Luận văn Thạc sĩ Khoa học: Hoạt tính của protease kim loại (MMP 2, MMP-9) ở bệnh nhân ung thư đại trực tràng trước và sau phẫu thuật

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI<br /> TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN<br /> ---------------------<br /> <br /> Hoàng Ngọc Anh<br /> <br /> HOẠT TÍNH CỦA PROTEASE KIM LOẠI (MMP-2, MMP-9)<br /> Ở BỆNH NHÂN UNG THƯ ĐẠI TRỰC TRÀNG<br /> TRƯỚC VÀ SAU PHẪU THUẬT<br /> <br /> LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC<br /> <br /> Hà Nội – 2017<br /> <br /> ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI<br /> TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN<br /> ---------------------<br /> <br /> Hoàng Ngọc Anh<br /> <br /> HOẠT TÍNH CỦA PROTEASE KIM LOẠI (MMP-2, MMP-9)<br /> Ở BỆNH NHÂN UNG THƯ ĐẠI TRỰC TRÀNG<br /> TRƯỚC VÀ SAU PHẪU THUẬT<br /> <br /> Chuyên ngành: Sinh học Thực nghiệm<br /> Mã số: 60420114<br /> <br /> LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC<br /> NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS Trịnh Hồng Thái<br /> TS Đỗ Minh Hà<br /> <br /> Hà Nội – 2017<br /> <br /> LỜI CẢM ƠN<br /> Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc nhất tới PGS.TS. Trịnh Hồng Thái, người<br /> thầy đã luôn quan tâm, tận tình chỉ bảo, hướng dẫn tôi trong suốt quá trình học tập,<br /> thực hiện và hoàn thành luận văn này.<br /> Tôi cũng xin bày tỏ lòng biết ơn với những ý kiến đóng góp quý báu của TS.<br /> Đỗ Minh Hà trong suốt quá trình tôi thực hiện và hoàn thành luận văn.<br /> Trong quá trình học tập, làm việc và thực hiện luận văn, tôi đã nhận được sự<br /> giúp đỡ rất nhiều của ThS. Phạm Thị Bích, ThS. Nguyễn Thị Tú Linh, ThS. Lê Lan<br /> Phương và các bạn sinh viên làm việc tại Phòng Proteomics và Sinh học Cấu trúc<br /> thuộc Phòng thí nghiệm Trọng điểm Công nghệ Enzyme và Protein, Trường Đại<br /> học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội.<br /> Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn tới ThS. BS. Phạm Mạnh Cường cùng Khoa Tế<br /> bào và Giải phẫu bệnh, Bệnh viện Quân y 103 và đồng cảm ơn tới Khoa Xét nghiệm<br /> và Sàng lọc máu Viện Huyết học -Truyền máu Trung ương vì đã cung cấp mẫu<br /> những mẫu bệnh phẩm và đối chứng quý giá trong quá trình thực hiện luận văn.<br /> Tôi cũng xin bày tỏ lòng cảm ơn tới Phòng thí nghiệm Trọng điểm Công<br /> nghệ Enzym và Protein, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên đã tạo điều kiện giúp<br /> đỡ tôi về trong suốt quá trình làm luận văn này.<br /> Cuối cùng, tôi vô cùng biết ơn gia đình và bạn bè đã khích lệ, động viên và<br /> luôn bên tôi trong suốt thời gian qua.<br /> Hà Nội, tháng 02 năm 2017<br /> Học viên<br /> <br /> Hoàng Ngọc Anh<br /> <br /> MỤC LỤC<br /> <br /> BẢNG KÝ HIỆU VÀ CÁC CHỮ VIẾT TẮT ........................................................... i<br /> DANH MỤC CÁC BẢNG......................................................................................... ii<br /> MỞ ĐẦU .....................................................................................................................1<br /> Chương 1 -<br /> <br /> TỔNG QUAN .....................................................................................3<br /> <br /> 1.1.<br /> <br /> Khái quát về ung thư đại trực tràng .................................................3<br /> <br /> 1.1.1. Ung thư đại trực tràng .................................................................3<br /> 1.1.2. Nguyên nhân gây ung thư đại trực tràng và các yếu tố nguy cơ.4<br /> 1.1.3. Phân loại ung thư đại trực tràng ..................................................6<br /> 1.1.4. Ảnh hưởng sau phẫu thuật...............................................................9<br /> 1.2.<br /> <br /> Tổng quan về các MMP ...................................................................9<br /> <br /> 1.2.1. Matrix Metalloproteinases ..........................................................9<br /> 1.2.2. Sự hoạt hóa dạng tiền hoạt động (pro-MMP) ...........................12<br /> 1.2.3. Vai trò của họ Matrix Metalloproteinase ..................................13<br /> 1.3.<br /> Chương 2 -<br /> <br /> Tình hình nghiên cứu MMP trong ung thư đại trực tràng .............16<br /> NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP ............................................21<br /> <br /> 2.1.<br /> <br /> Nguyên liệu ....................................................................................21<br /> <br /> 2.1.1. Đối tượng nghiên cứu ...............................................................21<br /> 2.1.2. Thiết bị ......................................................................................21<br /> 2.1.3. Hóa chất ....................................................................................21<br /> 2.2.<br /> <br /> Phương pháp ..................................................................................22<br /> <br /> 2.2.1. Tách chiết protein tổng số từ mẫu mô ......................................23<br /> 2.2.2. Xác định hàm lượng protein theo phương pháp Bradford ........24<br /> 2.2.3. Điện di xác định hoạt tính enzyme MMP trên gel<br /> polyacrylamide .................................................................................................25<br /> <br /> 2.2.4. Phân tích hình ảnh bản gel điện di bằng phần mềm Image J ....27<br /> 2.2.5. Phân tích, đánh giá kết quả .......................................................28<br /> Chương 3 -<br /> <br /> KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN .............................................................29<br /> <br /> 3.1. Xác định hoạt tính enzyme trên gel polyacrylamide có SDS có bổ<br /> sung cơ chất gelatin ..............................................................................................29<br /> 3.2.<br /> <br /> Hoạt độ của MMP-2 và MMP-9 trong các mẫu mô và huyết tương<br /> <br /> của bệnh nhân ung thư đại trực tràng....................................................................33<br /> 3.2.1. Hoạt độ của MMP-2 và MMP-9 theo vị trí mô ........................33<br /> 3.2.2. Hoạt độ của MMP-2 và MMP-9 trong huyết tương .................36<br /> 3.3. Hoạt độ của MMP-2 và MMP-9 theo một số đặc điểm bệnh học<br /> của bệnh nhân ung thư đại trực tràng....................................................................40<br /> KẾT LUẬN ...............................................................................................................46<br /> KIẾN NGHỊ ..............................................................................................................47<br /> TÀI LIỆU THAM KHẢO .........................................................................................48<br /> PHỤ LỤC .................................................................................................................... i<br /> <br />