Khả năng tồn tại và di cư của tế bào trong gel fibrin sau khi ghép trên mảnh ngà răng đã xử lý

Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 2 * 2016 Nghiên cứu Y học<br /> <br /> <br /> KHẢ NĂNG TỒN TẠI VÀ DI CƯ CỦA TẾ BÀO TRONG GEL FIBRIN<br /> SAU KHI GHÉP TRÊN MẢNH NGÀ RĂNG ĐÃ XỬ LÝ<br /> Nguyễn Thị Ngọc Hạnh*, Đoàn Nguyên Vũ**, Trần Xuân Vĩnh***, Trần Lê Bảo Hà**<br /> <br /> TÓM TẮT<br /> Mở đầu: Gel fibrin là vật liệu khung nâng đỡ phù hợp cho sự tái tạo mô tủy. Tuy nhiên trong kĩ nghệ mô<br /> nha khoa hiện nay, ứng dụng của gel fibrin còn rất hạn chế.<br /> Mục tiêu: Mục tiêu của nghiên cứu này là tạo gel fibrin có tế bào và đánh giá sự tồn tại, di cư của tế bào<br /> trong cấu trúc này sau khi ghép trên mảnh ngà răng đã xử lý.<br /> Đối tượng và Phương pháp nghiên cứu: Các mảnh ngà răng người được tạo có kích thước khoảng 5 – 6<br /> mm, đường kính rãnh là 1mm. Tế bào gốc tủy răng được đưa lên khung nâng đỡ gel fibrin. Gel fibrin có tế bào<br /> gốc tủy răng và mô tủy nguyên được cấy lên mảnh ngà răng đã xử lý. Cố định các thành phần trên mảnh ngà<br /> răng và nuôi cấy in vitro 2 tuần. Sự tồn tạo và di cư của tế bào trong gel fibrin được đánh giá bằng kỹ thuật mô<br /> học và phản ứng PCR<br /> Kết quả: Kết quả cho thấy có sự tồn tại của tế bào trong cấu trúc sau 2 tuần ghép trên mảnh ngà răng đã xử<br /> lý và có sự di cư của tế bào trong mô tủy nguyên sang gel fibrin.<br /> Từ khóa: Gel fibrin, bệnh lý tủy, tồn tại, di cư.<br /> ABSTRACT<br /> THE SURVIVAL AND MIGRATION OF CELLS IN THE GEL FIBRIN-FORMING CELLS AFTER<br /> SEEDED HUMAN TREATED DENTIN MATRIX<br /> Nguyen Thi Ngoc Hanh, Doan Nguyen Vu, Tran Xuan Vinh, Tran Le Bao Ha<br /> * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Supplement of Vol. 20 - No 2 - 2016: 1 - 6<br /> <br /> Background: The fibrin gel has many useful characteristics for the pulp tissue regeneration but its<br /> application in dental engineering is still limited.<br /> Objective: The aims of this study are to conduct a cell containing fibrin gel and to evaluate the survival and<br /> migration of cells in this structure after seeded on human treated dentin matrix.<br /> Material and Methods: Firstly, the dentin slices from 5 – 6 mm in length and 1 mm diameter of drain were<br /> cut from human tooth. Dental pulp stem cells were seeded on fibrin gel. Secondly fibrin gel/cell structure and<br /> living pulp are seeded to the dentin slices. These slices then were fixed and cultured in vitro for 2 weeks. The<br /> survival and migration of cells in gel fibrin was evaluated by HE staining and PCR.<br /> Results: The results showed that the cells presented in fibrin gel/cell structure after two weeks. Some cells of<br /> living pulp tended to move into fibrin gel and proliferated together with dental pulp stem cells.<br /> Keywords: fibrin gel, survival, migration<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> * Trường Cao đẳng Y tế Kiên Giang<br /> ** Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia-thành phố Hồ Chí Minh<br /> ***Bộ môn Nha khoa cơ sở, Khoa RHM, Đại học Y Dược, TpHCM<br /> Tác giả liên lạc: PGS.TS. Trần Lê Bảo Hà ĐT: 0988575507 Email: tlbha@hcmus.edu.vn<br /> <br /> Chuyên Đề Răng Hàm Mặt 1<br /> Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 2 * 2016<br /> <br /> <br /> ĐẶT VẤN ĐỀ thực hiện nghiên cứu này với mục tiêu là tạo<br /> được cấu trúc gel fibrin có tế bào và đánh giá sự<br /> Bệnh lý tủy là một bệnh khá phổ biến trong<br /> tồn tại, di cư của tế bào trong cấu trúc này.<br /> lĩnh vực nha khoa, và nội nha là phương pháp<br /> điều trị được áp dụng nhiều nhất. Răng sau nội ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU<br /> nha sẽ mất đi khả năng nhận cảm với sự thay đổi Đối tượng<br /> của môi trường và khả năng sửa chữa của răng<br /> Gel fibrin từ huyết tương người; Tế bào gốc<br /> với những tổn thương sau đó. Chính vì vậy, nhu<br /> tủy răng người.<br /> cầu đòi hỏi một liệu pháp khác nhằm phục hồi<br /> tốt hơn cho răng là cần thiết. Tạo mô hình nghiên cứu<br /> Trên thế giới, khi tế bào gốc tủy răng người Xử lý răng và tạo mảnh ngà răng:<br /> được phân lập lần đầu tiên vào năm 2000, cùng Các mảnh ngà răng được tạo có chiều dài từ<br /> với sự phát triển của kĩ nghệ mô thì các nhà 5-6 mm, đường kính rãnh là 1mm và được lần<br /> nghiên cứu đã bắt đầu hi vọng có thể tái tạo lại lượt khuấy trong PBS (Phosphat Buffered Saline<br /> được mô ngà tủy tự nhiên thay thế cho phương (Gibco)) 1X 10 phút, trong EDTA<br /> pháp điều trị nội nha hiện tại, mở ra cuộc cách (ethylenediaminetetraacetic acid - Sigma) 17% 10<br /> mạng cho sự tái tạo ngà tủy, hay nói cách khác là phút, trong axit citric 19% 1 phút. Sau đó, các<br /> chiếc răng có hy vọng được sống lại(3). Ngà răng mảnh ngà răng này được lắc trong PBS 1X 5-7<br /> người có các phân tử tín hiệu và rất nhiều ngày, tốc độ lắc là 120 vòng/phút. Cuối cùng, các<br /> protein đã được chứng minh là quan trọng mảnh ngà răng đã xử lý được thu nhận, làm khô,<br /> trong sự phát triển, khoáng hóa và tái tạo ngà đóng gói và chiếu xạ ở Trung Tâm Nghiên Cứu<br /> răng. Khi được phóng thích, những yếu tố này và Triển Khai Công Nghệ Bức Xạ, Thành phố Hồ<br /> đóng vai trò quan trọng trong sự thành lập Chí Minh với liều chiếu xạ là 25 kGy(7, 8).<br /> ngà sửa chữa, một đáp ứng của phức hợp ngà Tạo cấu trúc gel fibrin/tế bào<br /> tủy. Những nghiên cứu trước đây đã chứng<br /> Gel fibrin có chứa tế bào bên trong được tạo<br /> minh ngà răng người đã xử lý (hTDM) có tính<br /> bằng cách cho 250 µl huyết tương vào giếng,<br /> tương hợp sinh học cũng như hoạt tính sinh<br /> thêm 250 µl dung dịch CaCl2 40mM vào và thêm<br /> học thích hợp để làm khung nâng đỡ lý tưởng<br /> 104 tế bào gốc tuỷ răng, huyền phù để tế bào<br /> trong tái tạo răng(5).<br /> phân bố đều trong gel. Sau 24 giờ, thu nhận cấu<br /> Khung nâng đỡ fibrin được sử dụng trong trúc gel fibrin/tế bào và ghép lên mảnh ngà răng.<br /> các nghiên cứu tái tạo mô sụn, tim mạch và thần<br /> Thu nhận mô tủy nguyên từ răng người nam<br /> kinh. Các đặc tính sinh học của gel fibrin phù<br /> hợp làm khung nâng đỡ như: tương hợp sinh Răng được tạo các rãnh dọc theo thân và<br /> học, đáp ứng miễn dịch thấp, phân hủy sinh học, chân với độ sâu vừa phải, không lộ tủy bằng<br /> dễ dàng thu nhận và xử lý, có thể tạo ra được máy cắt răng. Mô tủy nguyên được thu nhận<br /> nhiều hình dạng với nhiều kích thước khác trong tủ vô trùng theo các bước sau: khử trùng<br /> nhau... Gel fibrin thu nhận từ máu của bệnh răng trong povidine trong 10 phút, rửa lại với<br /> nhân nên đó là khung nâng đỡ tự thân, sẽ không PBS 1X (2 lần), đặt răng lên gạc vô trùng, dùng<br /> độc, không gây viêm. Gel fibrin mềm mại nên có kéo cắt răng làm đôi theo các rãnh đã được tạo ra<br /> thể đưa vào buồng tủy dễ dàng(2,4,9). Với những trước đó, thu nhận phần tủy buồng, cắt bỏ phần<br /> tính năng này, gel fibrin là vật liệu khung nâng tủy chân gần chóp để tránh nguy cơ nhiễm<br /> đỡ phù hợp cho sự tái tạo mô tủy. Tuy nhiên khuẩn, cho vào 1 đĩa petri sạch có sẵn PBS 1X,<br /> trong kĩ nghệ mô nha khoa hiện nay, ứng dụng dùng lưỡi dao phẫu thuật cắt mô tủy nguyên ra<br /> của gel fibrin còn rất hạn chế. Vì vậy, chúng tôi thành 2 phần.<br /> <br /> <br /> <br /> 2 Chuyên Đề Răng Hàm Mặt<br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 2 * 2016 Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Ghép cấu trúc gel fibrin/tế bào lên mảnh ngà Đánh giá sự tồn tại của tế bào<br /> răng Mô hình sau khi lấy ra sẽ được cố định trong<br /> Chúng tôi thực hiện 3 nghiệm thức nghiên dung dịch formalin 10% đệm phosphate. Sau đó,<br /> cứu, mỗi nghiệm thức được lặp lại 3 lần: mẫu được khử khoáng, cắt lát và nhuộm H&E.<br /> Nghiệm thức 1 (NT 1): Mảnh ngà răng + Đánh giá sự di cư của tế bào<br /> gel fibrin/tế bào + mô tủy nguyên Phần gel fibrin sau khi tách ra từ 3 nghiệm<br /> Nghiệm thức 2 (NT 2): Mảnh ngà răng + thức sau 2 tuần nghiên cứu sẽ được bảo quản<br /> gel fibrin/tế bào trong môi trường nuôi cấy. Sau đó, thực hiện<br /> Nghiệm thức 3 (NT 3): Mảnh ngà răng + phản ứng PCR xác định biểu hiện gen SRY.<br /> gel fibrin Tế bào gốc tủy răng người được thu nhận từ<br /> Cố định gel fibrin và mô tủy nguyên lên mảnh người nữ, mô tủy nguyên được thu nhận từ<br /> ngà răng người nam. Gen SRY là gen đại diện cho giới<br /> tính nam. Phản ứng PCR nhằm xác định có hay<br /> Tùy theo thành phần của từng nghiệm thức,<br /> không sự hiện diện của tế bào người nam ở vùng<br /> tiến hành đặt gel fibrin, gel fibrin/ tế bào và mô<br /> các tế bào nữ trong cấu trúc gel fibrin/tế bào,<br /> tủy nguyên lên rãnh của mảnh ngà răng. Cố<br /> thông qua sự có mặt của gen SRY.<br /> định các thành phần ghép bằng cách đặt lưới<br /> thép không gỉ kích thước 1x1cm, vào từng giếng KẾT QUẢ<br /> của đĩa 4 giếng, lên trên mảnh ngà răng, sao cho<br /> Tạo cấu trúc gel fibrin/tế bào<br /> vừa chặt tay.<br /> Kính hiển vi soi ngược được sử dụng để<br /> quan sát tế bào trong gel.<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> A B<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> C<br /> Hình 1. Tế bào trong gel (40X) A: Tế bào sau khi đưa lên gel fibrin, B: Tế bào sau 24 giờ đưa lên gel fibrin, C: Bề<br /> mặt đĩa sau khi lấy gel fibrin ra.<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Chuyên Đề Răng Hàm Mặt 3<br /> Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 2 * 2016<br /> <br /> <br /> Gel fibrin/ tế bào Gel fibrin/ tế<br /> bào<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> A B<br /> <br /> Ngà Gel fibrin/ tế<br /> bào Ngà<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> Gel fibrin/ tế bào<br /> C D<br /> Hình 2. Tế bào bên trong gel fibrin sau 1 tuần: (A) NT 1; (C) NT 2 và sau 2 tuần: (B) NT 1; (D) NT 2<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> 2 1 F M L<br /> Hình 3. Kết quả PCR gen SRY mẫu gel sau 2 tuần, L: thang đánh giá; M: mô tủy nguyên người nam, F: mô tủy<br /> nguyên người nữ, 1: mẫu gel NT 1, 2: mẫu gel NT 2.<br /> Khi mới được cố định lên gel, tế bào có dạng kính hiển vi hầu như không thấy tế bào (Hình 1<br /> tròn. Sau 24 giờ, tế bào có dạng trải dài. Sau khi A, B, C).<br /> lấy gel fibrin ra khỏi giếng, bề mặt giếng dưới<br /> <br /> <br /> 4 Chuyên Đề Răng Hàm Mặt<br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 2 * 2016 Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Kết quả nhuộm H&E bên trong gel ở 1 tuần và 2 tuần đều tương<br /> Ở cả NT 1 và NT 2, mật độ tế bào bên trong đương nhau, khó nhận ra sự thay đổi. Điều này<br /> gel ở 1 tuần và 2 tuần đều tương đương nhau, cho thấy các tế bào vẫn tồn tại bên trong gel.<br /> khó nhận ra sự thay đổi. (Hình 2 A, B, C, D). Kết quả nghiên cứu phù hợp với các kết luận<br /> Kết quả PCR trên thế giới vì gel fibrin đã được chứng minh là<br /> có khả năng hỗ trợ sự bám, tăng sinh và biệt hóa<br /> Kết quả PCR (Hình 3) cho thấy 4 mẫu đều<br /> của tế bào. Christman (2004) và Zha (2008) đã<br /> biểu hiện gen chứng nội GAPDH (97bp). Mẫu<br /> chứng minh trên gel fibrin tế bào có thể tồn tại<br /> gel của NT 1 biểu hiện gen SRY (224bp) giống<br /> và phát triển được. Gel fibrin có cấu trúc không<br /> với mẫu chứng là mô tủy nguyên của người<br /> gian 3 chiều, các lỗ thông với nhau. Gel fibrin<br /> nam, chứng tỏ đã có tế bào của phần mô tủy<br /> đóng vai trò như chất nền ngoại bào tạm thời,<br /> nguyên trong mô hình in vitro di chuyển sang<br /> cung cấp môi trường cho tế bào phát triển. Ngoài<br /> phần gel fibrin. Mẫu gel của NT 2 biểu hiện âm<br /> ra, gel fibrin có vùng RGD (Arginine-glycine-<br /> tính giống với mẫu chứng là mô tủy nguyên của<br /> asparagine) là vùng cho phép các thụ thể của tế<br /> người nữ, phù hợp với thí nghiệm, do NT 2<br /> bào bám vào. Khi được đưa lên gel fibrin, tế bào<br /> không bổ sung mô tủy nguyên trong mô hình<br /> được giữ lại trong chất nền ngoại bào này(1, 6)<br /> nghiên cứu.<br /> Theo Sharma (2014) và Jamey (2009), sự<br /> BÀN LUẬN mềm mại và tương hợp sinh học tốt của gel<br /> Cấu trúc gel fibrin/tế bào fibrin là rất hiệu quả để tạo khung nâng đỡ cho<br /> Tế bào được đưa vào gel fibrin khi dung dịch tế bào. Hơn nữa, khung nâng đỡ fibrin còn có<br /> fibrin còn tồn tại ở dạng lỏng (chưa hình thành nhiều đặc tính như phân hủy sinh học, dễ dàng<br /> gel). Khi đó, các tế bào huyền phù đều trong thu nhận và xử lý, có thể tạo ra được nhiều hình<br /> dung dịch fibrin. Khoảng 20 phút sau, dung dịch dạng với nhiều kích thước khác nhau. Gel fibrin<br /> fibrin chuyển thành dạng gel, tế bào được bắt thu nhận từ máu của bệnh nhân nên đó là khung<br /> giữ bên trong gel. Dưới kính hiển vi soi ngược, nâng đỡ tự thân, sẽ không độc, không gây viêm.<br /> có thể thấy tế bào phân bố đều trong gel fibrin. Không giống với hydrogel tổng hợp, fibrin<br /> Khi mới được cố định lên gel, tế bào có dạng không chỉ là khung nâng đỡ giúp phân phối tế<br /> tròn do tế bào chưa bám dính và đang ở trạng bào một cách thụ động, mà nó còn chứa các nhân<br /> thái co lại bởi ảnh hưởng của trypsin. Sau khi cố tố tăng trưởng đặc biệt như các thành phần đông<br /> định tế bào lên gel fibrin, cần giữ gel trong tủ máu, gồm fibronectin, axit hyaluronic và nhân tố<br /> nuôi cấy ít nhất 24 giờ trước khi thu nhận. Đó là von Willebrand(2, 4).<br /> thời gian để tế bào thích nghi với môi trường Sự di cư của tế bào<br /> mới và bám trải trên đó. Kết quả PCR để đánh giá sự di cư của tế bào<br /> Quan sát sau 24 giờ, tế bào bắt đầu có dạng từ mô tủy nguyên người nam sang gel fibrin.<br /> bám trải trên khung nâng đỡ gel fibrin. Sau khi Đồng thời với việc khuếch đại gen SRY (224 bp)<br /> lấy gel fibrin ra khỏi giếng, quan sát bề mặt chúng tôi khuếch đại gen GAPDH (97 bp). Đây<br /> giếng dưới kính hiển vi, hầu như không thấy sự là gen được thể hiện trên mọi tế bào, không phụ<br /> xuất hiện của tế bào. Điều này cho thấy, hiệu thuộc vào thể loại, trạng thái hoạt động hay<br /> suất cố định tế bào lên gel fibrin cao. nguồn gốc nên được dùng như một gen nội<br /> Sự tồn tại của tế bào chuẩn để đánh giá chất lượng của sản phẩm<br /> DNA tách chiết. Kết quả cho thấy sự biểu hiện<br /> Sau 2 tuần trong điều kiện nuôi cấy in vitro<br /> của GAPDH ở tất cả các mẫu đều rất rõ ràng.<br /> có thể quan sát thấy nhiều tế bào vẫn hiện diện<br /> Điều này chứng tỏ khâu tách chiết và khuyếch<br /> bên trong gel. Ở cả NT 1 và NT 2, mật độ tế bào<br /> <br /> <br /> Chuyên Đề Răng Hàm Mặt 5<br /> Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số 2 * 2016<br /> <br /> đại đạt độ nhạy. Cả 4 mẫu đều có chất lượng TÀI LIỆU THAM KHẢO<br /> DNA được thu nhận tốt, đảm bảo tiêu chuẩn cho 1. Christman KL, Vardanian AJ, Fang Q., Sievers R. E., Fok H.<br /> phản ứng, phản ứng PCR với chu trình thiết lập H., et al. (2004), "Injectable fibrin scaffold improves cell<br /> transplant survival, reduces infarct expansion, and induces<br /> diễn ra bình thường, đồng thời không có sự khác neovasculature formation in ischemic myocardium", J Am Coll<br /> biệt về lượng mẫu đã sử dụng trong mỗi phản Cardiol, 44 (3), pp.654-660.<br /> 2. Cornelissen C. G., Dietrich M., Kruger S., Spillner J., Schmitz-<br /> ứng PCR.<br /> Rode T., et al. (2012), "Fibrin gel as alternative scaffold for<br /> Hai mẫu đối chứng có kết quả hợp lý, mẫu respiratory tissue engineering", Ann Biomed Eng, 40 (3),<br /> pp.679-687<br /> mô tủy nguyên giới tính nam biểu hiện dương<br /> 3. Gronthos S., Mankani M., Brahim J., Robey P. G., Shi S. (2000),<br /> tính với gen SRY, mẫu mô tủy nguyên giới tính "Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and<br /> nữ không biểu hiện gen SRY. Về kết quả khuếch in vivo", Proc Natl Acad Sci USA, 97 (25), pp.13625-13630.<br /> 4. Janmey P. A., Winer J. P., Weisel J. W. (2009), "Fibrin gels and<br /> đại gen SRY, mẫu biểu hiện dương tính chỉ có their clinical and bioengineering applications", Journal of The<br /> nghiệm thức 1. Trong mô hình thí nghiệm, Royal Society Interface, 6 (30), pp.1-10.<br /> nghiệm thức 1 được bổ sung mô tủy nguyên 5. Li R., Guo W., Yang B., Guo L., Sheng L., et al. (2011), "Human<br /> treated dentin matrix as a natural scaffold for complete<br /> người nam và gel fibrin có tế bào nữ. Kết quả human dentin tissue regeneration", Biomaterials, 32 (20),<br /> cho thấy phần gel fibrin ở nghiệm thức 1 đã xuất pp.4525-4538.<br /> 6. Shaikh F. M., Callanan A., Kavanagh E. G., Burke P. E., Grace<br /> hiện tế bào mang giới tính nam, từ đó kết luận<br /> P. A., et al. (2008), "Fibrin: a natural biodegradable scaffold in<br /> rằng tế bào từ mô tủy nguyên của người nam đã vascular tissue engineering", Cells Tissues Organs, 188 (4),<br /> di cư sang phần gel fibrin trong mô hình thí pp.333-346.<br /> 7. Tran Le Bao Ha, Nguyen Thi Ngoc My, Doan Nguyen Vu<br /> nghiệm. Nghiệm thức 2 âm tính với gen SRY, (2015), "Fabrication and evaluation of human dentin as<br /> phù hợp với mô hình thí nghiệm, do nghiệm scafford for dental pulp stem cells", Tissue engineering and<br /> thức 2 không được bổ sung mô tủy nguyên của Regenerative medicine.<br /> 8. Tran Le Bao Ha, Đoan Nguyen Vu, To Minh Quan, Phan Kim<br /> người nam, chỉ có gel fibrin có tế bào nữ. Kết quả Ngoc, Nguyen Thi Thu, et al. (2011), "Study on Culture of<br /> PCR có thể đưa ra kết luận rằng tế bào từ mô tủy Human Dental Pulp Stem Cells to apply in Tissue<br /> nguyên đã di cư sang cấu trúc gel fibrin/tế bào. Engineering", Journal of Biomimetics, Biomaterials & Tissue<br /> Engineering, 11, pp.13-20.<br /> KẾT LUẬN 9. Zhao H., Ma L., Zhou J., Mao Z., Gao C., et al. (2008),<br /> "Fabrication and physical and biological properties of fibrin<br /> Kết quả nghiên cứu đã tạo được cấu trúc gel gel derived from human plasma", Biomed Mater, 3 (1),<br /> fibrin/tế bào từ huyết tương và dung dịch CaCl2 pp.15001-15010<br /> <br /> với nồng độ cuối của CaCl2 là 20mM, và mật độ<br /> 104 tế bào trên 500 µl gel. Có sự tồn tại của tế bào Ngày nhận bài báo: 27/01/2016<br /> bên trong cấu trúc gel fibrin sau 2 tuần ghép trên Ngày phản biện nhận xét bài báo: 26/02/2016<br /> mảnh ngà răng đã xử lý và sự di cư của tế bào Ngày bài báo được đăng: 25/03/2016<br /> trong mô tủy nguyên sang gel fibrin.<br /> Lời cảm ơn: Nghiên cứu này được tài trợ bởi Bộ Khoa học và<br /> Công nghệ trong khuôn khổ đề tài mã số ĐTĐL.2012-G34.<br /> <br /> <br /> <br /> <br /> 6 Chuyên Đề Răng Hàm Mặt<br />