Luận văn Thạc sĩ Khoa học: Phân tích đa hình di truyền và mức độ biểu hiện của genOsHKT2;4 ở lúa (Oryza sativa)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI<br /> TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN<br /> ---------------------------------<br /> <br /> Nguyễn Tiến Đạt<br /> <br /> PHÂN TÍCH ĐA HÌNH DI TRUYỀN<br /> VÀ MỨC ĐỘ BIỂU HIỆN CỦA GENOsHKT2;4<br /> Ở LÚA (Oryza sativa)<br /> <br /> LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC<br /> <br /> Hà Nội - 2016<br /> <br /> ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI<br /> TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN<br /> ------------*<br /> <br /> *------------<br /> <br /> Nguyễn Tiến Đạt<br /> <br /> PHÂN TÍCH ĐA HÌNH DI TRUYỀN<br /> VÀ MỨC ĐỘ BIỂU HIỆN CỦA GENOsHKT2;4<br /> Ở LÚA (Oryza sativa)<br /> Chuyên ngành :<br /> <br /> Di truyền học<br /> <br /> Mã số:<br /> <br /> 60420121<br /> <br /> LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC<br /> <br /> Cán bộ hƣớng dẫn: TS. Đỗ Thị Phúc<br /> <br /> Hà Nội, 2016<br /> <br /> LỜI CẢM ƠN<br /> <br /> Lời đầu tiên, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến TS. Đỗ<br /> Thị Phúc, người đã hướng dẫn, quan tâm và tận tình chỉ bảo, giúp<br /> đỡ tôi trong suốt quá trình học tập và thực hiện đề tài. Cảm ơn cô,<br /> người đã luôn truyền cảm hứng và niềm tin cho tôi trong từng thí<br /> nghiệm, từng công việc.<br /> Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới các thầy cô công tác tại<br /> Bộ môn Di truyền học đã quan tâm và tạo mọi điều kiện<br /> thuận lợi giúp tôi hoàn thành luận văn. Các thầy cô đã chỉ bảo cho tôi<br /> sự cẩn thận, kiên trì và nghiêm túc trong nghiên cứu khoa học.<br /> Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn tới CN. Trần Xuân An, CN.<br /> Phạm Quỳnh Hoa, CN. Ngô Thị Hạnh đã luôn giúp đỡ tôi<br /> trong các thí nghiệm. Các em đã luôn quan tâm và truyền đạt cho tôi<br /> những kinh nghiệm quý báu trong thực nghiệm.<br /> Tôi xin chân thành cảm ơn Phòng Thí nghiệm Trọng<br /> điểm Công nghệ Protein và Enzyme; Học viện Nông<br /> nghiệp Việt Nam đã giúp đỡ tôi rất nhiều trong quá trình thực<br /> <br /> hiện đề tài.<br /> Cuối cùng, tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, người<br /> thân, những người đã tận tình giúp đỡ, chỉ bảo và tạo điều kiện tốt<br /> nhất để tôi học tập. Cảm ơn mọi người đã luôn động viên, khuyến<br /> khích tôi trong quá trình học tập và thí nghiệm.<br /> Hà Nội, tháng 11 năm 2016<br /> <br /> Nguyễn Tiến Đạt<br /> <br /> MỤC LỤC<br /> MỞ ĐẦU ..........................................................................................................1<br /> CHƢƠNG 1.<br /> <br /> TỔNG QUAN TÀI LIỆU ......................................................3<br /> <br /> 1.1.<br /> <br /> Giới thiệu về cây Lúa (Oryza sativa) .............................................. 3<br /> <br /> 1.2.<br /> <br /> Giới thiệu về họ protein vận chuyển ion xuyên màng HKT ở<br /> <br /> thực vật và ở lúa...................................................................................... 4<br /> 1.2.1.<br /> <br /> Họ protein HKT ở thực vật ....................................................... 5<br /> <br /> 1.2.2.<br /> <br /> Họ protein HKT ở cây lúa ......................................................... 8<br /> <br /> 1.2.3.<br /> <br /> Gen OsHKT2;4 .......................................................................... 9<br /> <br /> 1.2.4.<br /> <br /> Tình hình nghiên cứu gen OsHKT2;4 ..................................... 10<br /> <br /> 1.3.<br /> <br /> Một số phƣơng pháp nghiên cứu đa hình nucleotide .................... 11<br /> <br /> 1.3.1.<br /> <br /> Phƣơng pháp RFLP-PCR ........................................................ 11<br /> <br /> 1.3.2.<br /> <br /> Phƣơng pháp giải trình tự ........................................................ 14<br /> <br /> 1.4.<br /> <br /> Phƣơng pháp phân tích mức độ biểu hiện của gen ....................... 16<br /> <br /> 1.4.1.<br /> <br /> Lai Northern blot và lai huỳnh quang tại chỗ ......................... 16<br /> <br /> 1.4.2.<br /> <br /> RT-PCR và Real-time PCR ..................................................... 17<br /> <br /> 1.4.3.<br /> <br /> Các phƣơng pháp sử dụng chip ............................................... 19<br /> <br /> CHƢƠNG 2. ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP .......................................20<br /> 2.1.<br /> <br /> Đối tƣợng nghiên cứu, hóa chất và thiết bị ................................... 20<br /> <br /> 2.1.1.<br /> <br /> Đối tƣợng nghiên cứu .............................................................. 20<br /> <br /> 2.1.2.<br /> <br /> Vật liệu, hóa chất và thiết bị.................................................... 21<br /> <br /> 2.2.<br /> <br /> Phƣơng pháp nghiên cứu .............................................................. 22<br /> <br /> 2.2.1.<br /> <br /> Các phƣơng pháp sử dụng trong nghiên cứu đa hình gen<br /> <br /> OsHKT2;4 ............................................................................................. 22<br /> 2.2.2.<br /> <br /> Các phƣơng pháp sử dụng trong phân tích biểu hiện gen ....... 26<br /> <br /> CHƢƠNG 3.<br /> 3.1.<br /> <br /> KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .............................................30<br /> <br /> Phân tích đa hình gen Oshkt2;4 ở lúa ........................................... 30<br /> <br /> 3.1.1.<br /> <br /> Tách chiết DNA tổng số .......................................................... 30<br /> <br /> 3.1.2.<br /> <br /> Khuếch đại gen OsHKT2;4 bằng PCR .................................... 31<br /> <br /> 3.1.3.<br /> <br /> Giải trình tự gen OsHKT2;4 .................................................... 32<br /> <br /> 3.1.4.<br /> <br /> Phân tích đa hình gen OsHKT2;4............................................ 33<br /> <br /> 3.2.<br /> <br /> Phân tích biểu hiện gen ................................................................. 43<br /> <br /> 3.2.1.<br /> <br /> Kết quả trồng lúa thủy canh và xử lý mặn .............................. 43<br /> <br /> 3.2.2.<br /> <br /> Kết quả tách chiết RNA và tổng hợp cDNA ........................... 43<br /> <br /> 3.2.3.<br /> <br /> Phản ứng Real-time PCR và phân tích mức độ biểu hiện<br /> <br /> gen OsHKT2;4 ...................................................................................... 44<br /> KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .......................................................................50<br /> KẾT LUẬN .............................................................................................. 50<br /> KIẾN NGHỊ .............................................................................................. 50<br /> TÀI LIỆU THAM KHẢO..............................................................................51<br /> Phụ lục 1<br /> Phụ lục 2<br /> Phụ lục 3<br /> Phụ lục 4<br /> <br />