KỸ THUẬT DI TRUYỀN - PHẦN 1

Chia sẻ: Nguyen Nhi | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:12

Thêm vào BST

Báo xấu

195
lượt xem 57
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

THU HỒI NUCLEIC ACID 1. PHƯƠNG PHÁP TÁCH CHIẾT - Tách chiết DNA - Tách chiết RNA 2. PHƯƠNG PHÁP LY TÂM - Ly tâm phân đoạn - Ly tâm đẳng tỷ trọng – Thu nhận nucleic acid tinh sạch 3. PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ Thu mRNA

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: KỸ THUẬT DI TRUYỀN - PHẦN 1

KYÕ THUAÄT DI TRUYEÀN 1
QUAÙ TRÌNH NGHIEÂN CÖÙU GENE Söû duïng caùc enzyme, vector Taùch chieât PCR, Taïo Giaûi Southern Northern Gaây taïo DNA, RNA RT-PCR doøng trình töï blot blot ñoät bieán COÂ LAÄP THU NHAÄN XAÙC ÑÒNH CAÁU TÌM HIEÅU CHÖÙC GENE GENE TRUÙC GENE NAÊNG CUÛA GENE Phaân tích Toång hôïp Caùc phöông Phieân maõ ... phaùp in silico ñònh tính, nhaân taïo – dòch maõ in vitro ñònh löôïng Ñieän Ño di OD ÖÙNG DUÏNG Muïc tieâu : Hieåu roõ caáu truùc vaø chöùc naêng cuûa gene ñeå öùng duïng vaøo caùc lónh vöïc khoa hoïc vaø ñôøi soáng 2
NOÄI DUNG 1. Thu hoài nucleic acid 2. Phaân tích ñònh tính vaø ñònh löôïng nucleic acid 3. Söû duïng caùc enzyme thoâng duïng trong sinh hoïc phaân töû 4. Lai phaân töû 5. Taïo doøng 6. PCR 7. Giaûi trình töï nucleic acid 8. Bieán ñoåi vaät lieäu di truyeàn vaø chuyeån vaät lieäu di truyeàn ñaõ bieán ñoåi vaøo teá baøo 3
THU HOÀI NUCLEIC ACID 1. PHÖÔNG PHAÙP TAÙCH CHIEÁT - Taùch chieát DNA - Taùch chieát RNA 2. PHÖÔNG PHAÙP LY TAÂM - Ly taâm phaân ñoaïn - Ly taâm ñaúng tyû troïng – Thu nhaän nucleic acid tinh saïch 3. PHÖÔNG PHAÙP SAÉC KYÙ Thu mRNA 4
TAÙCH CHIEÁT DNA & RNA DNA RNA Thiocyanate 1. Phaù maøng teá baøo, maøng nhaân Chaát taåy (SDS) guanidinium + sieâu aâm, .. LiCl, Urea, .. + cô hoïc, .. 2. Loaïi protein Phenol pH8 : Phenol pH4 : Chloroform:IAA Chloroform:IAA Khaùc Khaùc 3. Thu hoài nucleic acid : Tuûa Ethanol tuyeät ñoái Ethanol tuyeät ñoái Isopropanol, .. Isopropanol, .. Boom Haáp phuï treân silica Haáp phuï treân silica Loïc Thu treân maøng loïc Thu treân maøng loïc 5
PHAÙ MAØNG SINH HOÏC BAÈNG CHAÁT TAÅY Chaát taåy ion hoùa coù taùc duïng phaù maøng maïnh, khoâng ion hoùa coù taùc duïng phaù maøng nheï hôn. Chaát taåy, laø phaân töû löôõng cöïc, seõ keát hôïp vôùi protein maøng vaø caùc phaân töû phospholipid laøm phaù vôõ caáu truùc maøng 6
LY TAÂM PHAÂN ÑOAÏN Ly taâm phaân ñoïan (a) vaø phaân ñoaïn vuøng (b) phaân taùch caùc phaàn töû trong hoãn hôïp döïa treân khoái löôïng cuûa chuùng. Thôøi gian vaø löïc ly taâm ñöôïc xaùc ñònh cho töøng nhoùm phaàn töû. Dung dòch ly taâm coù tyû troïng thaáp hôn caùc phaàn töû caàn phaân taùch 7
LY TAÂM ÑAÚNG TYÛ TROÏNG Ly taâm ñaúng tyû troïng (isopycnic) phaân taùch caùc phaàn töû trong hoãn hôïp döïa treân tyû troïng cuûa chuùng. Thôøi gian vaø löïc ly taâm laø chung cho caùc nhoùm phaàn töû. Dung dòch ly taâm coù tyû troïng vôùi giaù trò ñi töø thaáp hôn ñeán cao hôn tyû troïng cuûa caùc phaàn töû caàn phaân taùch 8
THU HOÀI NUCLEIC ACID, PHAGE SAU LY TAÂM ÑAÚNG TYÛ TROÏNG 9
CAÙC PHÖÔNG PHAÙP SAÉC KYÙ Saéc kyù loïc gel Saéc kyù aùi löïc KT-KN Saéc kyù trao ñoåi ion 10
THU HOÀI mRNA BAÈNG SAÉC KYÙ AÙI LÖÏC 11
CAÂU HOÛI – PHAÀN 1 1. Nhöõng khaùc bieät trong phöông phaùp taùch chieát-tinh saïch DNA vaø RNA, vì sao laïi coù nhöõng khaùc bieät ñoù ? 2. Phöông phaùp tuûa, Boom coù nhöõng öu nhöôïc ñieåm gì ? 3. Khaùc bieät giöõa ly taâm phaân ñoaïn vaø ly taâm ñaúng tyû troïng ? ÖÙng duïng cuûa töøng loaïi ly taâm ? 4. Phöông phaùp taùch chieát-tinh saïch DNA plasmid coù gì khaùc vôùi taùch chieát-tinh saïch DNA boä gene ? 12