Nghiên cứu tạo giống ngô biến đổi gen kháng sâu

VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM<br /> <br /> NGHIÊN CỨU TẠO GIỐNG NGÔ BIẾN ĐỔI GEN KHÁNG SÂU<br /> Phạm Thị Lý Thu, Nguyễn Văn Đồng,<br /> Phạm Thị Hương, Lê Thị Lan,<br /> Nguyễn Thị Hòa, Nguyễn Anh Vũ,<br /> Phùng Thị Thu Hà, Lê Huy Hàm<br /> Viện Di truyền Nông nghiệp<br /> SUMMARY<br /> Studies on development of genetically modified maize for insect resistance<br /> Insects are major factor to reduce yields of maize. Plant breeding in general and insect resistant<br /> maize in particular are important areas where the breeder has been focusing. Nowadays, the genetically<br /> modified crops are developed by applying the modern biotechnology methods. Insect resistance is one of<br /> the most important traits of the genetically modified crops that have been commercialized. The research<br /> is conducted to evaluate the stability of transgene cry1A(c) in the transgenic maize lines for the purposes<br /> for development of the transgenic maize varieties for insect resistance in Vietnam. The results revealed<br /> that transgene cry1A(c) was not integrated stably into genomic of transformed maize lines of generation<br /> T0-T3 origin from VH1, VN106, HR9 and CH9. Among the transgenic lines analyzed, VH1 line has two<br /> events carrying 2-3 copies of the transgene cry1A(c). The presence of protein cry1A(c) in the transgenic<br /> maize lines from T0 to T3 generation was identified in HR9.20 and CH9.13 lines. The level of toxicity of<br /> the protein cry1A(c) in the transgenic lines against Asian stem borer 3 days old is tested under in vitro<br /> condition. After 5 days of release insects into the leaves of transgenic maize lines most of the insects<br /> were dead. This evidence is expressed remarkable in nine individuals of line CH9.13. These lines show<br /> the stability and expression of transgene. This is potential materials in order to produce the transgenic<br /> maize lines for insect resistance which could be applied in Vietnam.<br /> Keywords: Maize, Zea mays L., genetically modified crops, cry1A(c), insect resistance.<br /> <br /> I. ĐẶT VẤN ĐỀ *<br /> Ngô (Zea mays L.) là cây ngũ cốc quan trọng.<br /> Sâu hại là yếu tố hàng đầu làm giảm năng suất của<br /> cây ngô (Ali và cs., 2010). Chọn tạo giống cây<br /> trồng nói chung và giống ngô kháng sâu nói riêng<br /> là lĩnh vực quan trọng mà các nhà tạo giống đã và<br /> đang tập trung giải quyết. Ngày nay, bằng việc áp<br /> dụng các phương pháp công nghệ sinh học hiện<br /> đại các nhà khoa học đã tạo ra các giống cây trồng<br /> biến đổi gen mang đặc tính mong muốn. Kháng<br /> sâu là một trong những đặc tính quan trọng nhất<br /> của các giống cây trồng biến đổi gen đã được<br /> thương mại hóa. Trong tổng số 170,3 triệu ha cây<br /> trồng biến đổi gen trên thế giới thì ngô chuyển gen<br /> kháng sâu chiếm khoảng 7,5 triệu ha (4%) (James,<br /> 2012). Trong khuôn khổ chương trình Công nghệ<br /> sinh học nông nghiệp, Viện Di truyền Nông<br /> nghiệp đang thực hiện đề tài nghiên cứu tạo giống<br /> ngô chuyển gen kháng sâu và kháng thuốc trừ cỏ.<br /> Giai đoạn 2006-2010 nghiên cứu của đề tài đã thu<br /> nhận được các dòng ngô mô hình, dòng ngô chọn<br /> Người phản biện: GS. TSKH. Trần Duy Quý<br /> <br /> 412<br /> <br /> lọc thế hệ T1 mang gen kháng sâu cry1A(c). Nhằm<br /> mục đích chọn tạo được các giống ngô biến đổi<br /> gen kháng sâu tại Việt Nam, trong giai đoạn 20112014 đề tài triển khai các nghiên cứu đánh giá sự<br /> ổn định của gen chuyển cry1A(c) ở các dòng ngô<br /> chuyển gen đã tạo ra. Kết quả nghiên cứu cho thấy<br /> gen chuyển nạp cry1A(c) kết hợp chưa ổn định<br /> trong hệ gen của các dòng ngô chuyển gen kháng<br /> sâu từ thế hệ T0-T3 thuộc 4 nguồn VH1, VN106,<br /> HR9 và CH9. Trong số các dòng chuyển gen phân<br /> tích, nguồn VH1 có số cá thể và số dòng chuyển<br /> gen thế hệ T3 nhiều hơn, các dòng chuyển gen<br /> mang 2-3 bản copy của gen chuyển cry1A(c). Đã<br /> xác định được sự hiện diện của protein cry1A(c)<br /> trong các dòng ngô chuyển gen từ T0-T3. Đối với<br /> dòng HR9.20 và CH9.13 các cây từ T0-T3 đều<br /> mang protein cry1A(c). Nguồn VN106 đến thế hệ<br /> T3 không thu nhận được cây nào có sự hiện diện<br /> của protein cry1A(c). Trong điều kiện invitro,<br /> chúng tôi đã đánh giá mức độ gây độc của protein<br /> cry1A(c) trong các dòng ngô chuyển gen đối với<br /> sâu đục thân châu Á 3 ngày tuổi. Sau 5 ngày thả<br /> sâu vào các dòng ngô chuyển gen hầu hết số sâu<br /> ăn lá đều bị chết, số còn sống rất ít và khác nhau<br /> <br /> Hội thảo Quốc gia về Khoa học Cây trồng lần thứ nhất<br /> <br /> giữa các dòng chuyển gen. Có 09 cây dòng<br /> CH9.13 có tất cả số sâu thả đều bị chết do độc tố<br /> của protein cry1A(c). Các dòng chuyển gen này<br /> bước đầu thể hiện tính ổn định và biểu hiện của<br /> gen chuyển nạp, cần được tiếp tục đánh giá tính<br /> kháng sâu bền vững trong các thế hệ để tạo ra<br /> nguồn vật liệu các dòng ngô chuyển gen kháng<br /> sâu có thể áp dụng trong điều kiện Việt Nam.<br /> II. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU<br /> 2.1. Vật liệu<br /> Chúng tôi sử dụng nguồn vật liệu là dòng<br /> ngô nhập nội HR9, các dòng ngô chọn lọc<br /> VN106, VH1 và CH9 thuộc tập đoàn các giống<br /> ngô của Viện Di truyền Nông nghiệp.<br /> Các dòng ngô mang gen kháng sâu cry1A(c)<br /> thế hệ T0 có nguồn gốc từ các dòng HR9,<br /> VN106, VH1 và CH9 do nhóm tác giả (Viện Di<br /> truyền nông nghiệp) tạo ra bằng kỹ thuật biến<br /> nạp gen.<br /> Sâu đục thân ngô châu Á (Ostrinia<br /> furnacalis Guenée) tuổi 3 do Viện Bảo vệ thực<br /> vật cung cấp.<br /> 2.2. Phương pháp nghiên cứu<br /> 2.2.1. Phương pháp thí nghiệm đồng ruộng<br /> Đối với mỗi dòng ngô chuyển gen của mỗi<br /> thế hệ từ T2 chúng tôi gieo ngẫu nhiên 30 hạt,<br /> sau đó tiến hành phân tích các cá thể để đánh giá<br /> tính ổn định của gen chuyển. Các dòng ngô<br /> chuyển gen này được trồng trong nhà lưới cách ly<br /> côn trùng, loại trừ các yếu tố thiên địch. Chế độ<br /> chăm sóc cây ngô được tiến hành theo quy trình<br /> canh tác chuẩn của ngành 10TCN 341<br /> (http://www.cuctrongtrot.gov.vn/ctt/vanban/2007<br /> 819499.doc), khi cây ra hoa tiến hành bao cách<br /> ly, tự thụ phấn bằng tay.<br /> 2.2.2. Các phương pháp phân tích sinh học<br /> phân tử<br /> Tiến hành thu mẫu khi cây ngô được 4 lá,<br /> tách chiết DNA tổng số theo phương pháp CTAB<br /> (Saghai-Maroof và cs., 1984).<br /> Phân tích PCR tiến hành với cặp mồi SCry1A(c) đặc hiệu cho gen cry1A(c) (bảng 1).<br /> Chu kỳ nhiệt của phản ứng PCR: 1 chu kỳ:<br /> 95°C - 3 phút; 30 chu kỳ: 95°C - 1 phút,<br /> 58,5°C - 30s, 72°C - 90s; và 1 chu kỳ kết thúc<br /> ở 72°C - 10 phút.<br /> <br /> Bảng 1. Trình tự đoạn mồi sử dụng<br /> trong nghiên cứu<br /> Đoạn mồi<br /> <br /> Trình tự<br /> <br /> S-Cry1A(c)-F<br /> <br /> 5’-ACAGAAGACCCTTCAATATC-3’<br /> <br /> S-Cry1A(c)-R<br /> <br /> 5’-GTTACCGAGTGAAGATGTAA-3’<br /> <br /> Phân tích Southern blot được tiến hành theo<br /> phương pháp lai không đồng vị phóng xạ, xác<br /> định số bản copy của gen chuyển sử dụng DIG<br /> High Prime DNA Labeling and Detection Starter<br /> Kit I (Roche).<br /> Xác định sự có mặt của protein cry1A(c)<br /> trong các dòng ngô chuyển gen bằng phương<br /> pháp que thử sử dụng Kit EnviroLogix<br /> QuickStixTM (Agdia, USA).<br /> 2.2.3. Đánh giá khả năng kháng sâu bằng<br /> phương pháp thử sâu invitro<br /> Các cây ngô chuyển gen kháng sâu cry1A(c)<br /> được trồng trong điều kiện nhà lưới chống côn<br /> trùng, loại trừ các yếu tố thiên địch. Đánh giá khả<br /> năng kháng sâu đục thân của dòng ngô chuyển<br /> gen so với đối chứng trong điều kiện invitro.<br /> Tiến hành thu lá khi cây đạt 5-6 lá. Lá của<br /> cây ngô chuyển gen kháng sâu và cây đối chứng<br /> được cắt thành các đoạn kích thước 4cm  5cm,<br /> mỗi dòng chọn ngẫu nhiên 5 cây. Mỗi đĩa petri<br /> đặt 3 mẫu lá, thả 5 con sâu non, sau đó giữ đĩa ở<br /> nhiệt độ 25±20C, độ ẩm 70%. Thí nghiệm được<br /> lặp lại 3 lần với mỗi cây của mỗi dòng.<br /> Tỷ lệ sâu non chết trong từng đĩa sẽ được<br /> quan sát và ghi lại hàng ngày, thay lá khi lá bị<br /> héo vàng.<br /> III. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN<br /> 3.1. Phân tích PCR sự có mặt của gen cry1A(c)<br /> trong các dòng ngô chuyển gen kháng sâu<br /> Mẫu DNA tổng số của các dòng chuyển gen<br /> (tất cả số cây dòng T0 và T1; 30 cây/dòng<br /> T2-T3) được chúng tôi tiến hành phân tích PCR<br /> sử dụng cặp mồi S-cry1A(c) đặc hiệu cho gen<br /> cry1A(c). Chất lượng DNA tổng số tách chiết<br /> theo phương pháp CTAB (Saghai -Maroof et al.,<br /> 1984) có cải tiến đạt độ tinh sạch cao, hàm lượng<br /> DNA thu được lớn (dựa trên giá trị OD) đáp ứng<br /> yêu cầu cho phân tích PCR và Southern.<br /> Kết quả phân tích PCR cho thấy sự có mặt<br /> của gen chuyển cry1A(c) đã biến động từ thế hệ<br /> T0 đến T3 ở tất cả các dòng chuyển gen nghiên<br /> cứu (bảng 2).<br /> 413<br /> <br /> VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM<br /> <br /> Bảng 2. Kết quả phân tích PCR các dòng ngô chuyển gen cry1A(c)<br /> TT<br /> <br /> 1<br /> 2<br /> 3<br /> 4<br /> 5<br /> 1<br /> 2<br /> 3<br /> 4<br /> 1<br /> 2<br /> 3<br /> 4<br /> 5<br /> 6<br /> 1<br /> 2<br /> <br /> Tên dòng T0<br /> Nguồn HR9<br /> HR9.14<br /> HR9.20<br /> HR9.34<br /> HR9.32<br /> HR9.42<br /> Nguồn VH1<br /> VH1.40<br /> VH1.37<br /> VH1.36<br /> VH1.48<br /> Nguồn VN106<br /> VN106.21<br /> VN106.30<br /> VN106.7<br /> VN106.19<br /> VN106.27<br /> VN106.20<br /> Nguồn CH9<br /> CH9.12<br /> CH9.13<br /> <br /> Thế hệ T0<br /> 5 (5)<br /> 1<br /> 1<br /> 1<br /> 1<br /> 1<br /> 4 (4)<br /> 1<br /> 1<br /> 1<br /> 1<br /> 6 (6)<br /> 1<br /> 1<br /> 1<br /> 1<br /> 1<br /> 1<br /> 2 (2)<br /> 1<br /> 1<br /> <br /> Số dòng (số cây) có kết quả PCR dương tính<br /> Thế hệ T1<br /> Thế hệ T2<br /> 2 (6)<br /> 1 (12)<br /> 1<br /> 3<br /> 1<br /> 6<br /> 3<br /> 0<br /> 0<br /> 3 (23)<br /> 3 (58)<br /> 3<br /> 15<br /> 14<br /> 24<br /> 6<br /> 19<br /> <br /> Ở hầu hết các dòng chuyển gen, số cây/dòng<br /> và số dòng/nguồn mang gen chuyển đều giảm<br /> đáng kể từ thế hệ T0 đến T3, điều đó chứng tỏ<br /> gen chuyển nạp cry1A(c) thực tế chưa ổn định<br /> trong hệ gen của cây ngô. Trong số 4 nguồn<br /> chuyển gen, có các dòng chuyển gen thuộc nguồn<br /> VN106 đến thế hệ T3 chúng tôi không nhận được<br /> các cây có kết quả PCR dương tính, mặc dù từ<br /> <br /> Thế hệ T3<br /> 1 (1)<br /> 1<br /> <br /> 2 (23)<br /> <br /> 6 (15)<br /> 1<br /> 6<br /> 5<br /> 1<br /> 1<br /> 1<br /> 1 (13)<br /> <br /> 5 (20)<br /> 9<br /> 3<br /> 5<br /> 2<br /> 1<br /> 0<br /> 1 (3)<br /> <br /> 1(13)<br /> <br /> 13<br /> <br /> 3<br /> <br /> 13<br /> <br /> 0<br /> <br /> thế hệ T0-T2 số cây/dòng và số dòng mang gen<br /> là tương đối nhiều so với các nguồn khác. Đến<br /> thế hệ T3, với nguồn VH1 chúng tôi nhận được<br /> số dòng và số cây/dòng có kết quả PCR dương<br /> tính cao nhất (hình 1). Hy vọng rằng đây sẽ là<br /> những dòng chuyển gen bền vững có thể được sử<br /> dụng cho các nghiên cứu chọn tạo giống ngô biến<br /> đổi gen.<br /> <br /> 600 bp<br /> <br /> Hình 1. Kết quả phân tích PCR gen cry1A(c) của dòng chuyển gen VH1 thế hệ T3<br /> (M: Thang DNA chuẩn, (+) DNA plasmid; (-): Cây VH1 không chuyển gen)<br /> <br /> 414<br /> <br /> 15<br /> 8<br /> <br /> Hội thảo Quốc gia về Khoa học Cây trồng lần thứ nhất<br /> <br /> 3.2. Phân tích Southern blot gen cry1A(c)<br /> trong các dòng ngô chuyển gen<br /> Các cây thuộc các dòng ngô chuyển gen có<br /> kết quả PCR dương tính được tiếp tục phân tích<br /> Southern blot nhằm xác định số bản copy của gen<br /> chuyển cry1A(c). DNA của các mẫu chuyển gen<br /> được cắt bằng enzym BamHI, sản phẩm cắt<br /> enzyme sẽ được điện di trên gel agarose 1,2% để<br /> <br /> kiểm tra sự phân tách các băng DNA sau khi cắt.<br /> Mẫu dò cho gen cry1A(c) sử dụng từ sản phẩm<br /> PCR với cặp mồi S-cry1A(c), trình tự mồi được<br /> miêu tả trong phần phương pháp. Mẫu dò được<br /> đánh dấu theo hướng dẫn của Kit DIG High<br /> Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit I<br /> (Roche). Kết quả lai Southern blot được trình bày<br /> ở bảng 3.<br /> <br /> Bảng 3. Kết quả phân tích Southern blot các dòng ngô chuyển gen cry1A(c)<br /> TT<br /> <br /> 1<br /> 2<br /> 3<br /> 4<br /> 5<br /> 1<br /> 2<br /> 3<br /> 4<br /> 1<br /> 2<br /> 3<br /> 4<br /> 5<br /> 6<br /> 1<br /> 2<br /> <br /> Tên dòng T0<br /> Nguồn HR9<br /> HR9.14<br /> HR9.20<br /> HR9.34<br /> HR9.32<br /> HR9.42<br /> Nguồn VH1<br /> VH1.40<br /> VH1.37<br /> VH1.36<br /> VH1.48<br /> Nguồn VN106<br /> VN106.21<br /> VN106.30<br /> VN106.7<br /> VN106.19<br /> VN106.27<br /> VN106.20<br /> Nguồn CH9<br /> CH9.12<br /> CH9.13<br /> <br /> Thế hệ T0<br /> 2<br /> <br /> Số dòng có kết quả Southern blot<br /> Thế hệ T1<br /> Thế hệ T2<br /> 2<br /> 2<br /> 1<br /> 1<br /> 1<br /> 1<br /> <br /> Thế hệ T3<br /> 1<br /> 1<br /> <br /> 3<br /> 1<br /> 1<br /> 1<br /> <br /> 3<br /> 1<br /> 1<br /> 1<br /> <br /> 3<br /> 1<br /> 1<br /> 1<br /> <br /> 2<br /> <br /> 4<br /> 1<br /> 1<br /> 1<br /> 1<br /> <br /> 4<br /> 1<br /> 1<br /> 1<br /> 1<br /> <br /> 2<br /> 1<br /> <br /> 0<br /> <br /> 2<br /> 1<br /> 1<br /> <br /> 2<br /> 1<br /> 1<br /> <br /> 2<br /> 1<br /> 1<br /> <br /> Kết quả lai Southern blot thu được ở bảng 3<br /> cũng cho kết quả tương tự như phân tích PCR đối<br /> với các dòng ngô chuyển gen. Số dòng thể hiện<br /> sự có mặt và sự kết hợp của gen chuyển nạp<br /> <br /> 1<br /> 1<br /> <br /> 1<br /> <br /> 1<br /> 1<br /> <br /> cry1A(c) giảm rõ rệt từ thế hệ T0 đến T3 ở hầu<br /> hết các nguồn chuyển gen. Tuy nhiên chúng tôi<br /> cũng nhận được nguồn VH1 có 02 dòng có kết<br /> quả lai DNA dương tính (hình 2).<br /> <br /> Hình 2. Kết quả lai Southern blot các dòng ngô VH1 chuyển gen cry1A(c) thế hệ T3<br /> M: Marker; 1. Đối chứng dương (DNA plasmid); cây VH1.36.25.2 (giếng 3) có 3 copy;<br /> VH1.37.66.2 (giếng 5) có 2 copy của gen chuyển cry1A(c) <br /> <br /> 415<br /> <br /> VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM<br /> <br /> Kết quả hình 2 cho thấy trong số hai dòng T3<br /> xuất phát từ dòng T0 là VH1.37 và VH1.36 các<br /> cây chuyển gen thế hệ T3 của chúng đều mang ít<br /> nhất 2 bản copy của gen cry1A(c): Dòng<br /> VH1.36.25.2 (giếng 3) có 3 copy; dòng<br /> VH1.37.66.2 (giếng 5) có 2 copy của gen chuyển<br /> cry1A(c), đoạn gen mang bản copy gen cry1A(c)<br /> có kích thước khoảng 2,8-6,1 kb. Các dòng<br /> chuyển gen có ít số copy của gen chuyển thì tính<br /> ổn định cũng như mức độ biểu hiện của gen<br /> chuyển nạp sẽ cao, khả năng thu nhận được các<br /> dòng chuyển gen bền vững nhiều hơn. Vì vậy, các<br /> dòng chuyển gen VH1 mà chúng tôi thu nhận<br /> <br /> được trong nghiên cứu này hy vọng sẽ có khả<br /> năng duy trì tính ổn định của gen chuyển cry1A(c)<br /> trong các thế hệ sau.<br /> 3.3. Đánh giá sự hiện diện của protein cry1A(c)<br /> trong các dòng ngô chuyển gen kháng sâu<br /> Chúng tôi tiến hành xác định sự có mặt của<br /> protein cry1A(c) ở các cây chuyển gen có kết quả<br /> PCR dương tính với cặp mồi S-Cry1A(c) bằng<br /> phương pháp que thử sử dụng Kit EnviroLogix<br /> QuickStix TM (Agdia, USA). Kết quả được trình<br /> bày ở bảng 4.<br /> <br /> Bảng 4. Kết quả đánh giá sự hiện diện của protein cry1A(c) trong các dòng ngô chuyển gen kháng sâu<br /> TT<br /> <br /> Tên dòng T0<br /> Nguồn HR9<br /> <br /> Số dòng có kết quả protein dương tính<br /> Thế hệ T0<br /> <br /> Thế hệ T1<br /> <br /> Thế hệ T2<br /> <br /> Thế hệ T3<br /> <br /> 1<br /> <br /> 1<br /> <br /> 1<br /> <br /> 1<br /> <br /> 1<br /> <br /> 1<br /> <br /> 1<br /> <br /> 1<br /> <br /> 2<br /> <br /> 1<br /> <br /> HR9.14<br /> <br /> 2<br /> <br /> HR9.20<br /> <br /> 3<br /> <br /> HR9.34<br /> <br /> 4<br /> <br /> HR9.32<br /> <br /> 5<br /> <br /> HR9.42<br /> Nguồn VH1<br /> <br /> 3<br /> <br /> 3<br /> <br /> 3<br /> <br /> 1<br /> <br /> VH1.40<br /> <br /> 1<br /> <br /> 1<br /> <br /> 1<br /> <br /> 2<br /> <br /> VH1.37<br /> <br /> 1<br /> <br /> 1<br /> <br /> 1<br /> <br /> 1<br /> <br /> 3<br /> <br /> VH1.36<br /> <br /> 1<br /> <br /> 1<br /> <br /> 1<br /> <br /> 1<br /> <br /> 4<br /> <br /> VH1.48<br /> Nguồn VN106<br /> <br /> 3<br /> <br /> 3<br /> <br /> 1<br /> <br /> 0<br /> <br /> 1<br /> <br /> VN106.21<br /> <br /> 1<br /> <br /> 1<br /> <br /> 2<br /> <br /> VN106.30<br /> <br /> 3<br /> <br /> VN106.7<br /> <br /> 1<br /> <br /> 1<br /> <br /> 4<br /> <br /> VN106.19<br /> <br /> 1<br /> <br /> 1<br /> <br /> 5<br /> <br /> VN106.27<br /> <br /> 6<br /> <br /> VN106.20<br /> 1<br /> <br /> 1<br /> <br /> 1<br /> <br /> 1<br /> <br /> 1<br /> <br /> CH9.12<br /> <br /> 2<br /> <br /> CH9.13<br /> <br /> 1<br /> <br /> 1<br /> <br /> 1<br /> <br /> 1<br /> <br /> Nguồn CH9<br /> <br /> Kết quả bảng 4 cho thấy thí nghiệm xác định<br /> sự hiện diện của protein của gen chuyển được<br /> tiến hành đối với những cây/dòng chuyển gen đã<br /> được xác nhận sự có mặt của gen chuyển, vì vậy<br /> các kết quả thu nhận được biến động không nhiều<br /> giữa các thế hệ của mỗi dòng chuyển gen. Đối<br /> với các dòng thuộc nguồn HR9 và CH9, các cây<br /> chuyển gen được xác định có mặt gen cry1A(c)<br /> đều cho kết quả dương tính với protein cry1A(c),<br /> chúng tôi đã nhận được các dòng HR9.20,<br /> 416<br /> <br /> 1<br /> <br /> CH9.13 với các cây từ T0-T3 đều mang protein<br /> cry1A(c). Trong khi đó ở các dòng thuộc nguồn<br /> VN106 đến thế hệ T2 và T3 số dòng có mang<br /> protein của gen chuyển giảm rõ rệt, điều này cho<br /> thấy quá trình dịch mã của gen chuyển cry1A(c)<br /> thành protein ở các dòng này chưa thành công,<br /> gen chuyển nạp chưa kết hợp ổn định trong hệ<br /> gen của cây ngô. Dòng VN106 đến thế hệ T3<br /> không thu nhận được cây nào có sự hiện diện của<br /> protein cry1A(c).<br /> <br />