Bài giảng Công nghệ di truyền: Chương 4 - Nguyễn Vũ Phong

Chia sẻ: Minh Vũ | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:36

Thêm vào BST

Báo xấu

146
lượt xem 13
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Bài giảng "Công nghệ di truyền - Chương 4: Thư viện DNA bộ gene (DNA genomic library)" cung cấp cho người học các kiến thức: DNA genomic library là gì, thực hiện (phage hoặc cosmid), cDNA library, tổng hợp cDNA đuôi trùng hợp,... Mời các bạn cùng tham khảo nội dung chi tiết.

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Bài giảng Công nghệ di truyền: Chương 4 - Nguyễn Vũ Phong

Thư viện DNA bộ gene (DNA genomic library)
DNA genomic library là gì? • Tập hợp tất cả các đoạn DNA của bộ gene sinh vật. • Các đoạn DNA được tạo dòng trong các vector • Sử dụng nhằm phân lập một đoạn DNA hoặc xác định vị trí của đoạn DNA trên bộ gene
Thực hiện (phage hoặc cosmid) RE Siêu âm -----------
B1. Cắt bộ gene bằng RE • Sử dụng các RE có trình tự nhận biết gồm 4 nu • Cắt từng phần để thu được lượng lớn gene nguyên vẹn. • Sử dụng DNA tách từ các loại mô khác nhau • Cắt vector với cùng RE để tạo đầu cố kết • Có thể sử dụng 2 RE để tránh tự kết nối.
B2. Tạo dòng • Plasmid: hạn chế đối với đoạn DNA kích thước lớn, hiệu suất biến nạp tương đối thấp. • Phage : phổ biến nhất, mang DNA ~ 20 kb • Cosmid: mang đoạn DNA ~ 40 – 50 kb • BAC : hữu hiệu nhất – Mang đoạn DNA lớn 100 – 300 kb – Ít hình thành thể khảm – Hiệu quả trong tạo dòng và thu hồi DNA – Duy trì sự ổn định của DNA gắn trong vector • YAC : nhận đoạn DNA lớn, khó thao tác.
B3. Chuyển nạp vào tế bào chủ • Hóa biến nạp • Điện biến nạp • Đóng gói DNA tái tổ hợp (phage  hoặc cosmid) và cho xâm nhiễm tế bào vi khuẩn
cDNA library Tại sao cần xây dựng thư viện cDNA ?
Tách chiết, tinh sạch và phân tích RNA 1) Tách chiết RNA tổng số - Nguyên lý: tách rời RNA ra khỏi hỗn hợp DNA , protein,… - Kiểm soát ribonuclease (RNase) = chất ức chế 2) Tách chiết mRNA - Đuôi poly A - Tách bằng sắc ký ái lực oligo dT - Thu nhận bằng ly tâm
Tổng hợp cDNA theo pp RNaseH
Tổng hợp cDNA self priming
Tổng hợp cDNA đuôi trùng hợp
Tạo dòng cDNA = hệ thống dG:dC
Tạo dòng cDNA bằng 1 linker