Luận văn Thạc sĩ Khoa học vật chất: Nghiên cứu phân lập một số hợp chất hóa học từ thân rễ loài thực vật Tri mẫu (Anemarrhena asphodeloides Bunge)

Chia sẻ: _ _ | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:83

Thêm vào BST

Báo xấu

30
lượt xem 5
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Mục tiêu của đề tài là phân lập một số hợp chất hóa học từ thân rễ loài thực vật Tri mẫu (Anemarrhena asphodeloides Bunge), tiến hành thử hoạt tính sinh học của các hợp chất đã phân lập được. Mời các bạn cùng tham khảo nội dung chi tiết.

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Luận văn Thạc sĩ Khoa học vật chất: Nghiên cứu phân lập một số hợp chất hóa học từ thân rễ loài thực vật Tri mẫu (Anemarrhena asphodeloides Bunge)

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM NGUYỄN THÚY QUỲNH NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT HÓA HỌC TỪ THÂN RỄ LOÀI THỰC VẬT TRI MẪU (Anemarrhena asphodeloides Bunge) LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC VẬT CHẤT Thái Nguyên - Năm 2017
ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM NGUYỄN THÚY QUỲNH NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT HÓA HỌC TỪ THÂN RỄ LOÀI THỰC VẬT TRI MẪU (Anemarrhena asphodeloides Bunge) Chuyên ngành: Hóa hữu cơ Mã số: 60 44 01 14 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC VẬT CHẤT Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS. PHẠM VĂN KHANG Thái Nguyên - Năm 2017
LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi, các số liệu, kết quả nêu trong luận văn này là trung thực chưa từng được ai công bố trong bất kỳ công trình nghiên cứu nào khác. Học viên Nguyễn Thúy Quỳnh NHẬN XÉT CỦA NHẬN XÉT CỦA GIÁO VIÊN KHOA CHUYÊN MÔN HƢỚNG DẪN i
LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành gửi lời cảm ơn sâu sắc của mình tới TS. Phạm Văn Khang - người thầy đã hướng dẫn tận tình cho tôi trong suốt quá trình học tập, nghiên cứu và thực hiện luận văn. Tôi xin chân thành cảm ơn các thầy cô giáo Kho H học, các học viên cao học K23 và các em sinh viên trong phòng thí nghiệm Hóa hữu cơ đã tạo môi trường nghiên cứu khoa học thuận lợi giúp đỡ tôi hoàn thành các kế hoạch nghiên cứu. Đ c iệt tôi xin chân th nh cảm ơn học vi n Đ o M i Phương (K24), Roãn Th hinh K48 Đinh Th Ho i K49 đã h trợ v giúp đỡ tôi quá tr nh thực hiện đ t i. Tôi cũng xin chân th nh cảm ơn B n giám hiệu, Ban Chủ nhiệm khoa Hóa, Phòng Đ o tạo (bộ phận S u đại học) trường Đại học Sư phạm Thái Nguy n đã tạo mọi đi u kiện thuận lợi cho tôi hoàn thành luận văn n y. Thái Nguyên, tháng năm 2017 Học viên Nguyễn Thúy Quỳnh ii
MỤC LỤC Trang Trang bìa phụ Lời c m đo n ................................................................................................................ i Lời cảm ơn ................................................................................................................... ii Mục lục ....................................................................................................................... iii Danh mục bảng ........................................................................................................... iv Danh mục hình............................................................................................................. v Danh mục các từ viết tắt ............................................................................................. vi MỞ ĐẦU ..................................................................................................................... 1 1. Lí do chọn đ tài ...................................................................................................... 1 2. Mục tiêu củ đ tài .................................................................................................. 2 3. Nội dung nghiên cứu ............................................................................................... 2 4. Phương pháp nghi n cứu ......................................................................................... 2 5. Dự kiến kết quả đ tài .............................................................................................. 3 Chƣơng 1. TỔNG QUAN .......................................................................................... 4 1.1. Khái quát v thực vật họ Thùa (Agavaceae) ........................................................ 4 1.2. Tổng quan v loài Tri mẫu (Anemarrhena asphodeloides Bunge) ....................... 4 1.2.1. Tên khoa học ..................................................................................................... 4 1.2.2. Đ c điểm thực vật .............................................................................................. 4 1.2.3. Phân bố trong tự nhiên ...................................................................................... 6 1.2.4. Công dụng của loài Tri mẫu .............................................................................. 6 1.3. T nh h nh nghi n cứu th nh phần h học o i Tri mẫu ...................................... 7 1.3.1. ác hợp ch t g ycoside ...................................................................................... 7 1.3.2. Các hợp ch t aglycon ...................................................................................... 22 1.3.3. Các hợp ch t phenolic ..................................................................................... 25 1.4. Tình hình nghiên cứu hoạt tính sinh học loài Tri Mẫu ....................................... 27 1.4.1. Hoạt tính sinh học của các saponin ................................................................. 27 1.4.2. Hoạt tính sinh học của các aglycon ................................................................. 29 Chƣơng 2. THỰC NGHIỆM .................................................................................. 33 2.1. Đối tượng nghiên cứu ......................................................................................... 33 2.2. Hóa ch t và thiết b ............................................................................................. 33 2.2.1. Hóa ch t ........................................................................................................... 33 iii
2.2.2. Thiết b ............................................................................................................. 33 2.3. Phương pháp xử lý mẫu thực vật, chiết tách v xác đ nh c u trúc các ch t phân lập được ..................................................................................................................... 34 2.3.1. Xử lý mẫu thực vật .......................................................................................... 34 2.3.2. Chiết tách các ch t ........................................................................................... 34 2.3.3. Xác đ nh c u trúc các ch t ............................................................................... 34 2.4. Phương pháp xác đ nh khả năng ức chế tế o ung thư ..................................... 34 2.4.1. Mẫu thử............................................................................................................ 34 2.4.2 Vật liệu v phương pháp nghi n cứu................................................................ 34 2.5. Thực nghiệm ....................................................................................................... 36 2.5.1. Quá trình phân lập các ch t từ phần rễ của loài Tri mẫu................................. 36 2.5.2. Một số đ c điểm vật củ các ch t phân lập được ........................................ 39 Chƣơng 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .............................................................. 40 3.1. Kết quả phân lập các hợp ch t ............................................................................ 40 3.2. Kết quả xác đ nh c u trúc của hợp ch t .............................................................. 40 3.2.1. Hợp ch t 1 .................................................................................................. 40 3.2.2. Hợp ch t 2 .................................................................................................. 44 3.2.3. Hợp ch t AA3 .................................................................................................. 50 3.3. Kết quả nghiên cứu hoạt tính độc tế bào trên dòng tế o ung thư HeLa (cổ tử cung v A549 tế o ung thư g n .......................................................................... 57 KẾT LUẬN ............................................................................................................... 59 KIẾN NGHỊ ............................................................................................................. 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO....................................................................................... 60 BÀI BÁO ĐƢỢC ĐĂNG TRONG THỜI GIAN NGHIÊN CỨU....................... 65 PHỤ LỤC iv
DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1: Sự tương qu n giữa HC của ch t AA2 ................................................. 49 Bảng 3.2: Sự tương qu n giữa HC của ch t AA3 ................................................. 55 Bảng 3.3: Tác động gây độc tế o ung thư của các mẫu nghiên cứu ...................... 57 iv
DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Các bộ phận cây Tri mẫu. ............................................................................5 Hình 1.2: Rễ cây Tri mẫu ............................................................................................ 6 Hình 1.3: Cây Tri mẫu .................................................................................................6 Hình 3.1. Phổ 1H-NMR của ch t AA1.......................................................................41 Hình 3.2. Phổ 13C-NMR của ch t AA1 .....................................................................42 Hình 3.3. Phổ DEPT-135 của ch t AA1 ....................................................................42 Hình 3.4. Phổ HSQC của ch t AA1...........................................................................43 Hình 3.5. Sự tương qu n giữa HC của ch t AA1 (HMBC) ..................................43 Hình 3.6. Công thức c u tạo của AA1 .......................................................................44 Hình 3.7. Phổ hối ượng củ AA1 ...........................................................................44 Hình 3.8. Phổ 1H-NMR của ch t AA2.......................................................................45 Hình 3.9. Phổ 13C-NMR của ch t AA2 .....................................................................46 Hình 3.10. Phổ DEPT-135 của ch t AA2 ..................................................................47 Hình 3.11. Phổ HSQC của ch t AA2 ........................................................................48 Hình 3.12. Sự tương qu n giữa HC của ch t AA2 (HMBC) ................................ 49 Hình 3.13. Phổ hối ượng củ AA2 .........................................................................50 Hình 3.14. Công thức c u tạo của AA2 .....................................................................50 Hình 3.15. Phổ 1H-NMR của ch t AA3.....................................................................51 Hình 3.16. Phổ 13C-NMR của ch t AA3 ...................................................................52 Hình 3.17. Phổ DEPT-135 của ch t AA3 ..................................................................53 Hình 3.18. Phổ HSQC của ch t AA3 ........................................................................54 Hình 3.19. Sự tương qu n giữa HC của ch t AA3 (HMBC) .................................55 Hình 3.20. Phổ hối ượng củ AA3 .........................................................................56 Hình 3.21. Công thức c u tạo của AA3 .....................................................................56 v
DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Ký hiệu Từ nguyên gốc STT và từ viết tắt 1 1 H-NMR Proton Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy 13 2 C-NMR Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy 3 TOF-MS Time-of-Flight Mass spectroscopy 4 HSQC Heteronuclear Single Quantum Coherence Spectroscopy 5 HMBC Heteronuclear Multiple Bond Connectivity 6 DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer 7 CHCl3 Cloroform 8 CH2Cl2 Diclometan 9 CCl4 Cacbon tetraclorua 10 EA Etyl Axetat vi
MỞ ĐẦU 1. Lí do chọn đề tài Thế giới thực vật r t phong phú v đ dạng, nó cung c p cho con người nguồn tài nguyên vô cùng quý giá v nhi u ĩnh vực đ c biệt là ứng dụng trong Y–Sinh học. Theo tổ chức y tế thế giới hiện nay khoảng 80% dân số thế giới sử dụng nguồn dược liệu để tr bệnh v chăm s c sức khỏe.... Xu hướng nghiên cứu tìm kiếm các hợp ch t thiên nhiên có hoạt tính sinh học cao từ các loài thực vật m dược phẩm chữa bệnh ngày c ng thu hút được sự quan tâm của các nhà khoa học. Từ thực tế nhận th y các hợp ch t thi n nhi n thường có hoạt tính mạnh độ ổn đ nh c o v c độc tính th p so với các hợp ch t nguồn gốc tổng hợp. Hóa học các hợp ch t thiên nhiên, một bộ phận của chuyên ngành Hóa hữu cơ đ ng c xu hướng phát triển mạnh mẽ. Bởi vì, theo các công trình nghiên cứu trên thế giới cũng như ở Việt Nam nhi u hợp ch t thi n nhi n c dược tính chữa bệnh r t lớn như hoạt tính kháng khuẩn háng oxi h háng ung thư…. hẳng hạn như hợp ch t P c it xe T xo c trong cây Thông đỏ dùng làm thuốc hóa tr chữa bệnh ung thư ho c hợp ch t aglycon có trong loài cây Tri mẫu có khả năng ảo vệ tế o não để nâng cao khả năng trí nhớ và ức chế tế o ung thư.... Do vậy, việc nghiên cứu các ch t mang hoạt tính sinh học cao có trong các loài cây, cỏ có tác dụng thiết thực trong đời sống hàng ngày là v n đ quan tâm của toàn xã hội. Tri mẫu là một trong những loài thực vật thuộc họ Thù g v ce e đã được sử dụng từ âu để chữa một số bệnh như: vi m nhiễm, th p khớp, bệnh thần kinh... Gần đây nhi u nghiên cứu đã chứng minh d ch chiết cao và hợp ch t hóa học được phân lập từ loài thực vật này có khả năng ức chế nhi u dòng tế o ung thư v ảo vệ tế o não dưới các tác động gây tổn thương của glutamat, hyperglycemia, beta- amyloid nhằm đ nh hướng chữa bệnh Alzheimer và Parkinson. Ở Việt Nam, Tri mẫu thường được dùng trong các bài thuốc tr đ u hớp đ u dạ d y v vi m đại tr ng.... Nhưng đến nay chỉ có ít các công trình nghiên cứu v thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của loài thực vật này, các nghiên cứu này tương đối đơn giản v chư c tính hệ thống cao, đồng thời dựa trên kết quả của nhóm nghiên cứu v loài thực vật này chúng tôi nhận th y Tri mẫu có thành phần hóa 1
học đ dạng, có một số nhóm hợp ch t có hoạt tính tốt nên việc tiếp tục tiến hành nghiên cứu v thành phân hóa học v đánh giá hoạt tính sinh học của loài thực vật n y để m cơ sở cho việc sử dụng làm thuốc chữa bệnh là r t cần thiết c nghĩ khoa học và thực tiễn. D đ chúng tôi đ xu t đ tài: “Nghiên cứu phân lập một số hợp chất hóa học từ thân rễ loài thực vật Tri mẫu (Anemarrhena asphodeloides Bunge)” để giải quyết v n đ đ . Trong đ tài này sẽ cung c p các thông tin khoa học giá tr m cơ sở khoa học quan trọng để sử dụng loài thực vật này làm thuốc chữa bệnh và sàng lọc các hợp ch t có hoạt tính tốt để tiến hành nghiên cứu tiếp theo. Đồng thời góp phần v o đ o tạo nguồn nhân lực cho vùng núi phía Bắc và cả nước. 2. Mục tiêu của đề tài - Phân lập một số hợp ch t hóa học từ thân rễ loài thực vật Tri mẫu (Anemarrhena asphodeloides Bunge). - Tiến hành thử hoạt tính sinh học của các hợp ch t đã phân ập được. 3. Nội dung nghiên cứu - Tổng quan các nghiên cứu trong nước và trên thế giới đã công bố v loài Tri mẫu. - Tiến hành chiết xu t các hợp ch t từ loài thực vật này. - Phân lập v xác đ nh c u trúc của nó bằng các phương pháp phổ. - Tiến hành thử hoạt tính sinh học của các hợp ch t phân lập được. 4. Phƣơng pháp nghiên cứu 4.1. Phƣơng pháp lý thuyết - Thu thập, tổng hợp, phân tích tài liệu trong v ngo i nước v loài tri mẫu để có cái nhìn tổng quan v nó. - Phân tích tài liệu để c cơ sở khoa học v mối quan hệ giữa hoạt tính và c u trúc của mẫu nghiên cứu. 4.2. Phƣơng pháp thực nghiệm - Thu thập mẫu nguyên liệu thực vật Mẫu thực vật là phần rễ loài Tri mẫu được thu mua ở Hà Giang vào tháng 6/2016. 2
- Xây dựng phương pháp chiết xu t các ch t có trong mẫu. + Xác đ nh phương pháp phân tích chính xác thuận tiện nh t cho quá trình thực hiện. + Xây dựng quy trình xử lý nguyên liệu và chiết xu t các hợp ch t từ loài thực vật trên. + Xử lý mẫu thực vật và chiết mẫu bằng dung môi khảo sát để lựa chọn dung môi an toàn, phù hợp. - Xây dựng và dự kiến phương pháp để thu được các hợp ch t từ nguyên liệu đã chọn. + Sử dụng phương pháp sắc ký cột bằng các dung môi thích hợp để phân lập một số hợp ch t h học. + Xác đ nh c u trúc hóa học của các hợp ch t bằng phương pháp vật . - Phương pháp đánh giá hoạt tính sinh học. Dự đoán hoạt tính sinh học điển hình của các ch t đã phân ập được dựa vào c u trúc của chúng và tiến hành thử hoạt tính sinh học. 5. Dự kiến kết quả đề tài - Phân lập một số hợp ch t hóa học từ thân rễ loài Tri mẫu. - Xác đ nh c u trúc hóa học của các hợp ch t phân lập được. - Đánh giá hoạt tính sinh học của các hợp ch t. 3
Chƣơng 1 TỔNG QUAN 1.1. Khái quát về thực vật họ Thùa (Agavaceae) Họ Thùa bao gồm khoảng 550-640 loài với khoảng 18-23 chi, phân bố rộng khắp trong khu vực ôn đới, cận nhiệt đới và nhiệt đới trên thế giới. Các loài trong họ Thùa có thể là cây mọng nước ho c không mọng nước. Lá củ chúng c các gân á song song á thường dài và nhọn mũi thường có gai cứng ở đỉnh đôi hi c các g i phụ mọc dọc theo mép lá [1]. Các loài thực vật họ Thù thường được sử dụng để sản xu t các dạng đồ uống chứa cồn ở khu vực Trung Mỹ như i pu que v rượu mezcal trong khi các loài khác có giá tr để l y sợi. Chúng r t phổ biến trong khu vực khô cằn, nhi u loài có hoa s c sỡ [1]. Lo i Tri mẫu Anemarrhena asphodeloides Bunge m chúng tôi đ ng nghi n cứu o i duy nh t thuộc chi Anemarrhena củ họ Thù (Agavaceae). 1.2. Tổng quan về loài Tri mẫu (Anemarrhena asphodeloides Bunge) 1.2.1. Tên khoa học - Tên Khoa học: Anemarrhena asphodeloides Bunge. - Tên tiếng Việt: Tri mẫu. - Tên khác: Rhizoma Anemarrhena, zhimu. 1.2.2. Đặc điểm thực vật Tri mẫu là cây thảo, sống âu năm. Thân rễ dày, dẹt, mọc ngang bao bọc bởi những phần còn sót lại của gốc á m u đỏ h y v ng đỏ, m t trong màu vàng. Lá mọc tụ tập ở gốc thành cụm dày, hình dài, dài 20 - 70 cm, rộng 3 - 6mm, gốc có bẹ to mọc ốp v o nh u đầu thuôn nhọn, hai m t nhẵn [2]. Rễ cây tri mẫu hình khúc dẹt ho c trụ hơi cong queo c hi phân nhánh d i 3 - 15 cm đường kính 0,8 - 1,5 cm. Một đầu còn sót lại gốc thân và vết cuống lá màu vàng nhạt. M t ngo i c m u v ng nâu đến nâu. M t trên của thân rễ có một rãnh lớn và có nhi u đốt vòng xếp sít nh u tr n đốt có nhi u gốc lá còn sót lại màu nâu vàng mọc ra 2 bên, m t dưới có nếp nhăn v nhi u vết rễ nhỏ hình ch m tròn lồi lõm. Ch t cứng, dễ bẻ gẫy. M t gẫy màu vàng nhạt. Mùi nhẹ. V hơi ngọt đắng, nhai có ch t nhớt [2]. 4
Thân củ cây Tri mẫu được thu hái vào mùa thu ho c mùa xuân. Sau khi loại bỏ rễ xơ rửa sạch phơi hô v ngâm ngập nước, lột vỏ, thái thành lát mỏng v nướng với muối. Cụm hoa mọc từ giữ túm á h nh ông hơi cong cán thẳng và dài 0,5 - 1m; hoa nhỏ thơm nở vào buổi chi u, bao hoa màu trắng hay tía nhạt, chia 6 thùy dính nhau ở gốc; nh 3, chỉ nh r t ngắn; bầu 3 ô, vòi nhụy hình chỉ[2]. Quả nang, hình trứng, nhọn đầu, có cạnh; hạt 1 - 2 h nh t m giác m u đen[2]. Mùa hoa: tháng 7 – 8 [2]. A: Rễ. B: Cụm hoa. C: Hoa. D: Tràng hoa với bao ph n gắn li n với bên ngoài lọn cánh đ i. E: Nhụy hoa. F: Quả nang nẻ ra. G: Hạt hình thoi Hình 1.1: Các bộ phận cây Tri mẫu. 5
Hình 1.2: Rễ cây Tri mẫu Hình 1.3: Cây Tri mẫu 1.2.3. Phân bố trong tự nhiên Tri mẫu (Anemarrhena asphodeloides Bunge) là loại thảo dược âu năm được trồng ho c mọc ho ng tr n sườn núi ở Mãn Châu, Mông Cổ, và mi n Bắc của Trung Quốc [7]. Ở Việt Nam, loài thực vật này chủ yếu phân bố ở các tỉnh phía bắc như Thái Nguyên, Bắc Kạn, Tuyên Quang,... 1.2.4. Công dụng của loài Tri mẫu Tri mẫu được dùng tr sốt đái tháo đường ho ho đờm thở dốc, ngực nóng khó ch u ho o …. Một số bài thuốc có Tri mẫu [1]: - Đi u tr các triệu chứng sốt cao, co giật, hôn mê trong viêm não Nhật Bản B: 6
Tri mẫu 16g, thạch cao 40g; kim ngân, huy n sâm sinh đ a, m i v 16g; hoàng liên, liên ki u, m i v 12g; cam thảo 4g. Sắc uống. - Chữa viêm phổi trẻ em thể phong nhiệt, sốt cao: Tri mẫu 6g, thạch cao 20g, kim ngân hoa 16g, tang bạch bì 8g; hoàng liên, liên ki u, hoàng cầm, m i v 6g; cam thảo 4g. Sắc uống ngày một thang. - Chữa sốt cao, li bì, mê sảng trong bệnh sởi trẻ em: Tri mẫu 8g; huy n sâm, gạo tẻ, m i v 12g; sừng trâu 8g, cam thảo 4g. Sắc uống ngày một thang. - Chữa huyết áp cao, nhức đầu, hoa mắt, khó ngủ: Dùng bài Tri bá bát v hoàn gia giảm nêu trên, thêm thảo quyết minh sao 20g, chi tử 12g. - Chữa nóng âm, háo khát, mồ hôi trộm ho h n đái tháo đường: Dùng bài Tri bá bát v hoàn gia giảm nêu trên, thêm huy n sâm, thiên môn, thiên hoa ph n, m i v 16g. 1.3. T nh h nh nghiên cứu th nh phần h a học lo i Tri mẫu 1.3.1. Các hợp chất glycoside Các saponin thuộc loại glycoside steroid. Nên khi phân lập được glycoside chủ yếu là các hợp ch t saponin. Hợp ch t được phân lập sớm nh t từ loài thực vật này là Timosaponin A-III (1). Khi thủy phân ch t này với xit H 2N trong et no 50% thu được sarsasapogenin, D-galactose và D-glucose. Đây ch t có nhi u ứng dụng và thu hút được sự quan tâm nghiên cứu của nhi u nhóm tác giả. H3C CH3 O H3C OH H3C O OH O OH O HO O O OH OH OH (1) 7
Từ d ch chiết etanol của loài Tri mẫu, Dong và các cộng sự [8] đã t m r một saponin mới là Anemarsaponin B (2) cùng với h i s ponin đã iết là Anemarsaponin A1 (3) và Anemarsaponin A2 (4). HO HO OH O H3C H3C OH O H3C HO H3C O OH O OH O HO H O O OH HO OH (2) O HO O OH O OH O HO O O OH OH OH (3) O HO O HO OH O OH O HO O O OH OH OH (4) 8
Nhóm nghiên cứu ở nhật Bản do Nakashima phụ trách đã phân lập được glycoside mới là pseudoprototimosaponin AIII (5) và prototimosaponin AIII (6). O Glc CH 3 H3C CH3 O CH3 Gal O H Glc (5) O Glc CH 3 H3C HO CH3 O CH3 Gal O H Glc (6) Các saponin steroid mới có tên: anemarrhena saponin I-IV (7-10) cùng với các s ponin đã iết là timosaponin A-III (1), marcogenin diglycoside (11), timosaponin B-II (12) và mangiferin (13) đãđược Setsuo và cộng sự phân lập từ rễ của loài tri mẫu v o năm 1994. C u trúc củ chúng đã được xác đ nh bằng các phương pháp phổ [33]. H3C OH CH3 CH3 HO O CH3 OH O R1 OH R2 O HO O O OH OH OH (7): R1=H, R2=OH (8): R1=OH, R2=H 9
H3C CH3 O CH3 HO R3 O CH3 OH O R1 OH R2 O HO O O OH OH OH (9) R1=R3=H, R2=OH (11) R1=R2=H, R3=OH HO O OH OH O CH3 H3C OH CH3 HO O CH3 OH O OH O HO O O OH OH OH (10) HO O OH OH O CH3 H3C OH OH CH3 HO O CH3 OH O OH O H HO O O OH OH OH (12) 10
HO HO O OH O OH OH OH OH O OH (13) Bằng phương pháp sắc ký cột và v phương pháp sắc ký HPLC, Setsuo và cộng sự tiếp tục phân lập từ phần rễ của loài tri mẫu được 4 saponine mới là timosaponin H1 (22), timosaponin H2 (23), timosaponin I1 (24), timosaponin I2(25), vào năm 1999 Glc O R CH3 CH3 O CH3 Xyl 3 4 glc gal O 2 Glc (22) R=OH, (23) R=OCH3 Glc O R CH3 CH3 O CH3 Xyl 3 4 glc gal O 2 Glc (24) R=OH, (25) R=OCH3 Xi ings ponin B 26 được Hong và các cộng sự phân lập được hợp ch t saponin steroit từ phần rễ của loài Tri mẫu v o năm 1999[11]. 11