Nghiên cứu xây dựng quy trình nhân giống hoa violet châu Phi (Saintpaulia) bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào

Chia sẻ: Leon Leon | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:7

Thêm vào BST

Báo xấu

174
lượt xem 32
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Nghiên cứu về giao thức tuyên truyền nhanh chóng của Violet Châu Phi (Saintpaulia) bằng nuôi cấy mô cho thấy vật chất ban đầu là lá non. Các steriliration bằng HgCl2 0,1% trong 6 phút là hiệu quả cao nhất. Môi trường MS + 7,0 g / l agar + 20 g / l saccaroza + 2 g / l than với bổ sung 1,0 mg / l BAP phù hợp để tạo thành mô sẹo từ Violet Châu Phi lá (94,45%). Môi trường nuôi cấy tối ưu cho tái sinh và nhân chồi từ mô sẹo là môi trường MS + 7,0 g...

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Nghiên cứu xây dựng quy trình nhân giống hoa violet châu Phi (Saintpaulia) bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào

NGHIÊN C U XÂY D NG QUY TRÌNH NHÂN GI NG HOA VIOLET CHÂU PHI (Saintpaulia) B NG PHƯƠNG PHÁP NUÔI C Y MÔ T BÀO Lê c Th o1, Nguy n Th Kim Lý1 Summary A study on rapid propagation protocol of Violet Châu Phi (Saintpaulia) by tissue culture Study on rapid propagation protocol of Violet Chau Phi (Saintpaulia) by tissue culture showed that initial material is tender leaves. The steriliration by HgCl2 0,1% in 6 minutes is the highest effect. MS medium + 7,0 g/l agar + 20 g/l saccaroza + 2 g/l charcoal with supplementation of 1,0 mg/l BAP is suitable to form callus from Violet Châu Phi leaves (94,45%). The optimal culture medium for regeneration and shoot multiplication from callus is MS medium + 7,0 g/l agar + 20 g/l saccaroza + 2 g/l charcoal supplemented with 0,3 mg/l BAP. The best medium for root induction from invitro shoots was MS + 7,0 g/l agar + 20 g/l saccaroza + 2 g/l charcoal with addition of 0,3 mg/l , 100% shoots inducted roots from this medium with 37,8 roots/shoot and average length was 0,65 cm. In nursery, the best suitable substrate for plantlets was coconut fiber with surviving ratio 100%, the high plant 3,53 cm and number leaves/plant 9,4 after one week observed Keywords: Saintpaulia, rapid propagation, nursery, coconut fiber, plantlets, substrates. 1 nghi m. K t qu cho th y chúng sinh I. TV N trư ng phát tri n t t trong i u ki n sinh Ngày nay, bên c nh các lo i hoa c t, thái Vi t Nam. áp ng vi c cung c p các lo i hoa tr ng ch u trang trí ngày càng gi ng cho s n xu t v i s lư ng l n, cây ư c ưa chu ng và ph bi n, c bi t các con kh e và s ch b nh, chúng tôi ti n hành nư c phát tri n. Khi cu c s ng ang ngày nghiên c u xây d ng qui trình nhân nhanh càng ư c ô th hoá, các lo i hoa tr ng gi ng Violet Châu Phi (Saintpaulia) b ng ch u ã góp ph n áng k trong vi c c i phương pháp nuôi c y mô t bào. t o môi trư ng s ng, áp ng nhu c u trang trí, thay i không gian s ng và làm II. V T LI U VÀ PHƯƠNG PHÁP cho cu c s ng con ngư i g n gũi v i thiên NGHIÊN C U nhiên hơn. Có r t nhi u lo i hoa tr ng 1. V t li u nghiên c u ch u ph bi n và ư c ngư i tiêu dùng ưa chu ng như Begonia, Cineraria, Geranium, V t li u và m u ban u là nh ng mNu Saintpaulia,... Trong ó, cây Saintpaulia lá non, lá bánh t c a cây Violet Châu Phi hay còn g i là Violet Châu Phi là lo i cây kích thư c m u 1 cm 2. p, a d ng v màu s c và ã ư c Vi n 2. Phương pháp nghiên c u Di truy n Nông nghi p nh p n i, th C t t cây Violet Châu Phi các lá non, 1 bánh t r a s ch b ng xà phòng, sau ó c t Vi n Di truy n Nông nghi p.
lá thành các mNu nh cho vào các bình tam - i u ki n nuôi c y: N hi t nuôi c y 0 giác r i cho vào b u c y và ti n hành thao 25 - 28 C, ánh sáng 1500 - 2000 Lux, th i tác kh trùng. Trư c tiên, r a m u b ng gian 8 gi /ngày. nư c c t ( ã kh trùng) 2 - 3 l n, kh trùng - Thí nghi m ư c b trí ng u nhiên, 3 sơ b b ng c n 700C trong 30 giây. Sau ó l n nh c l i. S li u ư c x lý th ng kê lo i b h t nư c và kh trùng b ng HgCl2 trên chương trình IRRISTAT. và H2O2 theo các công th c thí nghi m. L y m u ra kh i dung d ch kh trùng, tráng 3 - III. K T QU VÀ TH O LU N 5 l n b ng nư c c t ( ã kh trùng) r i c y vào môi trư ng MS + 7,0 g/l agar + 20 g/l 1. ghiên c u phương pháp kh trùng saccaroza. Các m u lá sau 2 tu n theo dõi hoa Violet Châu Phi ư c c y chuy n vào môi trư ng t o callus, tài ã s d ng ngu n m u ban u môi trư ng cơ b n: MS + 7,0 g/l agar + 20 t lá cây Violet Châu Phi t o v t li u vô g/l saccaroza + 2 g/l than. Ti p t c nghiên trùng trong ng nghi m. M u ư c kh c u môi trư ng t o ch i và ra r , t o cây trùng b ng h p ch t HgCl2 và H2O2. Sau 2 hoàn ch nh. Cây con sau khi ưa ra kh i tu n nuôi c y ta thu ư c k t qu th hi n bình nuôi c y ư c r a s ch môi trư ng bám trong (b ng 1). dính r b ng nư c s ch, sau ó giâm vào khay b ng x p v i các giá th khác nhau. B ng 1. Hi u qu c a các phương pháp kh trùng T l s ch (%) Công th c T l nhi m (%) T l s ng (%) T l ch t (%) CT1 73,33 23,3 3,3 CT2 23,33 60,0 16,7 CT3 16,7 36,7 46,7 CT4 86,7 13,3 0 CT5 63,3 26,7 10 CT6 53,3 33,3 13,3 Ghi chú: CT1: HgCl2 0,1% trong 3 phút; CT2:HgCl2 0,1% trong 5 phút; CT3: HgCl2 0,1% trong 7 phút; CT4: H2O2 15% trong 10 phút; CT5: H2O2 20% trong 10 phút; CT6: H2O2 25% trong 10 phút. Qua b ng 1 cho th y: Hi u qu kh kh trùng. T l m u s ng, s ch cao nh t trùng m u gi a các công th c có s bi n khi kh trùng n ng 25% t 33,3%. ng như sau: - i v i ch t kh trùng HgCl2: Khi - i v i ch t kh trùng H2O2 : Khi kh trùng các th i gian khác nhau v i kh trùng các n ng khác nhau v i cùng n ng là 0,1% có t l s ng c a các cùng th i gian kh trùng là 10 phút thì t m u khác nhau. T l m u s ng, s ch cao l m u s ng khác nhau, t l m u ch t nh t khi kh trùng trong 5 phút t 60%. tăng t l thu n v i n ng kh trùng và t l nhi m l i t l ngh ch v i n ng
Như v y, phương th c kh trùng t t nh t Chúng tôi nghiên c u nh hư ng c a là s d ng HgCl2 0,1% trong th i gian kh m t s ch t i u ti t sinh trư ng n kh trùng là 5 phút cho t l m u s ng cao nh t. năng t o callus t các m u lá sau khi kh trùng. Sau 3 tu n nuôi c y, k t qu ư c th 2. ghiên c u môi trư ng t o callus hoa hi n b ng 2. Violet Châu Phi B ng 2. nh hư ng c a m t s ch t i u hoà sinh trư ng (phytohormon) n quá trình hình thành callus Công th c T l m u t o callus (%) Hình thái callus CT1 59,09 Callus màu tr ng y u, kích thư c nh , x p. CT2 86,36 Callus màu xanh, có kích thư c nh , r n. CT3 60 Callus màu xanh vàng, kích thư c nh , r n CT4 94,45 Callus màu xanh, kích thư c l n, r n CT5 59,09 Callus màu xanh, kích thư c nh , r n CT6 81,8 Callus màu xanh, kích thư c nh , r n. CT7 22,73 Callus màu vàng nâu, kích thư c nh , x p. Ghi chú: CT1: 0 BAP (mg/l) + 0 α − ΝΑΑ (mg/l); CT2: 0,5 BAP (mg/l) + 0 α − ΝΑΑ (mg/l); CT3: 0,5 BAP (mg/l) + 0,5 α − ΝΑΑ (mg/l); CT4: 1,0 BAP (mg/l) + 0 α − ΝΑΑ (mg/l); CT5: 1,0 BAP (mg/l) + 0,5 α − ΝΑΑ (mg/l); CT6: 1,5 BAP (mg/l) + 0 α − ΝΑΑ (mg/l); CT7: 1,5 BAP (mg/l) + 0,5 α − ΝΑΑ (mg/l). Qua k t qu b ng 2 cho th y: thái callus không ư c t t có màu xanh, Các phytohormon có nh hư ng r t tích kích thư c nh , r n. c c n quá trình hình thành callus. Khi c y Khi tăng n ng BAP lên 1,5 mg/l thì c các m u ã kh trùng vào môi trư ng MS 2 công th c (có b sung α − ΝΑΑ và không không b sung ch t i u ti t sinh trư ng thì b sung α - NAA) có t l m u t o callus t l m u t o callus th p t 59,09%, m t gi m xu ng. công th c CT6 là 81,8% và khác hình thái callus không t t. công th c CT7 có b sung 0,5 mg/l Khi c y m u vào môi trư ng có b sung α − ΝΑΑ có 22,73%, hình thái kém hơn, 0,5 mg/l BAP thì t l m u t o callus tăng callus thư ng có màu vàng nâu và nhanh cao, chi m 86,36%, hình thái callus t t nhưng chóng chuy n sang màu nâu en. kích thư c v n nh . Khi b sung c 0,5 mg/l Trong 7 công th c thí nghi m thì CT4 α−ΝΑΑ thì t l m u t o callus gi m i còn (1,0 mg/l BAP, không b sung NAA) là 60%, hình thái callus không ư c t t, callus thích h p nh t t o callus t lá bánh t màu xanh vàng, kích thư c l i nh . cây hoa Violet Châu Phi. Khi tăng n ng BAP lên 1,0 mg/l thì 3. ghiên c u nh hư ng c a BAP t l m u t o callus t 94,45%, hình thái n quá trình tái sinh và nhân nhanh callus t t, callus có màu xanh, kích thư c ch i t callus l i l n và r n. Nhưng khi b sung 0,5 mg/l α−ΝΑΑ thì t l m u t o callus th p, hình
Các callus t o thành ư c chuy n sang ch i tái sinh trung bình cũng t cao nh t là các môi trư ng có n ng BAP khác nhau 10,5 ch i/m u, hình thái ch i t t. 3 công nghiên c u kh năng tái sinh ch i. th c CT3, CT4 ti p t c tăng d n n ng Sau 4 tu n nuôi c y ta thu ư c k t qu BAP thì t l tái sinh gi m d n tương ng th hi n b ng 3. 66,67% và 46,67%. N ng BAP càng tăng thì càng nhi u callus sùi to và r n ch c và B ng 3. nh hư ng c a BAP n quá trình không phát tri n thành ch i rõ ràng, n u tái sinh ch i t callus lâu m t s callus chuy n sang màu nâu en, T l tái sinh S ch i tái sinh trung s lư ng ch i/m u cũng gi m xu ng tương Công th c (%) bình (ch i/m u) ng 7,1 và 4,43 ch i/m u. CT1 73,33 7,73 Như v y, trong 4 công th c thí nghi m CT2 93,33 10,5 tái sinh ch i t callus thì công th c CT2 (b CT3 66,67 7,1 sung 0,3 mg/l BAP) có t l callus tái sinh CT4 46,67 4,43 ch i là cao nh t (93,33%) và t l ch i tái CV(%) 1.6 sinh t trung bình 10,5 ch i/m u c y. Hình LSD0,05 0.2 thái ch i xanh, t t. Ghi chú: CT1: B sung 0,1 mg/l BAP; CT2: B sung 0,3 mg/l BAP; 4. ghiên c u môi trư ng ra r Violet CT3: B sung 0,5 mg/l BAP; Châu Phi CT4: B sung 0,7 mg/l BAP. Trong thí nghi m ra r này chúng tôi s Qua b ng 3 cho th y: CT1 có n ng d ng α− NAA nghiên c u s ra r c a 0,1 mg/l BAP cho t l callus tái sinh ch i ch i in vitro. Sau 4 tu n nuôi c y, chúng tôi 73,33%, s ch i tái sinh trung bình t 7,73 ư c k t qu b ng 4. ch i/m u, hình thái ch i t t. Trong công th c CT2 có n ng 0,3 mg/l BAP cho t l callus tái sinh t cao nh t là 93,33%, s B ng 4. nh hư ng c a α− AA n kh năng ra r c a ch i Violet Công T l ra r S r /cây Chi u dài trung bình Hình thái cây th c (%) (cái) c a r (cm) Cây cao, thân còi, lá hơi nh , xanh nh t, r CT1 100 10,2 0,41 y u, nh , màu tr ng Cây th p, thân hơi còi, lá to, xanh đ m, r CT2 100 23,7 0,53 không đ u, nh , màu tr ng nâu Cây cao, thân m p, lá to màu xanh đ m, r CT3 100 27,2 0,63 đ ng đ u, to, màu nâu Cây cao, thân m p, lá to, xanh đ m, r đ ng CT4 100 37,8 0,65 đ u, to, màu tr ng nâu Cây th p, thân còi, lá nh , xanh đ m, r không CT5 100 19,25 0,45 đ ng đ u, nh y u, màu tr ng
CV(%) 2,5 1,7 LSD0,05 1,3 0,07 Ghi chú: CT1: B sung 0 mg/l NAA CT2: B sung 0,1 mg/l NAA; CT3: B sung 0,2 mg/l NAA; CT4: B sung 0,3 mg/l NAA; CT5: B sung 0,5 mg/l NAA. Qua b ng 4 cho th y: 100% các ch i Như v y, môi trư ng b sung 0,3 mg/l Violet Châu Phi u ra r dù ư c c y α − ΝΑΑ là thích h p nh t cho vi c ra r trong môi trư ng có b sung hay không c a ch i Violet Châu Phi. b sung α−NAA, i u ó ch ng t trong các ch i, auxin n i sinh cũng kích 5. ghiên c u nh hư ng c a các lo i giá thích quá trình t o r c a ch i. Tuy nhiên th n kh năng sinh trư ng và phát khi b sung α−NAA v i các m c n ng tri n, t l s ng c a cây hoa Violet Châu thay i chúng tôi nh n th y n ng Phi 0,3 mg/l thì s lư ng r trung bình ây là giai o n ưa cây con trong nuôi ư c t o ra l n nh t t 37,8 r /cây, so c y t môi trư ng nhân t o ra ngoài môi v i i ch ng là 10,2 r /cây. V dài trư ng t nhiên, chính là chuy n cây s ng và ch t lư ng r thì t công th c i t tr ng thái d dư ng sang tr ng thái s ng ch ng, khi không b sung α − ΝΑΑ n t dư ng và ch u nhi u tác ng c a các khi b sung α − ΝΑΑ 0,1 mg/l - 0,3mg/l y u t môi trư ng t nhiên bi n ng (th i thì dài và ch t lư ng r tăng lên rõ r t. ti t, t ai...). giai o n vư n ươm, Nhưng khi tăng n ng α − ΝΑΑ lên chúng tôi ã ti n hành nghiên c u nh 0,5 mg/l thì dài và ch t lư ng r gi m. hư ng c a các lo i giá th khác nhau n t Tuy nhiên theo quan sát thí nghi m l s ng c a cây con. Các cây con ư c ưa chúng tôi nh n th y các công th c có ra kh i ng nghi m, r a s ch agar bám r b sung α − ΝΑΑ thì các r u có s c và ư c ươm vào 4 lo i giá th . Sau 3 tu n s ng cao hơn so v i các r công th c theo dõi, k t qu theo dõi ư c trình bày i ch ng. b ng 5. B ng 5. nh hư ng c a các lo i giá th n t l s ng c a cây ngoài vư n ươm (sau 4 tu n) Công th c T l s ng (%) Chi u cao cây TB (cm) S lá/cây CT1 76,7 6,08 9,05 CT2 90 6,12 10,3 CT3 100 6,42 10,13 CT4 100 6,53 10,4 CT1: Cát; CT2: D n; CT3: Tr u hun; CT4: Xơ d a. Qua b ng 5 cho th y: Qua 4 tu n u cây các giá th , giá th cát t t l th p theo dõi có s bi n ng v t l s ng c a nh t 76,7%, trên giá th d n t l s ng t
90%. Còn 2 lo i giá th tr u hun và xơ d a Cây tr ng trên giá th xơ d a t chi u cao t 100%. V ch tiêu chi u cao cây và s lá trung bình cao nh t 6,53 cm. không có s sai khác áng k gi a các CT. Sơ qui trình nhân gi ng hoa Violet châu Phi
T¹p chÝ khoa häc vµ c«ng nghÖ n«ng nghiÖp ViÖt Nam IV. K T LU N VÀ §Ò NGHN 1. K t lu n - V t li u ban u là nh ng mNu lá bánh t cây hoa Violet Châu Phi (Saintpaulia), s d ng lo i hóa ch t kh trùng là HgCl2 0,1% v i th i gian kh trùng là 5 phút cho hi u qu kh trùng cao nh t. - Môi trư ng có thành ph n dinh dư ng khoáng cơ b n MS + 7,0 g/l agar + 20 g/l saccaroza + 2 g/l than có b sung 1,0 mg/l BAP là thích h p nh t t o callus t lá cây Violet Châu Phi (Saintpaulia) (T l m u t o callus trên môi trư ng này t 94,45%). - Môi trư ng t i ưu cho tái sinh và nhân nhanh ch i t callus là môi trư ng cơ b n MS + 7,0 g/l agar + 20 g/l saccaroza + 2 g/l than có b sung 0,3 mg/l BAP. - Các ch i in vitro ra r thu n l i nh t trên môi trư ng MS + 7,0 g/l agar + 20 g/l saccaroza + 2 g/l than có b sung 0,3 mg/l α − ΝΑΑ, trong môi trư ng này 100% ch i ra r , s r trung bình là 37,8 (r /ch i) và chi u dài r trung bình 0,65 cm. - Giá th thích h p nh t thích nghi cây in vitro trong giai o n vư n ươm là giá th xơ d a v i t l s ng 100%, chi u cao cây trung bình 3,53 cm và s lá/cây là 9,4 cái sau 1 tu n u theo dõi. 2. ngh Áp d ng quy trình s n xu t cây con gi ng ph c v s n xu t TÀI LI U THAM KH O 1 Tr n Văn Minh, 1996. Công ngh sinh h c th c v t. NXB. Nông nghi p 2 guy n Quang Th ch, guy n Th Lý Anh và c ng s , 2007. Giáo trình sinh h c nông nghi p. NXB. Nông nghi p. 3 Bhojwani S.S and Razdan M.K, 1983. Plant tissue culture, Theory and practice, Elsevirer science publishers, Amterdam 4 Pierik R.L.M., 1987. In vitro culture of higher plant. Martinus nijhoff publishers, Dordrech. The Netherlands. gư i ph n bi n: Tr n Duy Quý 7