.)<br /> PHÒNG NGỪA TỔN THƢƠNG DO RƢỢU<br /> GÂY RA TRÊN DÒNG TẾ BÀO HEPG2<br /> Đỗ Thị Hồng Tươi*, Trần Nguyễn Thủy Tiên*, Nguyễn Hoàng Quân*,Dương Thị Mộng Ngọc*<br /> <br /> TÓM TẮT<br /> Mở đầu: Chùm ngây chứa nhiều chất có tác dụng chống oxy hóa, đặc biệt là isoquercitrin. Đề t|i n|y “Khảo<br /> sát tác dụng bảo vệ tế bào gan của lá Chùm ngây (Moringa oleifera Lam.) phòng ngừa tổn thương do rượu gây ra<br /> trên dòng tế b|o HepG2”.<br /> Phương pháp: HepG2 nuôi cấy trong môi trường EMEM, bổ sung 10% FCS, 2 mM L-glutamin, 100<br /> IU/ml penicilin, 100 µg/ml streptomycin. Xử lý tế bào với isoquercitrin (IQ), cao ethyl acetat (EC), cao cồn 70%<br /> (CC) từ lá Chùm ngây với h|m lượng isoquercitrin 2,5; 5; 10 µg/ml (ký hiệu NĐ1, NĐ2, NĐ3) có/không bổ<br /> sung ethanol 100 mM trong 24 giờ. Đ{nh gi{ t{c dụng bảo vệ gan phòng ngừa sự ức chế tăng trưởng tế bào (test<br /> MTT), tích lũy lipid (nhuộm dầu đ O), hoại tử tế bào (test LDH), tình trạng stress oxy hóa qua lượng glutathion<br /> nội bào, hoạt hóa apoptosis (nhuộm AO/EB, định lượng ADN phân mảnh v| điện di ADN trên gel).<br /> Kết quả: Sau 24 giờ, so với mẫu sinh lý, ethanol 100 mM làm giảm 25,6% tỷ lệ sống của tế bào HepG2,<br /> 31,3% h|m lượng GSH v| l|m tăng 39,4% lượng lipid nội bào, 30% hoạt tính LDH ngoại b|o v| 65,2% lượng<br /> ADN phân mảnh. Cả 3 mẫu thử từ l{ Chùm ng}y đều thể hiện tác dụng phòng sự ức chế tăng trưởng ở 3 nồng<br /> độ khảo sát với hiệu quả khoảng 42 - 250%. Bổ sung IQ và EC ở NĐ2, NĐ3 giúp tăng lượng GSH trong tế bào<br /> HepG2 so với mẫu ethanol một mình với hiệu quả 100 - 173%. Tác dụng gây hoại tử tế bào của ethanol 100 mM<br /> giảm khoảng 77 - 170% khi bổ sung EC, CC ở 3 nồng độ và IQ ở NĐ2. Đối với apoptosis, tỷ lệ ADN phân mảnh<br /> giảm 70 - 100% khi bổ sung IQ ở 3 nồng độ, EC và CC ở NĐ3. Kết quả này phù hợp với hình ảnh nhuộm<br /> AO/EB v| điện di ADN trên gel agarose.<br /> Kết luận: Các mẫu thử từ l{ Chùm ng}y, đặc biệt là cao ethyl acetat có tác dụng phòng ngừa tổn thương tế<br /> bào gan HepG2 do ethanol 100 mM gây ra sau 24 giờ. Như vậy, có thể nghiên cứu phát triển thuốc từ lá Chùm<br /> ng}y để phòng và/hoặc điều trị bệnh gan nói chung v| do rượu nói riêng.<br /> Từ khóa: Chùm ngây, bảo vệ tế b|o gan, rượu, dòng tế bào HepG2.<br /> <br /> ABSTRACT<br /> STUDY ON HEPATOPROTECTIVE EFFECT OF MORINGA OLEIFERA LAM.<br /> TO PREVENT HEPATOCYTE ALCOHOL-INDUCED LESSON IN HEPG2 CELL LINE<br /> Do Thi Hong Tuoi, Tran Nguyen Thuy Tien, Nguyen Hoang Quan, Duong Thi Mong Ngoc<br /> * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Supplement Vol. 22 - No 1- 2018: 359 - 367<br /> Background: Moringa oleifera Lam. is rich of strong antioxidant reagents, especially isoquercitrin. This<br /> work has studied on effect of M. oleifera Lam. leaves to prevent alcohol-induced hepatotoxicity in HepG2 cell line.<br /> Methods: HepG2 cells were cultured in EMEM supplemented with 10% FCS, 2 mM L-glutamine, 100<br /> IU/ml penicillin and 100 µg/ml streptomycin. Cells were treated with 3 different samples including isoquercitrin<br /> (IQ), ethyl acetate (EC) or 70% ethanolic extracts (CC) from M. oleifera Lam. leaves at concentrations<br /> *<br /> <br /> Khoa Dƣợc, Đại học Y Dƣợc Thành phố Hồ Chí Minh<br /> Tác giả liên lạc: PGS. TS. Đỗ Thị Hồng Tƣơi<br /> ĐT: 0908683080<br /> <br /> Chuyên Đề Dƣợc<br /> <br /> Email: hongtuoi@ump.edu.vn<br /> <br /> 359<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số 1 * 2018<br /> <br /> corresponding to that of isoquercitrin at 2.5, 5, 10 μg/ml (NĐ1, NĐ2 and NĐ3, respectively) alone or combined<br /> with 100 mM ethanol for 24h. Hepatoprotective effect was evaluated through several assays including cell<br /> proliferation (MTT test), lipid accumulation (O red oil staining), necrosis (LDH test), oxydant stress (cellular<br /> glutathione content) and apoptosis activation (AO/EB staining, DNA fragmentation).<br /> Results: After 24 hours, ethanol 100 mM decreased 25.6% cell viability and 31.3% GSH content, on the<br /> other hand, increased 39.4% lipid accumulation, 30% extracellular LDH activity and 65.2% DNA fragmentation<br /> compared to control. All of 3 samples IQ, EC and CC from Moringa leaves have been shown prevention of<br /> antiproliferation at 3 tested concentrations with efficiency of 42-250%. The addition of IQ, EC at NĐ2, NĐ3<br /> inscreased 100 - 173% of intracellular GSH level. Necrotic effect of 100 mM ethanol was decreased 77-170% in<br /> presence of EC, CC at 3 tested concentrations and IQ at NĐ2. For apoptosis, DNA fragmentation was decreased<br /> 70 - 100% in presence of IQ at 3 tested concentrations, EC and CC at NĐ3 compared to ethanol alone. This result<br /> corresponded to AO/EB staining and agarose gel electrophoresis.<br /> Conclusion: Three samples from M. oleifera Lam. Leaf, especially ethyl acetate extract were shown to<br /> prevent HepG2 cells injury induced by 100 mM ethanol treatment for 24h. Therefore, M. oleifera Lam. leaf<br /> could be studied to develop drugs for prevention and/or treatment of liver diseases in general and alcoholic<br /> liver diseases in particular.<br /> Key words: Moringa oleifera Lam, hepatoprotective effect, alcohol, HepG2 cell line.<br /> Lam.) có khả năng chống oxy hóa và bảo vệ gan<br /> ĐẶT VẤN ĐỀ<br /> trên chuột nhắt trắng(12). Tuy nhiên, chƣa có<br /> Gần đ}y, tỷ lệ ngƣời Việt Nam mắc bệnh gan<br /> nghiên cứu sàng lọc một cách hệ thống ở cấp độ<br /> nói chung và bệnh gan do rƣợu nói riêng ngày<br /> tế b|o để chứng minh cơ sở khoa học một cách<br /> c|ng tăng. Một trong những nguyên nhân chính<br /> đầy đủ về tác dụng của dƣợc liệu này. Gần đ}y,<br /> là do tình trạng lạm dụng rƣợu bia. Tỷ lệ lạm<br /> nhóm nghiên cứu của chúng tôi đã x}y dựng<br /> dụng và nghiện rƣợu tại thành phố là trên 10%<br /> đƣợc mô hình in vitro sử dụng dòng tế bào gan<br /> và ở vùng núi khoảng 17%, đa số là nam giới ở<br /> HepG2 mô phỏng tình trạng tổn thƣơng tế ban<br /> độ tuổi 20-30 tuổi. Ƣớc tính khoảng 5% số dân<br /> gan do rƣợu(3). Đề tài này tiến h|nh “Khảo sát tác<br /> nƣớc ta bị xơ gan, trong đó 65% trƣờng hợp xơ<br /> dụng bảo vệ tế bào gan của lá Chùm ngây<br /> gan do rƣợu.<br /> (Moringa oleifera Lam.) phòng ngừa tổn thƣơng<br /> Các nhóm thuốc hóa tổng hợp hoặc<br /> do rƣợu gây ra trên dòng tế b|o HepG2” với<br /> interferon để kiểm soát các bệnh về gan cho kết<br /> mục tiêu sàng lọc tác dụng bảo vệ tế bào gan của<br /> quả không ổn định, nguy cơ xảy ra tác dụng phụ<br /> cao cồn 70%, cao ethyl acetat và isoquercitrin từ<br /> v| gi{ th|nh tƣơng đối đắt. Do vậy, xu hƣớng<br /> lá Chùm ngây trên mô hình mô phỏng tình trạng<br /> hiện nay là phát triển và sử dụng thuốc từ dƣợc<br /> tổn thƣơng tế b|o gan thƣờng gặp trên bệnh<br /> liệu giúp bảo vệ gan trong giai đoạn sớm, điều<br /> nhân bị bệnh gan do rƣợu.<br /> trị bệnh gan kịp thời nhằm cải thiện tiên lƣợng vì<br /> ĐỐI TƢỢNG-PHƢƠNGPHÁP NGHIÊNCỨU<br /> tính an toàn và có thể sử dụng thƣờng xuyên,<br /> Dòng tế bào<br /> lâu dài.<br /> Việt Nam có nguồn dƣợc liệu rất đa dạng,<br /> trong đó nhiều dƣợc liệu đƣợc dùng trị bệnh gan<br /> nhƣ củ Nghệ, Diệp hạ châu... và Chùm ngây với<br /> tác dụng bảo vệ gan đang đƣợc quan tâm nghiên<br /> cứu. Gần đ}y, b{o c{o của Nguyễn Bảo Trân cho<br /> thấy cao cồn từ lá Chùm ngây (Moringa oleifera<br /> <br /> 360<br /> <br /> HepG2 (ATCC HB8065R) hoạt hóa tại Viện<br /> Pasteur TP. Hồ Chí Minh.<br /> <br /> Hóa chất<br /> Môi trƣờng EMEM, huyết thanh bào thai bê<br /> (FCS), trypsin-EDTA (Gibco, Mỹ); L-glutamin,<br /> penicilin-streptomycin, albumin huyết thanh bò<br /> <br /> Chuyên Đề Dƣợc<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số 1 * 2018<br /> (BSA), đệm phosphat, trypan blue, ethanol,<br /> MTT, dầu đỏ O, Brilliant G250, L-lactic<br /> dehydrogenase, acid oleic, acid palmitic,<br /> quercetin, isoquercitrin (Sigma-Aldrich, Mỹ), kit<br /> LDH (Roche, Đức), diphenylamin, methanol<br /> (Merck, Đức). Tất cả hóa chất đạt tiêu chuẩn tinh<br /> khiết cấp độ 1.<br /> <br /> Mẫu thử<br /> Isoquercitrin (Sigma-Aldrich, Mỹ): ký hiệu là<br /> IQ, độ tinh khiết ≥ 98%. Cao cồn 70% (CC) và cao<br /> ethyl acetat (EC) từ lá Chùm ngây (Tri Tôn, An<br /> Giang) cung cấp bởi Trung t}m S}m & Dƣợc liệu<br /> Tp. HCM, đạt tiêu chuẩn cơ sở. Từ thí nghiệm sơ<br /> bộ, chọn 3 nồng độ ứng với h|m lƣợng<br /> isoquercitrin 2,5; 5 v| 10 µg/ml không g}y độc tế<br /> b|o để khảo sát tác dụng bảo vệ tế bào gan<br /> HepG2 (Bảng 1).<br /> Bảng 1: Nồng độ khảo sát của các mẫu thử<br /> Cao ethyl acetat<br /> (EC)<br /> <br /> Cao cồn<br /> 70% (CC)<br /> <br /> Hàm lượng isoquercitrin<br /> 14,09<br /> 2,41<br /> (% kl/kl) trong cao<br /> Độ ẩm của cao (%)<br /> 16,18<br /> 19,50<br /> Nồng độ cuối cùng trong môi trường nuôi cấy (µg/ml)<br /> Isoquercitrin Cao ethyl acetat Cao cồn 70%<br /> Ký hiệu<br /> (IQ)<br /> (EC)<br /> (CC)<br /> NĐ1<br /> 2,5 (IQ1)<br /> 21,2 (EC1)<br /> 128,9 (CC1)<br /> NĐ2<br /> 5,0 (IQ2)<br /> 42,3 (EC2)<br /> 257,7 (CC2)<br /> NĐ3<br /> 10,0 (IQ3)<br /> 84,7 (EC3)<br /> 515,5 (CC3)<br /> <br /> Phƣơng pháp nghiên cứu<br /> <br /> Nuôi cấy và xử lý tế bào<br /> Tế bào HepG2 nuôi cấy trong môi trƣờng<br /> EMEM, bổ sung 10% FCS, 2 mM L-glutamin, 100<br /> IU/ml penicilin, 100 µg/ml streptomycin và ủ ở<br /> 37oC, 5% CO2 đến độ phủ 70-80%. Thu v| đếm tế<br /> bào sống với trypan blue, chia v|o đĩa nuôi cấy 6<br /> hoặc 96 giếng với mật độ 2,5 × 104 tế bào/cm2. Ủ<br /> 24 giờ ở 37oC, 5% CO2, xử lý tế bào với IQ, EC,<br /> CC tƣơng ứng với isoquercetin 2,5; 5; 10 µg/ml<br /> (ký hiệu: NĐ1, NĐ2, NĐ3) hoặc quercetin 10<br /> µM có hoặc không bổ sung ethanol 100 mM<br /> trong 24 giờ. Nồng độ DMSO cuối cùng trong<br /> môi trƣờng là 0,25% (v/v) không ảnh hƣởng đến<br /> tế bào(7). Mẫu chứng bổ sung DMSO với nồng độ<br /> tƣơng đƣơng.<br /> <br /> Chuyên Đề Dƣợc<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Đánh giá tỉ lệ tế bào sống bằng test MTT<br /> Tỷ lệ tế bào sống x{c định qua hoạt tính<br /> enzym succinat dehydrogenase (SDH) của ty thể<br /> có trong tế bào sống. SDH chuyển MTT [3-(4,5dimethyl-thiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium<br /> bromid)] thành formazan tan trong isopropanol<br /> tạo dung dịch tím, OD đo ở 570 nm phản ánh số<br /> lƣợng tế bào sống.<br /> Đánh giá tình trạng tích lũy lipid bằng phương<br /> pháp nhuộm dầu đỏ O<br /> Dầu đỏ O là thuốc nhuộm lipid, di chuyển từ<br /> dung môi vào các hạt mỡ trong tế bào gan làm<br /> chúng có m|u đỏ quan s{t đƣợc dƣới kính hiển<br /> vi quang học. Các hạt mỡ nhuộm dầu đỏ O đƣợc<br /> hòa tan trong isopropanol tạo dung dịch m|u đỏ.<br /> OD đo ở 500 nm phản {nh lƣợng lipid trong tế<br /> bào ở mỗi giếng.<br /> Định lượng glutathion (GSH) nội bào<br /> Sự tăng sinh gốc oxy hóa làm giảm GSH nội<br /> bào. Bổ sung acid tricloroacetic vào dịch ly giải tế<br /> bào, ly tâm lấy dịch trong, thêm EDTAphosphat, ủ 5 phút với thuốc thử Ellman [5,5dithiobis-(2-nitrobenzoic acid)]. Đo OD ở 412<br /> nm. Lƣợng GSH (µM/mg protein) đƣợc tính dựa<br /> theo đƣờng cong chuẩn độ của GSH chuẩn (0 200 µM). Protein toàn phần đƣợc x{c định bằng<br /> phƣơng ph{p Bradford với thuốc nhuộm<br /> Coomassie và mẫu chuẩn albumin huyết thanh<br /> cừu (0 - 4 mg/ml).<br /> Đánh giá tình trạng hoại tử tế bào gan<br /> Tình trạng hoại tử đ{nh gi{ qua hoạt tính<br /> lactat dehydrogenase (LDH) phóng thích vào<br /> môi trƣờng nuôi cấy bằng kit “Cytotoxicity<br /> Detection LDH”. LDH xúc t{c phản ứng kép<br /> chuyển pyruvat thành lactat, tetrazolium màu<br /> v|ng th|nh formazan m|u đỏ, đo OD ở 492 nm.<br /> X{c định hoạt tính LDH dựa v|o đƣờng cong<br /> chuẩn độ (0-1000 mU/ml) của LDH chuẩn.<br /> Đánh giá quá trình apoptosis<br /> Quan sát tế b|o apoptosis dƣới kính hiển<br /> vi huỳnh quang sau khi nhuộm acridin<br /> orange/ethidium bromid. ADN phân mảnh<br /> <br /> 361<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số 1 * 2018<br /> <br /> đƣợc định lƣợng bằng diphenylamin tạo dung<br /> dịch có m|u đo OD ở 600 nm v| điện di trên<br /> gel agarose 2%.<br /> <br /> Hiệu quả phòng ngừa tổn thương tế bào gan<br /> Hiệu quả bảo vệ tế bào gan HepG2 của mẫu<br /> thử phòng ngừa tổn thƣơng do ethanol 100 mM<br /> đƣợc tính theo công thức:<br /> HQ (%) = [(kết quảethanol - kết quảethanol bổ sung mẫu<br /> )/(kết quảethanol - kết quảsinh lý)] x 100<br /> <br /> thử<br /> <br /> Phân tích kết quả và xử lý thống kê<br /> Mỗi thí nghiệm đƣợc lặp lại 2 hoặc 3 lần. Kết<br /> quả trình b|y dƣới dạng trung bình ± sai số<br /> chuẩn của giá trị trung bình (Mean ± SEM) của 6<br /> <br /> mẫu cho một điều kiện nuôi cấy trong một thí<br /> nghiệm đại diện. Sự khác biệt có ý nghĩa thống<br /> kê khi p < 0,05 với phép kiểm Kruskal-Wallis và<br /> Mann-Whitney trên phần mềm SPSS 20.0.<br /> <br /> KẾT QUẢ<br /> Tác dụng phòng ngừa sự ức chế tăng trƣởng<br /> tế bào<br /> Tác dụng phòng ngừa sự ức chế tăng<br /> trƣởng tế bào do rƣợu gây ra của cao cồn 70%,<br /> cao ethyl acetat và isoquercitrin từ lá Chùm<br /> ng}y đ{nh gi{ bằng thử nghiệm MTT đƣợc<br /> trình bày trong Bảng 2.<br /> <br /> Bảng 2: Tác dụng phòng ngừa sự ức chế tăng trưởng tế b|o gan HepG2 do rượu gây ra sau 24 giờ của cao cồn<br /> 70%, cao ethyl acetat từ lá Chùm ngây và isoquercitrin<br /> OD570 trung bình ± SEM<br /> Ethanol 100 mM (-)<br /> Ethanol 100 mM (+)<br /> Ký hiệu<br /> Isoquercitrin<br /> Cao ethyl<br /> Cao cồn 70%<br /> Isoquercitrin Cao ethyl acetat Cao cồn 70%<br /> (Nồng độ IQ)<br /> (IQ)<br /> acetat (EC)<br /> (CC)<br /> (IQ)<br /> (EC)<br /> (CC)<br /> ##<br /> ##<br /> ##<br /> NĐ1 (2,5 µg/ml)<br /> 0,356 ± 0,018* 0,390 ± 0,010** 0,342 ± 0,021* 0,370 ± 0,016 ** 0,411 ± 0,023 ** 0,326 ± 0,020<br /> #<br /> ##<br /> ##<br /> NĐ2 (5 µg/ml)<br /> 0,373 ± 0,017** 0,371 ± 0,018** 0,386 ± 0,010** 0,304 ± 0,022 0,355 ± 0,013 ** 0,273 ± 0,010 *<br /> ##<br /> ##<br /> NĐ3 (10 µg/ml) 0,375 ± 0,021** 0,387 ± 0,009** 0,362 ± 0,017* 0,343 ± 0,021 ** 0,382 ± 0,013 ** 0,253 ± 0,019<br /> Chứng<br /> 0,297 ± 0,005<br /> 0,221 ± 0,019**<br /> #<br /> Quercetin<br /> 0,311 ± 0,007<br /> 0,261 ± 0,007<br /> NĐ1<br /> 196,1<br /> 249,6<br /> 137,7<br /> % phòng<br /> NĐ2<br /> 109,0<br /> 176,5<br /> 68,9<br /> ngừa so<br /> với mẫu<br /> NĐ3<br /> 160,1<br /> 211,4<br /> 41,9<br /> chứng Quercetin<br /> 53,1<br /> <br /> *: p < 0,05; **: p < 0,01: so với mẫu chứng sinh lý; #: p < 0,05; ##: p < 0,01: so với mẫu chứng bệnh lý (ethanol 100 mM)<br /> <br /> Các mẫu thử riêng lẻ không độc tế bào, 3<br /> nồng độ NĐ1, NĐ2, NĐ3 của các mẫu thử<br /> không thay đổi tỷ lệ tế bào sống có ý nghĩa thống<br /> kê so với mẫu chứng sinh lý (p > 0,05).<br /> Ethanol 100 mM ức chế sự tăng trƣởng của tế<br /> bào HepG2, làm giảm tế bào sống 25,6% so với<br /> mẫu chứng (p < 0,05). Sự ức chế tăng trƣởng này<br /> đƣợc phòng ngừa khi bổ sung v|o môi trƣờng<br /> nuôi cấy quercetin 10 µM (p < 0,05).<br /> Bổ sung isoquercitrin, cao ethyl acetat và cao<br /> cồn 70% v|o môi trƣờng ở cả 3 nồng độ ứng với<br /> h|m lƣợng isoquercitrin 2,5; 5 và 10 µg/ml làm<br /> tăng tỷ lệ tế bào sống có ý nghĩa thống kê so với<br /> mẫu chứng bệnh xử lý với ethanol 100 mM trong<br /> 24 giờ (p < 0,05).<br /> <br /> 362<br /> <br /> Tác dụng phòng ngừa sự tích lũy lipid<br /> Kết quả tác dụng bảo vệ tế bào gan phòng<br /> ngừa sự tích lũy lipid do rƣợu gây ra của cao cồn<br /> 70%, cao ethyl acetat từ lá Chùm ngây và<br /> isoquercitrin đƣợc trình bày ở Bảng 3.<br /> Đa số nồng độ khảo sát của mẫu thử riêng<br /> lẻ l|m tăng tích lũy lipid nội bào không có ý<br /> nghĩa thống kê (p > 0,05), chỉ NĐ1 cao ethyl<br /> acetat, NĐ2 isoquercitrin tăng lần lƣợt 10% và<br /> 25% so với mẫu sinh lý, NĐ3 cao cồn giảm<br /> 16,3% lƣợng lipid (p < 0,05).<br /> Ở mẫu ethanol 100 mM, sau 24 giờ, tế bào<br /> HepG2 tăng tích lũy lipid 39,4% so với chứng<br /> sinh lý (p < 0,05). Quercetin 10 µM giảm tích lũy<br /> lipid nội b|o gan do rƣợu (p < 0,05).<br /> <br /> Chuyên Đề Dƣợc<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số 1 * 2018<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Bảng 3: Tác dụng của cao cồn 70%, cao ethyl acetat và isoquercitrin từ lá Chùm ngây phòng ngừa sự tích lũy<br /> lipid trong tế b|o gan HepG2 do rượu gây ra sau 24 giờ<br /> <br /> Ký hiệu<br /> Isoquercitrin<br /> (Nồng độ IQ)<br /> (IQ)<br /> NĐ1 (2,5 µg/ml) 0,147 ± 0,013<br /> NĐ2 (5 µg/ml) 0,149 ± 0,006*<br /> NĐ3 (10 µg/ml) 0,149 ± 0,014<br /> Chứng<br /> Quercetin<br /> %<br /> NĐ1<br /> phòng<br /> NĐ2<br /> ngừa so<br /> NĐ3<br /> với mẫu<br /> chứng Quercetin<br /> <br /> OD500 trung bình ± SEM<br /> Ethanol 100 mM (-)<br /> Ethanol 100 mM (+)<br /> Cao ethyl acetat Cao cồn 70% Isoquercitrin Cao ethyl acetat Cao cồn 70%<br /> (EC)<br /> (CC)<br /> (IQ)<br /> (EC)<br /> (CC)<br /> 0,169 ± 0,010**<br /> 0,143 ± 0,007 0,194 ± 0,009** 0,160 ± 0,009*<br /> 0,249 ± 0,025**<br /> #<br /> 0,143 ± 0,009<br /> 0,159 ± 0,012 0,183 ± 0,006** 0,159 ± 0,006 ** 0,203 ± 0,012**<br /> #<br /> 0,135 ± 0,005<br /> 0,113 ± 0,004** 0,155 ± 0,006 * 0,160 ± 0,006*<br /> 0,165 ± 0,009**<br /> 0,135 ± 0,003<br /> 0,188 ± 0,010**<br /> ##<br /> 0,129 ± 0,004<br /> 0,144 ± 0,004<br /> -11,9<br /> 53,1<br /> -115,4<br /> 8,8<br /> 53,5<br /> -28,9<br /> 62,3<br /> 52,2<br /> 43,4<br /> 82,4<br /> <br /> *: p < 0,05; **: p < 0,01: so với mẫu chứng sinh lý; #: p < 0,05; ##: p < 0,01: so với mẫu chứng bệnh lý (ethanol 100 mM)<br /> <br /> Khi bổ sung cao cồn 70%, cao ethyl acetat,<br /> isoquercitrin từ l{ Chùm ng}y v|o môi trƣờng<br /> chứa ethanol 100 mM, chỉ có isoquercitrin 10<br /> µg/ml và cao ethyl acetat 42,3 µg/ml bảo vệ tế<br /> bào gan làm giảm tình trạng tích lũy lipid so với<br /> mẫu tế bào chỉ đƣợc xử lý với ethanol 100 mM (p<br /> < 0,05). Tuy nhiên, lƣợng lipid trong tế bào gan<br /> đƣợc xử lý đồng thời với ethanol 100 mM và<br /> mẫu thử chƣa trở về mức bình thƣờng của mẫu<br /> sinh lý. Tác dụng của cao cồn 70%, cao ethyl<br /> acetat và isoquercitrin từ lá Chùm ngây thấp hơn<br /> quercetin 10 µM. Tác dụng giảm tích lũy lipid<br /> nội bào khác biệt không có ý nghĩa giữa 3 nồng<br /> độ của cùng mẫu thử và giữa 3 mẫu cùng hàm<br /> lƣợng isoquercitrin (p > 0,05).<br /> Tác dụng phòng ngừa tình trạng tăng sinh<br /> gốc tự do<br /> Trong tế bào gan, glutathion tự do hiện diện<br /> ở dạng khử có nhóm -SH (ký hiệu GSH) là một<br /> chất đóng vai trò chống oxy hóa. Các tác nhân<br /> gây tổn thƣơng tế bào gan nhƣ rƣợu l|m tăng<br /> sinh gốc tự do dẫn đến làm giảm lƣợng GSH nội<br /> b|o. H|m lƣợng GSH trong tế bào gan càng cao<br /> chứng tỏ khả năng bảo vệ tế bào của mẫu thử<br /> phòng ngừa tác hại của tác nhân gây oxy hóa<br /> càng cao. Tác dụng bảo vệ tế bào gan HepG2 của<br /> cao cồn 70%, cao ethyl acetat và isoquercitrin từ<br /> lá Chùm ngây giúp phòng ngừa tình trạng tăng<br /> <br /> Chuyên Đề Dƣợc<br /> <br /> sinh gốc oxy tự do gây ra bởi rƣợu đƣợc trình<br /> bày trong Bảng 4.<br /> Cả 3 nồng độ isoquercitrin v| NĐ1 cao cồn<br /> 70% giảm lƣợng GSH nội b|o có ý nghĩa thống<br /> kê so với chứng sinh lý (p < 0,05). NĐ2, NĐ3 cao<br /> cồn 70% v| NĐ3 cao ethyl acetat từ lá Chùm<br /> ng}y tăng lƣợng GSH nội bào so với chứng sinh<br /> lý (p < 0,05). Xử lý tế bào với ethanol 100 mM<br /> trong 24 giờ làm giảm 31,3% lƣợng GSH nội bào<br /> so với sinh lý (p < 0,01). Quercetin 10 µM giúp<br /> lƣợng GSH tăng so với ethanol 100 mM (p < 0,01)<br /> v| cao hơn mẫu sinh lý (p < 0,01). So với ethanol<br /> 100 mM, nồng độ NĐ2, NĐ3 isoquercitrin v| cao<br /> ethyl acetat có tác dụng chống oxy hóa, l|m tăng<br /> lƣợng GSH nội bào (p < 0,05) về mức tƣơng<br /> đƣơng ở mẫu chứng sinh lý (p > 0,05). Tác dụng<br /> phòng ngừa tình trạng stress oxy hóa, tăng<br /> lƣợng GSH thấp hơn quercetin 10 µM (p < 0,05).<br /> Cả 3 nồng độ khảo sát của cao cồn từ lá<br /> Chùm ng}y đều l|m tăng lƣợng GSH nhƣng<br /> không có ý nghĩa thống kê so với mẫu ethanol<br /> 100 mM (p > 0,05). Nhìn chung, chỉ isoquercitrin<br /> và cao ethyl acetat thể hiện tác dụng phòng ngừa<br /> tình trạng oxy hóa do rƣợu g}y ra, tăng lƣợng<br /> GSH nội bào, tác dụng tốt ở mẫu có h|m lƣợng<br /> isoquercitrin 10 µg/ml; không khác biệt có ý<br /> nghĩa thống kê giữa 2 mẫu thử có cùng hàm<br /> lƣợng isoquercitrin (p > 0,05).<br /> <br /> 363<br /> <br />