Luận văn Thạc sĩ Khoa học: Nghiên cứu, phân lập và nuôi cấy tăng sinh tế bào gốc mỡ định hướng ghép tự thân trong điều trị vết thương mạn tính

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI<br /> TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN<br /> -------------------------<br /> <br /> ĐỊCH THỊ KIM HƢƠNG<br /> <br /> NGHIÊN CỨU, PHÂN LẬP VÀ NUÔI CẤY TĂNG SINH<br /> TẾ BÀO GỐC MỠ ĐỊNH HƢỚNG GHÉP TỰ THÂN<br /> TRONG ĐIỀU TRỊ VẾT THƢƠNG MẠN TÍNH<br /> <br /> LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC<br /> <br /> Hà Nội – 2016<br /> <br /> ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI<br /> TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN<br /> -------------------------<br /> <br /> ĐỊCH THỊ KIM HƢƠNG<br /> <br /> NGHIÊN CỨU, PHÂN LẬP VÀ NUÔI CẤY TĂNG SINH<br /> TẾ BÀO GỐC MỠ ĐỊNH HƢỚNG GHÉP TỰ THÂN<br /> TRONG ĐIỀU TRỊ VẾT THƢƠNG MẠN TÍNH<br /> Chuyên ngành : Sinh học thực nghiệm<br /> Mã số<br /> <br /> : 60420114<br /> <br /> LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC<br /> <br /> NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC<br /> 1. PGS.TS.BS. Đinh Văn Hân<br /> 2. PGS. TS. Nguyễn Lai Thành<br /> <br /> Hà Nội - 2016<br /> <br /> LỜI CẢM ƠN<br /> Trước tiên, em xin bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc nhất tới PGS.TS.BS.<br /> Đinh Văn Hân và PGS. TS. Nguyễn Lai Thành – những người thầy đã tận tâm, nhiệt<br /> tình chỉ bảo, hướng dẫn cũng như động viên, cổ vũ tinh thần cho em trong suốt quá<br /> trình thực hiện đề tài luận văn thạc sĩ.<br /> Em xin bày tỏ lời cảm ơn sâu sắc đến những thầy cô giáo đã giảng dạy em trong<br /> những năm qua, những kiến thức nền tảng mà thầy cô nhiệt tâm truyền lại sẽ là hành<br /> trang giúp em vững bước trong tương lai.<br /> Em xin trân trọng cảm ơn Ban Giám hiệu, Phòng Sau đại học, Khoa Sinh học, Bộ<br /> môn Sinh học Tế bào - Trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà<br /> Nội đã tạo điều kiện thuận lợi tối đa cho em hoàn thành khóa học.<br /> Xin chân thành cảm ơn các cô chú, anh, chị, em tại Khoa Labo nghiên cứu ứng<br /> dụng trong điều trị Bỏng, khoa Liền vết thương – Viện Bỏng Quốc Gia đã quan tâm,<br /> hỗ trợ, tạo điều kiện để em thực hiện đề tài.<br /> Cuối cùng, xin được gửi lời tri ân đến gia đình, bạn bè và tất cả những người thân<br /> yêu đã luôn động viên, khích lệ, giúp đỡ em trong quá trình học tập để em hoàn thành<br /> bản luận văn này!<br /> <br /> Hà Nội, ngày 12 tháng 12 năm 2016<br /> Học viên<br /> <br /> Địch Thị Kim Hương<br /> <br /> MỤC LỤC<br /> MỞ ĐẦU ......................................................................................................................... 1<br /> Chƣơng 1 ........................................................................................................................ 1<br /> TỔNG QUAN TÀI LIỆU .............................................................................................. 3<br /> 1.1. Tổng quan về tế bào gốc ....................................................................................... 3<br /> 1.1.1. Khái niệm tế bào gốc ..................................................................................... 3<br /> 1.1.2. Phân loại tế bào gốc ....................................................................................... 3<br /> 1.2. Tế bào gốc trung mô (Mesenchymal stem cells – MSCs) và tế bào gốc trung mô<br /> từ mô mỡ...................................................................................................................... 5<br /> 1.3. Vết thương và các yếu tố tham gia liền vết thương .............................................. 9<br /> 1.3.1. Diễn biến quá trình liền vết thương ............................................................... 9<br /> 1.3.2. Các thành phần tế bào chủ yếu tham gia liền vết thương ............................ 11<br /> 1.4. Vết thương mạn tính ........................................................................................... 12<br /> 1.4.1. Các đặc điểm chính của vết thương mạn tính ............................................. 12<br /> 1.4.2. Một số loại vết thương mạn tính điển hình ................................................. 13<br /> 1.4.3. Nguyên nhân và điều trị vết thương mạn tính ............................................. 15<br /> 1.5. Vai trò của tế bào gốc trong liền vết thương ...................................................... 18<br /> 1.6. Một số ứng dụng tiêu biểu của tế bào gốc trung mô trên lâm sàng.................... 20<br /> 1.6.1. Ứng dụng trên điều trị tổn thương mạn tính do xạ trị ................................. 20<br /> 1.6.2. Ứng dụng trên điều trị vết loét mạn tính do tiểu đường .......................... 2021<br /> 1.7. Đánh giá an toàn của tế bào gốc mỡ sau nuôi cấy tăng sinh ............................ 221<br /> 1.7.1. Đánh giá tính an toàn của tế bào gốc mỡ sau nuôi cấy tăng sinh thông qua<br /> nhiễm sắc thể đồ .................................................................................................. 223<br /> 1.7.2. Đánh giá an toàn tế bào gốc mỡ sau nuôi cấy tăng sinh thông qua định<br /> lượng enzyme telomerase .................................................................................... 245<br /> Chƣơng 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ........................... 28<br /> 2.1. Đối tượng, nguyên - vật liệu nghiên cứu ............................................................ 28<br /> 2.1.1. Đối tượng nghiên cứu .................................................................................. 28<br /> 2.2.2. Hóa chất cơ bản cho nghiên cứu ................................................................. 28<br /> 2.2. Phương pháp nghiên cứu .................................................................................. 299<br /> 2.2.1. Thu mô mỡ và phân lập tế bào .................................................................. 299<br /> 2.2.2. Nuôi cấy tăng sinh tế bào ASCs .................................................................. 30<br /> 2.2.3. Xác định số lượng tế bào ............................................................................. 30<br /> 2.2.4. Bảo quản và phục hồi tế bào sau bảo quản.................................................. 31<br /> 2.2.5. Xác định đặc điểm hình thái tế bào trong nuôi cấy tăng sinh ..................... 32<br /> <br /> 2.2.6. Xác định khả năng tạo dòng của tế bào ....................................................... 32<br /> 2.2.7. Lập kiểu nhân của tế bào ............................................................................. 32<br /> 2.2.8. Tách chiết và định lượng enzyme telomerase của tế bào sau nuôi cấy tăng<br /> sinh......................................................................................................................... 33<br /> 2.2.9. Phương pháp đánh giá ảnh hưởng của tế bào gốc mô mỡ đến nguyên bào<br /> sợi in vitro .............................................................................................................. 34<br /> 2.2.10. Theo dõi bệnh nhân có vết thương mạn tính được ghép tế bào gốc trung<br /> mô từ mô mỡ ........................................................................................................ 35<br /> Chƣơng 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN........................................ 377<br /> 3.1. Phân lập tế bào gốc trung mô từ mô mỡ........................................................... 377<br /> 3.2. Đặc điểm phân lập và hình thái tế bào ............................................................... 38<br /> 3.3. Khả năng tạo colony của tế bào gốc mỡ............................................................. 40<br /> 3.4. Nuôi cấy tăng sinh và nhân rộng tế bào gốc trung mô từ mô mỡ .................... 444<br /> 3.5. Về việc đánh giá tính an toàn của ASCs sau nuôi cấy tăng sinh ...................... 455<br /> 3.6. Tác động của tế bào gốc mỡ bệnh nhân lên nguyên bào sợi da in vitro ............ 51<br /> 3.7. Theo dõi quá trình liền vết thương ở một ca sau ghép tế bào gốc trung mô từ mô<br /> mỡ .............................................................................................................................. 52<br /> KẾT LUẬN ................................................................................................................. 56<br /> KIẾN NGHỊ ................................................................................................................ 57<br /> TÀI LIỆU THAM KHẢO<br /> <br />