intTypePromotion=1
zunia.vn Tuyển sinh 2024 dành cho Gen-Z zunia.vn zunia.vn
ADSENSE

Bài giảng Công nghệ di truyền: Chương 4 - Nguyễn Vũ Phong

Chia sẻ: Minh Vũ | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:36

134
lượt xem
12
download
 
  Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Bài giảng "Công nghệ di truyền - Chương 4: Thư viện DNA bộ gene (DNA genomic library)" cung cấp cho người học các kiến thức: DNA genomic library là gì, thực hiện (phage hoặc cosmid), cDNA library, tổng hợp cDNA đuôi trùng hợp,... Mời các bạn cùng tham khảo nội dung chi tiết.

Chủ đề:
Lưu

Nội dung Text: Bài giảng Công nghệ di truyền: Chương 4 - Nguyễn Vũ Phong

  1. Thư viện DNA bộ gene (DNA genomic library)
  2. DNA genomic library là gì? • Tập hợp tất cả các đoạn DNA của bộ gene sinh vật. • Các đoạn DNA được tạo dòng trong các vector • Sử dụng nhằm phân lập một đoạn DNA hoặc xác định vị trí của đoạn DNA trên bộ gene
  3. Thực hiện (phage hoặc cosmid) RE Siêu âm -----------
  4. B1. Cắt bộ gene bằng RE • Sử dụng các RE có trình tự nhận biết gồm 4 nu • Cắt từng phần để thu được lượng lớn gene nguyên vẹn. • Sử dụng DNA tách từ các loại mô khác nhau • Cắt vector với cùng RE để tạo đầu cố kết • Có thể sử dụng 2 RE để tránh tự kết nối.
  5. B2. Tạo dòng • Plasmid: hạn chế đối với đoạn DNA kích thước lớn, hiệu suất biến nạp tương đối thấp. • Phage : phổ biến nhất, mang DNA ~ 20 kb • Cosmid: mang đoạn DNA ~ 40 – 50 kb • BAC : hữu hiệu nhất – Mang đoạn DNA lớn 100 – 300 kb – Ít hình thành thể khảm – Hiệu quả trong tạo dòng và thu hồi DNA – Duy trì sự ổn định của DNA gắn trong vector • YAC : nhận đoạn DNA lớn, khó thao tác.
  6. B3. Chuyển nạp vào tế bào chủ • Hóa biến nạp • Điện biến nạp • Đóng gói DNA tái tổ hợp (phage  hoặc cosmid) và cho xâm nhiễm tế bào vi khuẩn
  7. cDNA library Tại sao cần xây dựng thư viện cDNA ?
  8. Tách chiết, tinh sạch và phân tích RNA 1) Tách chiết RNA tổng số - Nguyên lý: tách rời RNA ra khỏi hỗn hợp DNA , protein,… - Kiểm soát ribonuclease (RNase) = chất ức chế 2) Tách chiết mRNA - Đuôi poly A - Tách bằng sắc ký ái lực oligo dT - Thu nhận bằng ly tâm
  9. Tổng hợp cDNA theo pp RNaseH
  10. Tổng hợp cDNA self priming
  11. Tổng hợp cDNA đuôi trùng hợp
  12. Tạo dòng cDNA = hệ thống dG:dC
  13. Tạo dòng cDNA bằng 1 linker
ADSENSE

CÓ THỂ BẠN MUỐN DOWNLOAD

 

Đồng bộ tài khoản
2=>2