Đánh giá sàng lọc sự có mặt GMO trong sản phẩm bắp và đậu nành

Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 14 * Phụ bản của Số 2 * 2010<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> ĐÁNH GIÁ SÀNG LỌC SỰ CÓ MẶT GMO TRONG SẢN PHẨM BẮP VÀ<br /> ĐẬU NÀNH<br /> Nguyễn Đỗ Phúc*, Nguyễn An Huy*Phạm Hùng Vân**<br /> TÓM TẮT<br /> Đặt vấn ñề: Công tác kiểm nghiệm sinh học phân tử trong phân tích các sản phẩm có nguồn gốc biến ñổi<br /> gen là cần thiết, giúp trong việc giám sát và kiểm tra chất lượng hàng hoá trong nước và nhập khẩu hiện nay<br /> ñang ñược Bộ Y tế quan tâm.<br /> Mục tiêu nghiên cứu: Áp dụng qui trình PCR sàng lọc phát hiện sản phẩm bắp, ñậu nành chứa GMO với<br /> các mồi ñặc hiệu ñể phát hiện trình tự promoter 35S và Terminator HAnos giúp công tác xét nghiệm ñịnh<br /> lượng nhanh hơn..<br /> Phương pháp nghiên cứu: Tách chiết DNA của các sản phẩm bắp và ñậu nành bằng bộ tách chiết của hãng<br /> Promega và sử dụng kỹ thuật PCR ñể phát hiện các sản phẩm chứa GMO. Sử dụng cặp mồi ñược thiết kế ñể<br /> khuyếch ñại DNA từ CaMV promoter 35S và Terminator HAnos. Kết quả khuyếch ñại ñối với cặp mồi<br /> CaMV35 là sản phẩm PCR có kích thước 195 bp và cặp mồi HAnos là sản phẩm PCR có kích thước 118bp.<br /> Kết quả nghiên cứu: Kết quả tách chiết DNA có nồng ñộ và ñủ số lượng ñưa vào phản ứng PCR. Trong 25<br /> mẫu bắp khảo sát có 10/25 mẫu có biến ñổi gen, chiếm tỷ lệ 40%, và 21 mẫu ñậu nành khảo sát, có 15/21<br /> mẫu có biến ñổi gen, chiếm tỷ lệ 71,4%.<br /> Kết luận: Sử dụng phương pháp PCR với các cặp mồi ñặc hiệu ñể phát hiện trình tự Promotor 35S và<br /> Terminator HAnos có trong các sản phẩm bắp và ñậu nành nhằm mục ñích sàng lọc trong quá trình kiểm<br /> nghiệm, giúp cho xét nghiệm ñịnh lượng % GMO ñược thuận lợi và chính xác.<br /> Từ khóa: thực phẩm biến ñổi gen, GOM.<br /> ABSTRACT<br /> <br /> ASSESSMENT THE PRESENCE OF GMO IN CORN<br /> AND SOYA BY THE SCREENING PCR METHOD<br /> Nguyen Do Phuc, Nguyen An Huy, Pham Hung Van<br /> * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 14 - Supplement of No 2 – 2010: 342 - 347<br /> Background: Molecular technique is necessary in analysis of genetically modified (GM) food.<br /> Objectives: Applying the screening PCR method for detection GMO in cereals products with specific<br /> primers for detection gene sequences of promoter 35S và Terminator HAnos.<br /> Method: Isolation of genomic DNA by Promega kit from soybeans, maize content enough level of GM<br /> content, and enough for the screeningPCR method. This PCR method to detect foreign DNA in genetically<br /> modified food, using primers that designed to amplify DNA from the CaMV35S promoter and HAnos<br /> Terminator component of the gene cassette. Amplification of this Promoter yields DNA fragments 195bp<br /> and this Terminator yields DNA fragments 118bp in length.<br /> Results: The method of DNA isolation is enough DNA for PCR test. In this study show that in 40% of maize<br /> samples and 71.4% of soybeans samples is presence of GMO.<br /> Conclusion: The PCR method for detection genetically modified food with the specific primers to amplify<br /> Promoter35S and Terminator HAnos is screening GMO products for determination quantization of GM<br /> DNA content in food.<br /> Keywords: genetically modified food, GOM.<br /> <br /> *<br /> <br /> Viện Vệ sinh - Y tế Công cộng TP Hồ Chí Minh **Trường Đại học Y Dược TP. Hồ Chí Minh<br /> Địa chỉ liên lạc: Ths. Nguyễn Đỗ Phúc<br /> ĐT: 0907 669 008<br /> Email: nguyendophuc@ihph.org.vn<br /> <br /> Hội nghị Khoa học Kỹ thuật Viện Y Tế Công Cộng năm 2009 - 2010<br /> <br /> 342<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 14 * Phụ bản của Số 2 * 2010<br /> ĐẶT VẤN ĐỀ<br /> Trên thế giới hiện nay các kỹ thuật sinh học phân tử<br /> ñã ñược áp dụng trong hầu hết các ngành khoa học tự<br /> nhiên. Ðặc biệt trong thập niên cuối thế kỷ 20, với<br /> cuộc cách mạng sinh học phân tử ñã làm nên những<br /> ñiều kỳ diệu trong nhiều lĩnh vực khác nhau như công<br /> nghệ gen, công nghệ sinh học, tiến hóa học, y sinh<br /> học.<br /> Trong Y sinh học, có rất nhiều ñối tượng nghiên cứu,<br /> kiểm nghiệm chúng ta phải sử dụng ñến kỹ thuật sinh<br /> học phân tử thì mới có thể giải quyết ñược vấn ñề. Ví<br /> dụ trong chẩn ñoán phát hiện các ñột biến gen, kỹ<br /> thuật phân tích các sinh vật biến ñổi gen thì bắt buộc<br /> phải dùng ñến kỹ thuật sinh học phân tử; hay trong<br /> chẩn ñoán các vi sinh vật gây nhiễm trùng thực phẩm<br /> mà các kỹ thuật vi sinh học truyền thống tốn nhiều<br /> thời gian, phức tạp, ñộ nhạy thấp thì sinh học phân tử<br /> là một kỹ thuật không thể thiếu ñược.<br /> Trong xu thế hội nhập quốc tế, Việt Nam ñã trở<br /> thành nước thành viên của WTO vào tháng 11 năm<br /> 2006. Khi gia nhập WTO Việt nam ñã có những<br /> cam kết trong lĩnh vực sinh vật biến ñổi gen. Trong<br /> nghị ñịnh thư Cartagena về an toàn sinh học bắt<br /> buộc các nhà xuất khẩu phải cung cấp nhiều thông<br /> tin hơn nữa cho các nước nhập khẩu về sản phẩm<br /> GMO. Ngoài ra, các nước nhập khẩu có quyền phản<br /> ñối hàng nhập khẩu hay hàng viện trợ là sản phẩm<br /> GMO nếu những sản phẩm này gây ảnh hưởng ñến<br /> cây trồng truyền thống và văn hoá - xã hội ở nước<br /> nhập khẩu kể cả khi họ không có ñủ bằng chứng<br /> khoa học.<br /> Tháng 8 năm 2005, Thủ tướng Chính phủ ñã ban hành<br /> Quyết ñịnh số 212/2005/QD-TTg về Quy chế Quản lý<br /> GMO. Theo ñó, các sản phẩm hàng hóa GMO khi<br /> nhập khẩu, xuất khẩu hoặc lưu hành trên thị trường<br /> Việt Nam phải dán nhãn và ghi rõ: Sản phẩm có sử<br /> dụng công nghiệp biến ñối gen.<br /> Trước tình hình ñó việc triển khai công tác kiểm<br /> nghiệm sinh học phân tử trong phân tích các sản phẩm<br /> có nguồn gốc biến ñổi gen là cần thiết, giúp trong<br /> công tác giám sát và kiểm tra chất lượng hàng hoá<br /> nhập khẩu ñược chặt chẽ hơn. Trong giới hạn của ñề<br /> tài chúng tôi tiến hành khảo sát sàng lọc sự có mặt<br /> GMO trong bắp, ñậu nành và các sản phẩm từ bắp và<br /> ñậu nành ñể xem xét tình hình thực tế sử dụng thực<br /> phẩm biền ñổi gen hiện nay tại TP. Hồ Chí Minh.<br /> Mục tiêu nghiên cứu<br /> - Tách chiết DNA và ño hàm lượng DNA trước khi<br /> thực hiện phản ứng PCR<br /> - Đánh giá sàng lọc các mẫu bắp và sản phẩm bắp<br /> chứa các promoter 35S và Terminator HAnos, xác<br /> ñịnh tỷ lệ mẫu chứa GMO trên sản phẩm bắp.<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> - Đánh giá sàng lọc các mẫu ñậu nành và sản phẩm<br /> ñậu nành chứa các promoter 35S và Terminator<br /> HAnos, xác ñịnh tỷ lệ mẫu chứa GMO trên sản phẩm<br /> ñậu nành.<br /> ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU<br /> Vật liệu nghiên cứu<br /> - Các loại ngũ cốc: bao gồm 25 mẫu bắp và sản phẩm<br /> bắp và 21 mẫu ñậu nành và sản phẩm ñậu nành ñược<br /> lấy ngẫu nhiên từ các chợ, siêu thị, quầy bán lẽ, trên<br /> ñường phố tại các Quận, Huyện tại Thành phố Hồ Chí<br /> Minh.<br /> - Mồi chuyên biệt phát hiện trình tự promoter 35SCaMV:<br /> Mồi xuôi: 5’-gCT CCT ACA AAT gCC ATC A3’.<br /> Mồi ngược: 5’-gAT AgT ggg ATT gTg CgT CA3’.<br /> - Mồi chuyên biệt phát hiện trình tự Terminator nos .<br /> Mồi xuôi: HA-nos 118f: 5’-gCA TgA CgT TAT TTA<br /> TgA gAT ggg - 3’<br /> Mồi ngược: HA-nos 118r: 5’-gAC ACC gCg CgC<br /> AgT AAT TTA TCC-3’<br /> - Chứng dương: ñậu nành dòng GTS 40-3-2<br /> (Roundup Ready® Soya 0,1% (IRMM -410).<br /> - Chứng âm: ñậu nành dòng GTS 40-3-2 (Roundup<br /> Ready® Soya 0 % (IRMM -410).<br /> - Thành phần kit thử phát hiện trình tự promoter 35SCaMV: Mater Mix 2 X: 12,5µl; primer 35S1 (5pm):<br /> 0,5, primer 35S2 (5pm): 0,5; dH2O:10,5µl; Tổng thể<br /> tích 24µl.<br /> - Thành phần kit thử phát hiện trình tự Terminator<br /> HAnos: Mater Mix 2 X: 12,5µl; primer HAnos 118f<br /> (20pm): 0,5µl; HAnos 118r (20pm): 0,5µl;<br /> dH2O:10,5µl; Tổng thể tích 24µl.<br /> Phương pháp nghiên cứu<br /> Nghiên cứu cắt ngang<br /> Tách chiết DNA<br /> Theo qui trình tách chiết của bộ kít Promega<br /> Đo nồng ñộ DNA: ñược ño trên máy<br /> - Qui trình nhiệt cho phản ứng PCR với cặp mồi 35S1<br /> và 35S2: Khuếch ñại và biến tính ban ñầu 95oC/10<br /> phút; chu trình nhiệt 2: 40 chu kỳ với ba bước nhiệt<br /> ñộ: 940C/20giây; 540C/40 giây và 720C/60 giây. Chu<br /> kỳ 3: 720C/3 phút và giữ 40C. Sản phẩm PCR bảo<br /> quản trong -20oC cho ñến khi ñiện di. Sản phẩm sau<br /> phản ứng PCR ñược ñiện di trên gel agarose 2% có bổ<br /> sung ethidium bromide 8µl (dung dịch ethidium<br /> bromide 5mg/ml). Điện di ở ñiện thế 135V trong 25<br /> phút. Sau ñó quan sát kết quả trên máy chụp hình ñiện<br /> di bằng tia UV có bước sóng 312nm. Nếu xuất hiện<br /> vạch tương ứng khoảng 195bp thì xem là sản phẩm có<br /> <br /> Hội nghị Khoa học Kỹ thuật Viện Y Tế Công Cộng năm 2009 - 2010<br /> <br /> 343<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 14 * Phụ bản của Số 2 * 2010<br /> chứa vật liệu biến ñổi gen và phải tiến hành khẳng<br /> ñịnh sản phẩm ñó.<br /> - Qui trình nhiệt cho phản ứng PCR với cặp mồi HAnos 118-f và HA-nos118-r: Khuếch ñại và biến tính<br /> ban ñầu 95oC/10 phút; chu trình nhiệt 2: 50 chu kỳ với<br /> ba bước nhiệt ñộ: 940C/25giây; 620C/30 giây và<br /> 720C/45 giây. Chu kỳ 3: 720C/7 phút và giữ 40C. Sản<br /> phẩm PCR bảo quản trong -20oC cho ñến khi ñiện di.<br /> Sản phẩm sau phản ứng PCR ñược ñiện di trên gel<br /> agarose 2% có bổ sung ethidium bromide 8µl (dung<br /> dịch ethidium bromide 5mg/ml). Điện di ở ñiện thế<br /> 135V trong 25 phút. Sau ñó quan sát kết quả trên máy<br /> chụp hình ñiện di bằng tia UV có bước sóng 312nm.<br /> Nếu xuất hiện vạch tương ứng khoảng 118bp thì xem<br /> là sản phẩm có chứa vật liệu biến ñổi gen và phải tiến<br /> hành khẳng ñịnh sản phẩm ñó.<br /> KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU<br /> Kết quả ño nồng ñộ DNA mẫu sau tách chiết<br /> Bảng 1: Kết quả xác ñịnh nồng ñộ DNA sau tách<br /> chiết của mẫu bắp và sản phẩm bắp<br /> Nồng ñộ<br /> TT Tên mẫu<br /> Mã số OD<br /> µg/µl<br /> 1 Bắp khô<br /> BK1 1,72<br /> 70<br /> 2 Bắp khô<br /> BK2 1,75<br /> 40<br /> 3 Bắp xay<br /> BX1 0<br /> 0<br /> 4 Bắp xay<br /> BX2 1,77<br /> 40<br /> 5 Bắp xay<br /> BX3 1,46<br /> 10<br /> 6 Bắp xay<br /> BX4 1,90<br /> 420<br /> 7 Bắp xay<br /> BX5 1,56<br /> 10<br /> 8 Bắp tươi<br /> BT1 1,69<br /> 20<br /> 9 Bắp tươi<br /> BT2 1,70<br /> 50<br /> 10 Bắp tươi<br /> BT3 1,73<br /> 40<br /> 11 Bắp tươi<br /> BT4 1,71<br /> 40<br /> 12 Bắp tươi<br /> BT5 1,72<br /> 90<br /> 13 Bắp tươi<br /> BT6 1,54<br /> 20<br /> 14 Bắp tươi<br /> BT7 1,82<br /> 20<br /> 15 Bắp tươi<br /> BT8 1,72<br /> 40<br /> 16 Bắp tươi<br /> BT9 1,68<br /> 70<br /> 17 Bắp tươi<br /> BT10 1,55<br /> 30<br /> 18 Bắp tươi<br /> BT11 1,72<br /> 60<br /> 19 Bắp hộp<br /> BH1 1,38<br /> 10<br /> 20 Bắp hộp<br /> BH2 1,40<br /> 10<br /> 21 Bắp hộp<br /> BH3 1,72<br /> 10<br /> 22 Bắp hộp<br /> BH4 1,68<br /> 20<br /> 23 Bắp hộp<br /> BH5 1,71<br /> 20<br /> 24 Bắp hộp<br /> BH6 1,70<br /> 20<br /> 25 Bắp hộp<br /> BH7 1,53<br /> 10<br /> Bảng 2: Kết quả xác ñịnh nồng ñộ DNA sau tách<br /> chiết của mẫu ñậu nành và sản phẩm ñậu nành<br /> Nồng ñộ<br /> TT Tên mẫu<br /> Mã số OD<br /> µg/µl<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Nồng ñộ<br /> µg/µl<br /> 1<br /> Đậu nành hạt ĐK1 1,89<br /> 110<br /> 2<br /> Đậu nành hạt ĐK2 1,85<br /> 150<br /> 3<br /> Đậu nành hạt ĐK3 1,82<br /> 100<br /> 4<br /> Đậu nành hạt ĐK4 1,75<br /> 80<br /> 5<br /> Đậu nành hạt ĐK5 1,72<br /> 110<br /> 6<br /> Đậu nành hạt ĐK6 1,70<br /> 70<br /> 7<br /> Đậu nành hạt ĐK7 1,65<br /> 60<br /> 8<br /> Đậu nành xay ĐX1 1,54<br /> 20<br /> 9<br /> Đậu nành xay ĐX2 1,55<br /> 30<br /> 10 Đậu nành xay ĐX3 1,93<br /> 410<br /> 11 Đậu nành xay ĐX4 1,58<br /> 80<br /> 12 Đậu nành xay ĐX5 1,75<br /> 40<br /> 13 Đậu nành xay ĐX6 1,28<br /> 130<br /> 14 Đậu nành xay ĐX7 1,64<br /> 150<br /> 15 Đậu nành xay ĐX8 1,70<br /> 70<br /> 16 Đậu nành xay ĐX10 1,77<br /> 160<br /> 17 Đậu nành xay ĐX11 1,67<br /> 110<br /> 18 Đậu nành xay ĐX12 1,48<br /> 30<br /> 19 Đậu nành xay ĐX13 1,65<br /> 30<br /> 20 Đậu nành xay ĐX14 1,87<br /> 90<br /> 21 Đậu nành xay ĐX15 1,72<br /> 200<br /> Qua kết quả bảng 1 và 2 cho thấy mẫu ñược tách chiết<br /> DNA có nồng ñộ DNA ñáp ứng với yêu cầu của<br /> phương pháp thử và sử dụng ñể sàng lọc các biến ñổi<br /> gen.<br /> Kết quả sàng lọc các mẫu biến ñổi gen<br /> Bảng 3: Kết quả sàng lọc các biến ñổi gen bằng<br /> promoter 35S và Terminator nos của bắp và sản phẩm<br /> bắp<br /> Promoto Termin<br /> TT Tên mẫu Mã số<br /> Kết quả<br /> r 35S<br /> ator nos<br /> 1 Bắp khô BK1 +<br /> +<br /> dương tính<br /> 2 Bắp khô BK2 +<br /> dương tính<br /> 3 Bắp xay BX1 âm tính<br /> 4 Bắp xay BX2 +<br /> +<br /> dương tính<br /> 5 Bắp xay BX3 +<br /> dương tính<br /> 6 Bắp xay BX4 +<br /> +<br /> dương tính<br /> 7 Bắp xay BX5 +<br /> +<br /> dương tính<br /> 8 Bắp tươi BT1 âm tính<br /> 9 Bắp tươi BT2 âm tính<br /> 10 Bắp tươi BT3 +<br /> dương tính<br /> 11 Bắp tươi BT4 âm tính<br /> 12 Bắp tươi BT5 +<br /> dương tính<br /> 13 Bắp tươi BT6 âm tính<br /> 14 Bắp tươi BT7 âm tính<br /> 15 Bắp tươi BT8<br /> âm tính<br /> 16 Bắp tươi BT9 âm tính<br /> 17 Bắp tươi BT10 +<br /> dương tính<br /> TT Tên mẫu<br /> <br /> Mã số OD<br /> <br /> Hội nghị Khoa học Kỹ thuật Viện Y Tế Công Cộng năm 2009 - 2010<br /> <br /> 344<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 14 * Phụ bản của Số 2 * 2010<br /> 18<br /> 19<br /> 20<br /> 21<br /> <br /> Bắp tươi<br /> Bắp hộp<br /> Bắp hộp<br /> Bắp hộp<br /> <br /> BT11<br /> BH1<br /> BH2<br /> BH3<br /> <br /> -<br /> <br /> +<br /> -<br /> <br /> dương tính<br /> âm tính<br /> âm tính<br /> âm tính<br /> <br /> 22<br /> 23<br /> 24<br /> 25<br /> <br /> Bắp hộp<br /> Bắp hộp<br /> Bắp hộp<br /> Bắp hộp<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> BH4<br /> BH5<br /> BH6<br /> BH7<br /> <br /> +<br /> <br /> -<br /> <br /> âm tính<br /> âm tính<br /> âm tính<br /> dương tính<br /> <br /> Hình 1. Kết quả hình ảnh ñiện di sàng lọc GMO bằng promoter 35S trên mẫu bắp và sản phẩm bắp<br /> <br /> Qua kết quả phân tích trên bảng 3 và hình 1 và 2 cho<br /> thấy trong số 25 mẫu bắp có 10/25 mẫu có sự hiện<br /> diện của biến ñổi gen, chiếm tỷ lệ 40%, trong ñó có<br /> 4/25 mẫu phát hiện có dương tính với promoter 35S<br /> và Terminator HSnos, chiếm tỷ lệ 16% và có 5/25<br /> mẫu dương tính với promoter 35S, chiếm tỷ lệ 20%<br /> và có 2/25 mẫu phát hiện có dương tính với<br /> Terminator HAnos, chiếm tỷ lệ 8,8%.<br /> <br /> Hình 2. Kết quả hình ảnh ñiện di sàng lọc GMO bằng Terminator nos trên mẫu bắp và sản phẩm bắp<br /> Bảng 4: Kết quả sàng lọc các biến ñổi gen bằng<br /> Mã Promoto Termin<br /> TT Tên mẫu<br /> Kết quả<br /> promoter 35S và Terminator HAnos của ñậu nành và<br /> số<br /> r 35S<br /> ator nos<br /> sản phẩm ñậu nành<br /> Đậu nành<br /> dương<br /> 5<br /> ĐK5 +<br /> +<br /> Mã Promoto Termin<br /> hạt<br /> tính<br /> Kết quả<br /> TT Tên mẫu<br /> số<br /> r 35S<br /> ator nos<br /> Đậu nành<br /> dương<br /> 6<br /> ĐK6 +<br /> Đậu nành<br /> hạt<br /> tính<br /> 1<br /> ĐK1 âm tính<br /> hạt<br /> Đậu nành<br /> 7<br /> ĐK7 âm tính<br /> Đậu nành<br /> dương<br /> hạt<br /> 2<br /> ĐK2 +<br /> +<br /> hạt<br /> tính<br /> Đậu nành<br /> dương<br /> 8<br /> ĐX1 +<br /> +<br /> Đậu nành<br /> dương<br /> xay<br /> tính<br /> 3<br /> ĐK3 +<br /> +<br /> hạt<br /> tính<br /> Đậu nành<br /> dương<br /> 9<br /> ĐX2 +<br /> +<br /> Đậu nành<br /> dương<br /> xay<br /> tính<br /> 4<br /> ĐK4 +<br /> +<br /> hạt<br /> tính<br /> 10 Đậu nành ĐX3 +<br /> +<br /> dương<br /> <br /> Hội nghị Khoa học Kỹ thuật Viện Y Tế Công Cộng năm 2009 - 2010<br /> <br /> 345<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 14 * Phụ bản của Số 2 * 2010<br /> TT Tên mẫu<br /> <br /> 11<br /> 12<br /> 13<br /> 14<br /> 15<br /> 16<br /> 17<br /> 18<br /> 19<br /> 20<br /> 21<br /> <br /> xay<br /> Đậu nành<br /> xay<br /> Đậu nành<br /> xay<br /> Đậu nành<br /> xay<br /> Đậu nành<br /> xay<br /> Đậu nành<br /> xay<br /> Đậu nành<br /> xay<br /> Đậu nành<br /> xay<br /> Đậu nành<br /> xay<br /> Đậu nành<br /> xay<br /> Đậu nành<br /> xay<br /> Đậu nành<br /> xay<br /> <br /> Mã<br /> số<br /> ĐX4<br /> ĐX5<br /> ĐX6<br /> ĐX7<br /> ĐX8<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Promoto Termin<br /> Kết quả<br /> r 35S<br /> ator nos<br /> tính<br /> dương<br /> +<br /> +<br /> tính<br /> dương<br /> +<br /> +<br /> tính<br /> dương<br /> +<br /> +<br /> tính<br /> dương<br /> +<br /> tính<br /> dương<br /> +<br /> tính<br /> <br /> ĐX10 -<br /> <br /> -<br /> <br /> âm tính<br /> <br /> ĐX11 +<br /> <br /> -<br /> <br /> dương<br /> tính<br /> <br /> ĐX12 -<br /> <br /> -<br /> <br /> âm tính<br /> <br /> ĐX13 -<br /> <br /> -<br /> <br /> âm tính<br /> <br /> ĐX14 -<br /> <br /> -<br /> <br /> âm tính<br /> <br /> ĐX15 +<br /> <br /> -<br /> <br /> dương<br /> tính<br /> <br /> Hội nghị Khoa học Kỹ thuật Viện Y Tế Công Cộng năm 2009 - 2010<br /> <br /> 346<br /> <br />