Xây dựng quy trình kỹ thuật phân tích định lượng PGA – sản phẩm chuyển hóa của ethylbenzen trong nước tiểu bằng phương pháp sắc ký lỏng khối phổ

K2t qu. nghiên c=u KHCN<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> XÂY DỰNG QUY TRÌNH KỸ THUẬT PHÂN TÍCH<br /> ĐỊNH LƯỢNG PGA (AXIT PHENYLGLYOXYLIC) –<br /> SẢN PHẨM CHUYỂN HÓA CỦA ETHYLBENZEN<br /> TRONG NƯỚC TIỂU BẰNG PHƯƠNG PHÁP<br /> SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ<br /> Nguy5n Th7 Hi3n, T9ng Th7 Ngân, Nguy5n Th7 Đi3m,<br /> Đ: Th7 C0m Nhung, Vũ Xuân Trung<br /> Viện Khoa học An toàn và Vệ sinh lao động<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> E<br /> I. ĐẶT VẤN ĐỀ<br /> thylbenzen là đồng đẳng của benzene, phân tích chất này đối với phòng thí nghiệm tại<br /> được công nhận là tác nhân gây bệnh Việt Nam gặp nhiều khó khăn. Tổng hợp những<br /> nghề nghiệp ở trong nước và trên thế lý do nêu trên, chúng tôi đặt vấn đề nghiên cứu:<br /> giới, công nghiệp sản xuất styren thì ethylben- “Xây dựng quy trình phân tích PGA (axit phenyl-<br /> zen là nguồn nguyên liệu chính [1]. Trong một số glyoxylic) – sản phẩm chuyển hóa của ethylben-<br /> ngành công nghiệp khác như sản xuất sơn, điện zen trong nước tiểu bằng phương pháp sắc ký<br /> tử, ethylbenzen luôn lẫn trong những dung môi lỏng khối phổ”, nhằm mục tiêu là: xây dựng<br /> như benzene, toluen, xylen. Xylen công nghiệp được quy trình phân tích PGA trong nước tiểu<br /> lẫn khoảng 20-40% ethylbenzen [2], trong khi bằng phương pháp sắc ký lỏng khối phổ với độ<br /> xylen là nguyên liệu chính được sử dụng cho chính xác trên 95%, giới hạn định lượng nhỏ<br /> sản xuất sơn và một số ngành công nghiệp hơn 0,1mg/L. Góp phần đề xuất làm chỉ số giám<br /> khác. sát sinh học đối với NLĐ có tiếp xúc với ethyl-<br /> benzen.<br /> Ở nước ta hiện nay, việc sử dụng ethylben-<br /> zen ngày càng phổ biến, nhưng Bộ y tế mới chỉ II. ĐỐI TƯỢNG, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU<br /> có quy định về giám sát sinh học cho người lao<br /> động (NLĐ) có tiếp xúc với benzene, toluene, 2.1. Đối tượng nghiên cứu<br /> xylen, chưa có giám sát sinh học cho NLĐ có Quy trình phân tích PGA niệu-chất chuyển<br /> tiếp xúc với ethylbenzen [3]. Nên việc bảo vệ hóa của ethylbenzen trong nước tiểu của người<br /> NLĐ có tiếp xúc với ethylebenzen chưa được lao động có tiếp xúc nghề nghiệp.<br /> quan tâm một cách thỏa đáng.<br /> 2.2. Phương pháp nghiên cứu<br /> Trên thế giới nhiều nước đã sử dụng sản<br /> phẩm chuyển hóa của ethylbenzen trong nước - Tiến hành theo phương pháp nghiên cứu<br /> tiểu là axit phenylglyoxylic (PGA) làm một trong thực nghiệm trong phòng thí nghiệm của Viện<br /> những chỉ số cho giám sát sinh học đối với NLĐ khoa học ATVSLĐ bằng cách ứng dụng Phương<br /> có tiếp xúc với ethylbenzen (theo ACGHI-2018). pháp phân tích được xây dựng theo tài liệu của<br /> Ở Việt Nam, quy trình phân tích PGA niệu được Laboratory Procedure Manual - The Centers for<br /> công bố rất hạn chế, việc tham khảo quy trình Disease Control and Prevention (CDC-2012) [4].<br /> <br /> <br /> Taïp chí Hoaït ñoäng KHCN An toaøn - Söùc khoûe & Moâi tröôøng lao ñoäng, Soá 1,2&3-2019 43<br />  K2t qu. nghiên c=u KHCN<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> - Khảo sát trong phòng thí nghiệm: xây dựng - Pha động là: 5:Ammonium acetate (10M) -<br /> quy trình, phân tích mẫu thực nghiệm kênh A; 95: Methanol - kênh B<br /> - Lấy mẫu ngoài hiện trường: lấy mẫu nước 3.1.1.2. Các thông số cài đặt trên máy LC/MS<br /> tiểu của người lao động tại nơi làm việc<br /> Đối với mỗi phương pháp các thông số cài<br /> 2.3. Phương pháp kỹ thuật thực hiện đặt trên máy rất quan trọng, nếu một thông số<br /> 2.3.1. Xây d?ng quy trình không phù hợp sẽ ảnh hưởng đến chất lượng<br /> của kết quả phân tích mẫu. Đề tài tiến hành khảo<br /> Thử nghiệm ứng dụng phương pháp phân sát đối với từng thông số và thu được các giá trị<br /> tích sắc ký lỏng khối phổ với các điều kiện: tối ưu. Tại các giá trị này kết quả của phép đo là<br /> - Thiết bị: Máy sắc kýlỏng ba lần tứ cực tốt nhất. Giá trị của các thông số tối ưu cụ thể<br /> LC/MA, nhãn hiệu HPLC 1290/MSD6430B của như sau:<br /> Agilent, Tủ âm sâu -860C,… * Điều kiện trên LC<br /> - Dụng cụ: Các dụng cụ chuyên dùng như - Tốc độ dòng: 0,2 ml/phút<br /> bình định mức, pipet, cột C18 dài 150mm, kích<br /> thước hạt 1.8µm,… - Tỉ lệ dung môi: A: 5% B: 95%<br /> - Hóa chất: Hóa chất sử dụng trong đề tài của - Thời gian chạy mẫu: 4 phút<br /> hãng Sigma đảm bảo độ tinh khiết để phân tích - Thể tích bơm mẫu: 15µl<br /> lượng vết như PGA; Ammonium acetate;<br /> Methanol; Axit acetic... - Nhiệt độ cột: 400C<br /> Phương pháp phân tích được xây dựng theo * Điều kiện MS<br /> tài liệu của Laboratory Procedure Manual - The - Nguồn tạo ion: ESI<br /> Centers for Disease Control and Prevention<br /> (CDC-2012) [4]. - Năng lượng ion hóa: 70eV<br /> <br /> 2.3.2. Xác đ7nh s.n ph0m chuy4n hóa - Chạy chế độ: MRM<br /> Xác định bằng quy trình xây dựng được trên - Phổ m/z: 149/77<br /> máy sắc kí lỏng khối phổ của Agilent. 3.1.2. Ch8n các đi3u ki6n l/y m1u, x> lý m1u<br /> III. KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN đ4 có dung d7ch đo<br /> <br /> 3.1. Kết quả xây dựng quy trình 3.1.2.1. Lấy mẫu<br /> <br /> 3.1.1. Chu0n hóa các đi3u ki6n cho phép đo Mẫu nước tiểu được thu vào cuối ca của<br /> ngày làm việc cuối tuần. Thu từ 5-10ml nước<br /> Để chọn được các điều kiện tối ưu cho xây tiểu đựng vào ống thủy tinh có thể tích 15-20ml,<br /> dựng quy trình chúng tôi đã tiến hành khảo sát, loại ống chịu được điều kiện âm sâu (-800C).<br /> đánh giá và thu được kết quả của từng điều kiện Bảo quản lạnh tại hiện trường, khi đưa về phòng<br /> như dưới đây. thí nghiệm được bảo quản âm sâu trước khi<br /> 3.1.1.1. Hóa chất và dung dịch chuẩn phân tích.<br /> - Hóa chất: PGA; Ammonium acetate; 3.1.2.2. Xử lý mẫu<br /> Methanol; Axit aceticcủa Sigma<br /> Mẫu được xử lý với nhiều điều kiện khác<br /> - Dung dịch chuẩn: pha PGA trong nước cất nhau và đề tài thu được điều kiện cho kết quả tốt<br /> hai lần để được các nồng độ từ 0,01-8µg/ml. nhất là quy trình xử lý mẫu như dưới đây:<br /> <br /> <br /> <br /> 44 Taïp chí Hoaït ñoäng KHCN An toaøn - Söùc khoûe & Moâi tröôøng lao ñoäng, Soá 1,2&3-2019<br />  K2t qu. nghiên c=u KHCN<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Mẫu được pha bằng dung dịch Ammonium<br /> acetate (10mM) với tỷ lệ 1 mẫu : 9 Ammonium<br /> acetate (10M), lắc đều lọc qua màng lọc<br /> 0,2µm.<br /> Dung dịch chuẩn để xây dựng đường chuẩn<br /> được xử lý như mẫu phân tích ở các mức nồng<br /> độ: 0,01µg/ml; 0,1µg/ml; 1µg/ml; 2µg/ml; 3µg/ml;<br /> 4µg/ml; 5µg/ml.<br /> 3.1.3. Đánh giá các đi3u ki6n c