Bài giảng Định lượng và đánh giá độ tinh sạch của chế phẩm protein

Định lượng và đánh giá độ tinh<br /> sạch của chế phẩm protein<br /> <br /> 1<br /> <br /> Các phương pháp xác định<br /> hàm lượng protein<br /> Protein sau khi đã được tách chiết và làm sạch có<br /> thể định lượng được. Nếu protein nghiên cứu là<br /> enzyme thì việc định lượng thông qua xác định<br /> hoạt độ của enzyme<br /> (theo quy ước quốc tế: 1 đơn vị hoạt độ enzyme là<br /> lượng enzyme làm chuyển hoá 1 mol cơ chất<br /> trong 1 phút ở các điều kiện tiêu chuẩn).<br /> 2<br /> <br /> Các phương pháp xác định<br /> hàm lượng protein<br /> Như vậy cứ sau các bước tách chiết và làm sạch<br /> protein người ta thấy tổng lượng protein giảm<br /> nhưng hoạt độ enzyme tăng nghĩa là hoạt độ riêng<br /> tăng rất cao.<br /> Protein được coi là sạch nếu những bước tách chiết<br /> và làm sạch sau không làm tăng hoạt độ riêng của<br /> chúng nữa, và chỉ khi đó ta mới hoàn thành việc<br /> tách chiết và làm sạch protein<br /> 3<br /> <br /> Các phương pháp xác định<br /> hàm lượng protein<br /> Nếu protein không phải là enzyme thì ta có thể định<br /> lượng chúng bằng các phương pháp khác.<br /> Nếu protein ta nghiên cứu là hormon hoặc các độc tố<br /> thì chúng được xác định qua hiệu ứng sinh học mà<br /> chúng gây ra; ví dụ như hormon sinh trưởng (growth<br /> hormone) sẽ kích thích sự sinh trưởng của các tế bào<br /> đích nuôi cấy.<br /> Nếu là protein vận chuyển thì có thể xác định chúng<br /> thông qua nồng độ chất mà chúng vận chuyển<br /> 4<br /> <br /> <br /> Định lượng nitrogen theo<br /> phương pháp Kjeldahl<br /> Phần lớn các phương pháp gián tiếp xác định protein<br /> đều dựa trên cơ sở xác định lượng nitrogen.<br /> Lượng nitrogen có trong các protein là gần giống<br /> nhau không phụ thuộc vào chất lượng và nguồn<br /> protein. Đương nhiên trên cơ sở lượng nitrogen có thể<br /> xác định chỉ các protein đã được tinh sạch hoặc lượng<br /> protein của các mẫu nghiên cứu mà ngoài protein ra<br /> không chứa những chất chứa nitrogen khác.<br /> <br /> <br /> 5<br /> <br />