Mục tiêu chính của luận án là phân lập, nhận diện, tuyển chọn các dòng vi khuẩn nội sinh và vùng rễ cây mía có khả năng cố định đạm, hòa tan lân có thể sử dụng cho cây mía trồng ở tỉnh Tây Ninh. Mời các bạn cùng tham khảo!
AMBIENT/
Chủ đề:
Nội dung Text: Tóm tắt Luận án Tiến sĩ Vi sinh vật học: Phân lập, tuyển chọn, nhận diện vi khuẩn nội sinh và vi khuẩn vùng rễ cây mía (Saccharum spp L.) trồng trên đất xám tỉnh Tây Ninh
- BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO
TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ
TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ
Chuyên ngành: Vi sinh vật học
Mã ngành: 62 42 01 07
TÊN NCS: HOÀNG MINH TÂM
TÊN LUẬN ÁN TIẾN SĨ
PHÂN LẬP, TUYỂN CHỌN, NHẬN DIỆN
VI KHUẨN NỘI SINH VÀ VI KHUẨN
VÙNG RỄ CÂY MÍA (Saccharum spp L.)
TRỒNG TRÊN ĐẤT XÁM TỈNH TÂY NINH
Cần Thơ, 2021
- CÔNG TRÌNH ĐƯỢC HOÀN THÀNH TẠI
TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ
Người hướng dẫn chính: GS.TS. Cao Ngọc Điệp
Người hướng dẫn phụ: PGS.TS. Nguyễn Bảo Toàn
Luận án được bảo vệ trước hội đồng chấm luận án tiến sĩ cấp Trường
Họp tại: Phòng Bảo Vệ Luận Án Tiến Sĩ, Lầu 2 - Nhà Điều
Hành, Trường Đại Học Cần Thơ.
Vào lúc 14 giờ ngày 20 tháng 11 năm 2020
Phản biện 1: PGS.TS. Nguyễn Hữu Hiệp
Phản biện 2: PGS. TS. Phan Thị Phượng Trang
Phản biện 3: PGS. TS. Phan Thị Phượng Trang
Có thể tìm hiểu luận án tại thư viện:
Trung tâm Học liệu, Trường Đại học Cần Thơ.
Thư viện Quốc gia Việt Nam.
- DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ
1. Hoang M.T. and N.D. Cao, 2017. Isolation and
Identification of Rhizospheric Bacteria in
Sugarcane (Saccharum spp. L.) Cultivated on
Acrisols of Tay Ninh Province, Vietnam.
International Journal of Innovations in
Engineering and Technology (IJIET), 8(2): 323-
335.
2. Hoang M.T. and N.D. Cao, 2017. Isolation and
characterization of endophytic bacteria isolated
from the sugarcane cultivated on acrisols of Tay
Ninh province,Vietnam. International Journal of
Innovations in Engineering and Technology
(IJIET), 8(3): 222-236.
3. Hoang M.T. , N.T. Dang and N.D. Cao, 2020.
Functional and molecular characterization of plant
growth promoting bacteria associated with
sugarcane cultivated in Tay Ninh Province,
Vietnam. GSC Biological and Pharmaceutical
Sciences, 2020, 11(02): 265–277.
1
- CHƯƠNG 1. GIỚI THIỆU
1. Tính cấp thiết của nghiên cứu
Trong công nghiệp sản xuất đường, đường mía hiện
chiếm trên 60% tổng sản lượng đường thô của toàn
thế giới. Ở Việt Nam, cây mía có thể được trồng khắp
cả nước. Trong đó, Tây Ninh là một trong những tỉnh
có diện tích trồng mía lớn của Việt Nam. Phần lớn đất
trồng mía của tỉnh Tây Ninh là đất xám trên nền phù
sa cổ có đặc tính nghèo dinh dưỡng. Để duy trì sản
lượng cao, người trồng mía thường sử dụng một lượng
lớn phân hóa học, đặc biệt là phân đạm. Việc sử dụng
quá nhiều phân hóa học cũng như các chất bảo vệ thực
vật không những làm tăng chi phí sản xuất mà còn gây
bất lợi đối với cây trồng, ảnh hưởng đến hệ sinh thái,
môi trường và sức khỏe con người. Chính vì thế, việc
nghiên cứu, khai thác và ứng dụng các vi khuẩn có lợi,
có khả năng thúc đẩy tăng trưởng thực vật giảm sự lệ
thuộc của sản xuất mía vào phân bón hóa học là cần
thiết. Do vậy, đề tài nghiên cứu thuộc luận án tiến sĩ
“Phân lập, tuyển chọn, nhận diện vi khuẩn nội sinh và
vi khuẩn vùng rễ cây mía (Saccharum spp L.) trồng
trên đất xám tỉnh Tây Ninh” đã được thực hiện nhằm
tìm kiếm những dòng vi khuẩn bản địa có khả năng
bổ sung nguồn dinh dưỡng N và P cho cây mía.
2
- 2. Mục tiêu nghiên cứu
Mục tiêu chính của luận án là phân lập, nhận diện,
tuyển chọn các dòng vi khuẩn nội sinh và vùng rễ cây
mía có khả năng cố định đạm, hòa tan lân có thể sử
dụng cho cây mía trồng ở tỉnh Tây Ninh
3. Phát hiện mới và ý nghĩa của luận án
Luận án đã phân lập được có 422 dòng vi khuẩn có cả
hai khả năng cố định đạm và hoà tan lân. Trong số đó,
36 dòng vi khuẩn có đặc tính tốt đã được định danh
dựa trên trình tự gene 16S rRNA.
Dòng CT4bd (tương đồng 99,76% với Serratia
oryzae) cùng với TPD3b (Tương đồng 96% với
Bacillus subtilis) có hiệu quả thay thế 25% phân hóa
học N và P trên khía cạnh năng suất mía và làm tăng
14% chữ đường khi thử nghiệm trên cây mía trồng ở
quy mô ngoài đồng.
Đặc biệt, dòng vi khuẩn CT4bd nội sinh thân cây mía
được nhận diện như là vi khuẩn Serratia oryzae sp.
nov., một loài mới được phát hiện nội sinh cây lúa
trồng ở Trung Quốc và công bố lần đầu vào năm 2017
bởi Zhang và cộng sự (2017).
3
- CHƯƠNG 2. QUAN TÀI LIỆU
Nhìn chung, đất trồng mía ở tỉnh Tây Ninh là đất xám
bạc màu. Trong đó, đất xám trên phù sa cổ có diện tích
lớn nhất nhưng lại nghèo dinh dưỡng nhất. Hai loại đất
xám còn lại là đất xám có tầng loang lổ gley và đất xám
gley do có sự phân bố ở địa hình trũng, đọng nước nên
hàm lượng mùn và đạm đều đạt mức khá hơn.
Năm 2018, năng suất mía bình quân của tỉnh Tây Ninh
đạt khoảng 77,18 tấn/ha, cao hơn so với năng suất
bình quân của cả nước. Sản lượng mía của tỉnh Tây
Ninh đạt 1.132.011 tấn, chiếm 6,7% của cả nước và
chiếm 62% của Đông Nam Bộ.
Vì phần lớn tài nguyên đất của tỉnh Tây Ninh là đất
xám có dinh dưỡng thấp hoặc mất cân đối, do vậy
trong canh tác nông lâm nghiệp trên đất xám, cần phải
đầu tư phân bón để đạt được năng suất cao.
Việc tăng năng suất dựa trên phân hoá học sẽ làm gia
tăng giá thành sản xuất, giảm năng lực cạnh tranh trong
xuất khẩu, đồng thời gây ra nhiều tác hại cho môi trường
và sức khoẻ con người.
Như vậy, hạn chế cơ bản nhất trong sản xuất mía
đường hiện nay là vấn đề liên quan đến phân bón, đặc
biệt là phân N, P hóa học. Do vậy, đối với mục tiêu
sản xuất đường mía bền vững, Tây Ninh cần thiết phải
cân nhắc các biện pháp tăng cường nghiên cứu và khai
4
- thác ứng dụng của các vi khuẩn thúc đẩy tăng trưởng
thực vật liên kết với cây mía nhằm giảm thiểu giá thành
sản xuất, tăng năng lực cạnh tranh trong xuất khẩu, đồng
thời giảm tác hại cho môi trường và sức khoẻ con người.
Vi khuẩn liên kết thực vật (Plant Associated Bacteria –
PAB) có thể được phân thành 3 nhóm: vi khuẩn đất
vùng rễ, vi khuẩn biểu sinh rễ và vi khuẩn nội sinh tùy
theo vị trí cư trú; hoặc được chia làm 2 nhóm: PAB gây
bệnh và PAB có lợi tùy theo tác động của chúng lên
vật chủ. Đối với nhóm PAB có lợi, lợi ích chủ yếu của
chúng là khả năng thúc đẩy sự tăng trưởng của cây chủ.
Các vi khuẩn thúc đẩy tăng trưởng thực vật (Plant
Growth Promoting Bacteria - PGPB) còn có thể được
chia ra thành một nhóm nhỏ hơn, gọi là “PGPB-kiểm
soát sinh học”, bao gồm các lợi khuẩn có khả năng làm
tăng cường sự khỏe mạnh của cây. Khi các PGPB sống
trong vùng rễ cây, chúng được gọi tên là “vi khuẩn
vùng rễ thúc đẩy tăng trưởng thực vật” (Plant Growth
Promoting Rhizobacteria - PGPR)
Cơ chế thúc đẩy sự tăng trưởng thực vật có thể tóm tắt
theo sơ đồ sau:
5
- Hình 2.1: Sơ đồ về các cơ chế thúc đẩy tăng trưởng thực
vật của vi khuẩn (Gupta et al., 2015)
Vi khuẩn liên kết với cây mía, rất đa dạng, được phân
lập từ vùng rễ, kẽ gian bào hay nội mô của các cây
mía trồng tại nhiều nước trên thế giới. Các vi khuẩn
này thuộc các chi: Azospirillum, Azotobacter,
Herbaspirillum, Bacillus, Burkholderia,
Pseudomonas, Rhizobium, Gluconacetobacter…
Hiện nay, ngày càng có nhiều công bố mới về vi khuẩn
thúc đẩy tăng trưởng thực vật liên kết với cây mía trồng
tại các nước trên thế giới và trong khu vực như Trung
Quốc, Thái Lan, nhưng hầu hết các công bố này đều
không nêu rõ thành phần đất thu mẫu hoặc thực nghiệm.
Về tình hình nghiên cứu cơ bản trên vi khuẩn liên kết cây
mía trồng trên đất xám, có một số công bố liên quan đến
chủ đề, chủ yếu đến từ Brazil và Việt Nam. Các vi khuẩn
thúc đẩy tăng trưởng thực vật liên kết với cây mía trồng
trên đất xám ở Brazil phổ biến thuộc các chi Pantoea,
Burkholderia, Pseudomonas, Enterobacter, Klebsiella.
6
- Kết quả phân tích mật số của nghiên cứu trên cho thấy số
lượng vi khuẩn trong đất vùng rễ cao gấp 20 lần so với
bên trong rễ. Mật số vi khuẩn nội sinh rễ cao hơn hàng
nghìn lần so với vi khuẩn nội sinh thân. Ở Việt Nam, kết
quả hai nghiên cứu phân lập vi khuẩn cố định đạm hòa
tan lân ở đất xám vùng Đồng Nai cho thấy các vi khuẩn
này thuộc các chi: Bacillus, Sphingomonas, Raoultella,
Achromobacter và Klebsiella.
Phương pháp nghiên cứu vi khuẩn liên kết (vi khuẩn
nội sinh và vi khuẩn vùng rễ) cây mía bao gồm phương
pháp phân lập, xác định đặc tính và nhận diện. Tùy vào
sự tương tác và mức độ tương tác của vi khuẩn với cây
chủ mà có phương pháp xử lý mẫu khác nhau. Môi
trường phân lập và đánh giá khả năng cố định đạm đối
với các vi khuẩn cố định đạm là môi trường lỏng, bán
đặc hay đặc không chứa nitrogen như NFb và JNFb,
LGI và LGI-P, JMV, Baz và Bac, Burk’s. Môi trường
phân đánh giá khả năng hòa tan lân của vi khuẩn cố
định đạm là môi trường chứa phosphate không tan
như Pikovskaya, NBRIP, NBRIP-BPB, GELP. Xác
định khả năng kích thích tăng trưởng thực vật của vi
khuẩn thông qua định lượng hàm lượng N, IAA và
P2O5 được tạo ra trong môi trường nuôi cấy bằng
phương pháp quang phổ so màu. Nhận diện vi khuẩn
cố định đạm, hòa tan lân bằng phương pháp truyền
thống như nhuộm Gram, quan sát hình thái kết hợp
7
- phương pháp sinh học phân tử sử dụng marker gene
16SRNA.
Nghiên cứu về hiệu quả thúc đẩy tăng trưởng thực vật
của các vi khuẩn liên kết trên cây mía chủ yếu ở ba
hình thức: (1) sử dụng vi khuẩn được phân lập từ cây
mía chủng trở lại cho cây mía, (2) sử dụng vi khuẩn
được phân lập từ cây trồng khác để chủng cho cây
mía, (3) sử dụng vi khuẩn được phân lập từ cây mía
để chủng cho cây trồng khác. Tuy nhiên, phần này chỉ
lược khảo tài liệu liên quan đến hình thức (1) và (2).
Kết quả của các thử nghiệm này cho thấy, vi khuẩn sử
được dụng riêng lẻ hay kết hợp có khả năng kích thích
tăng trưởng, kháng bệnh, tăng trọng lượng tươi, trọng
lượng khô, tăng năng suất ở cây mía, giảm đáng kể
lượng phân hóa học sử dụng trong sản xuất mía. Tác
động của các vi khuẩn thúc đẩy tăng trưởng thực vật
được cho rằng có hiệu quả tốt nhất khi sử dụng vi
khuẩn được phân lập từ cây mía chủng trở lại cho cây
mía trồng trên đất bản địa. Đối tượng được chủng vi
khuẩn là hom mía hoặc cây mía con in vitro. Quy mô
thử nghiệm là mía được trồng trong nhà lưới, trong
chậu và ngoài đồng.
8
- CHƯƠNG 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
3.1 Thu thập, xử lý và chuẩn bị mẫu
Nguyên tắc và phương pháp thu thập xử lý mẫu đất và
mẫu cây mía dựa theo sự hướng dẫn của “Sổ tay phân tích
đất, nước, phân bón, cây trồng” (Viện Thổ nhưỡng Nông
Hóa, 1998), TCVN 7538 - 2:2005 của Bộ Khoa học
và Công nghệ Việt Nam và Cao Ngọc Điệp, 2011.
Theo đó, có tổng cộng 135 mẫu cây mía và đất bao
quanh rễ đã được thu thập từ 41 ruộng mía trồng trên
đất xám thuộc 7 huyện cuả tỉnh Tây Ninh. Cây mía
đang ở giai đoạn tăng trưởng mạnh, khoảng 6 tháng
tuổi, sinh trưởng tốt, không sâu bệnh. Mười sáu mẫu
đất sau khảo nghiệm hiệu quả thúc đẩy tăng trưởng cấy
mía trồng ngoài đồng tương ứng với 16 nghiệm thức khác
nhau về thành phần phân bón và vi khuẩn bổ sung cũng
được thu thập.
3.2. Phân tích một số chỉ tiêu dinh dưỡng của đất
Các chỉ tiêu phân tích và phương pháp sử dụng bao gồm:
pHH2O, chất hữu cơ tổng số được phân tích theo phương
pháp Walkley-Black, đạm tổng số đươc phân tích
phương pháp Kjendahl), và lân dễ tiêu được chiết rút theo
phương pháp Bray 2 (Viện thổ nhưỡng nông hóa, 1998).
3.3. Xác định mật số vi khuẩn cố định đạm, hoà tan
lân trong đất vùng rễ cây mía và sự tương quan với
các chỉ tiêu dinh dưỡng đất
9
- Mật số vi khuẩn được xác định thực hiện theo phương
pháp đếm sống nhỏ giọt (Drop Plate Counts) do
Hoben và Somasegaran (1982) đề xuất và được mô tả
bởi Cao Ngọc Điệp (2011).
Tương quan và hồi quy tuyến tính đơn (Simple Linear
Regression Analysis) giữa mật số vi khuẩn cố định
đạm, mật số vi khuẩn hòa tan lân với các chỉ tiêu dinh
dưỡng đất được thực hiện nhờ Microsoft excel 2010.
3.4. Phân lập và bảo quản các dòng vi khuẩn có
khả năng cố định đạm và hòa tan lân từ đất vùng
rễ cây mía
Phương pháp phân lập theo mô tả của Cao Ngọc Điệp,
2011. Chuẩn bị dịch khuẩn từ mẫu đất vùng rễ thu
được (phần 3.1). Môi trường phân lập vi khuẩn có hai
khả năng cố định đạm và hòa tan lân là Burk’s không
N và hoặc NBRIP. Phương pháp phân lập là cấy ria.
Các dòng vi khuẩn phát triển trên môi trường Burk’s
và NBRIP có hai khả năng cố định đạm và hòa tan lân.
Mỗi dòng thuần được lưu trữ theo phương pháp được
mô tả bởi Nguyễn Đức Lượng và cộng sự, 2003; Trần
Linh Thước và cộng sự, 2001).
3.5. Phân lập và bảo quản các dòng vi khuẩn có khả
năng cố định đạm và hòa tan lân nội sinh trong cây mía
Phương pháp phân lập theo mô tả của Cao Ngọc Điệp,
2011. Khử trùng bề mặt bằng cồn 700 theo sau bởi
calcium hypochloride 2,5%. Kiểm tra hiệu quả khử
10
- trùng mẫu bằng cách trải nước rửa mẫu cuối (spread plate
method) trên đĩa thạch chứa môi trrường TYGA
(trypton-yeast extract - glucose - agar). Dịch chiết ly trích
từ mô mía và được chủng vào môi trường LGI không
đạm bán đặc. Dùng que cấy lấy một vòng dịch trong lớp
màng mỏng này và cấy ria sang đĩa Petri chứa môi trường
LGI đặc. Các khuẩn lạc được cấy chuyền cho đến khi
thuần. Cấy chuyền các dòng thuần thu được sang đĩa môi
trường NBRIP đặc cho mục đích chọn dòng có khả năng
hòa tan lân.
Mỗi dòng thuần được lưu trữ theo phương pháp được
mô tả bởi Nguyễn Đức Lượng và cộng sự, (2003);
Trần Linh Thước và cộng sự, (2001).
3.6. Mô tả hình thái khuẩn lạc và đặc điểm tế bào
của các dòng vi khuẩn thu được
Hình thái khuẩn lạc được xác định bao gồm: kích
thước, màu sắc, hình dạng, độ nổi, dạng bìa. Hình dạng
tế bào và khả năng chuyển động của vi khuẩn được xác
định bằng phương pháp giọt ép dưới kính hiển vi quang
học ở độ phóng đại 400 – 1.000 lần (Cao Ngọc Điệp,
2011).
Phương pháp nhuộm Gram được thực hiện trên mẫu
vi khuẩn qua nuôi cấy trong vòng 24 giờ theo mô tả
của Nguyễn Đức Lượng và cộng sự, (2003).
11
- Chụp ảnh hiển vi điện tử quét (Scanning Electron
Microscopes - SEM) và nhuộm Gram vi khuẩn được
thực hiện giới hạn trong các dòng có đặc tính tốt.
3.7. Định lượng khả năng cố định đạm, hòa tan lân và
sản xuất IAA in vitro của các dòng vi khuẩn thu được
Nuôi cấy vi khuẩn phân lập được trên môi trường
Burk lỏng không đạm cho mục đích định lượng NH4+
và IAA, và môi trường NBRIP lỏng cho nuôi mục
đích định lượng phosphate hoà tan (Cao Ngọc Điệp,
2011). Dịch khuẩn được thu sau mỗi 2 ngày nuôi cấy
cho định lượng NH4+ va IAA và sau mỗi 5 ngày nuôi
cấy cho định lượng phosphate hòa tan bằng phương
pháp so màu quang phổ ở các bước sóng 640 nm đối
với NH4+, 882 nm đối với IAA và 530 nm đối với P2O5
tương ứng (Gordon and Weber, 1951; Murphy and
Riley, 1962; Solarzano, 1969).
3.8. Định tính khả năng sản xuất siderophore của
một số dòng vi khuẩn
Thí nghiệm này được giới hạn ở các dòng vi khuẩn có
kết quả định lượng NH4+, P2O5 và IAA tốt. Thuốc thử
được dùng để kiểm tra sự có mặt của siderophore là
Chrome Azurol Sulfonate (CAS) do Schwyn và
Neilands, 1987 đề xuất. Quy trình thực hiện được mô
tả bởi Chaitanya et al., 2014.
3.9. Định danh một số dòng vi khuẩn có đặc tính
tốt bằng phương pháp sinh học phân tử
12
- Từ kết quả khảo sát các khả năng thúc đẩy tăng trưởng
thực vật in vitro của các vi khuẩn đất vùng rễ và vi
khuẩn nội sinh cây mía những dòng nổi trội được chọn
để giải trình tự gene 16S rRNA và định danh.
Phần thí nghiệm này bao gồm các kỹ thuật sinh học
phân tử như tách chiết DNA, PCR với cặp mồi 8F và
1492R đối với khuẩn đất vùng rễ, với cặp mồi p515FPL
và p13B đối với vi khuẩn nội sinh, và giải trình tự gene
16S RNA bằng phương pháp Sanger bởi công ty First
BASE Laboratories Sdn Bhd (Malaysia). Các công cụ
tin sinh học đã sử dụng cho việc xác định tên loài và
xây dựng cây phả hệ (phylogeny tree) gồm có
BLASTn (nucleotide BLAST) của NCBI và phần
mềm MEGA X (Molecular Evolution Genetics
Analysis Ver. X).
3.10. Đánh giá khả năng thúc đẩy tăng trưởng thực
vật của các vi khuẩn vùng rễ và vi khuẩn nội sinh
trên cây mía con trồng trong điều kiện nhà lưới
Vật liệu thí nghiệm là các cây mía con in vitro thuộc
giống VN85-1859 đã được tạo ra bằng phương pháp
nhân giống vô tính từ đỉnh sinh trưởng (Ramanand et
al., 2007; Ramanand and Lal, 2004).
Các dòng PGPB là các dòng có khả năng cố định đạm,
hòa tan lân và sinh IAA tốt sau khi định danh. Mật số
tế bào đạt 1,5x108 tế bào/mL, tương đương chuẩn
13
- McFarland 0,5 (Ventorino et al., 2016) sau để chủng
cho các cây mía con sạch khuẩn nêu trên.
Phương pháp chủng cây mía con in vitro với dịch
khuẩn được mô tả bởi Reis et al., (1999). Các cây mía
sau khi chủng vi khuẩn được trồng trong bình Leonard
có sẳn 300 mL dung dịch nuôi cây là môi trường MS
1/10.
Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu
nhiên. Mỗi nghiệm thức lặp lại 3 lần. Các bình trồng
cây được đặt trong nhà lưới, bình cách bình 5 cm. Chế
độ chiếu sáng tự nhiên.
Các chỉ tiêu đánh giá hiệu quả thúc đẩy tăng trưởng
thực vật của vi khuẩn lên cây mía con trồng trong điều
kiện nhà lưới bao gồm: số lá, chiều cao cây, chiều dài
rễ, khối lượng tươi và khối lượng khô. Số liệu được
thu thập vào 90 ngày sau khi trồng.
Các số liệu định lượng được kiểm định thống kê và
trắc nghiệm phân hạng bằng phần mềm SPSS 20.0 với
độ tin cậy 95%.
3.11. Đánh giá khả năng thúc đẩy tăng trưởng thực
vật của các vi khuẩn vùng rễ và vi khuẩn nội sinh
trên cây mía trồng trong chậu và ngoài đồng
Vật liệu xuất phát của cả 2 thí nghiệm trong chậu và
ngoài đồng đều là hom của cây mía giống K95-156.
14
- Vi khuẩn được sử dụng để chủng cho mía là 2 dòng vi
khuẩn cho kết quả tốt nhất trên sự tăng trưởng của cây
mía ở thí nghiệm 3.10. Dịch vi khuẩn được chuẩn bị
như phần 3,10.
Phương pháp chủng hom mía với dịch khuẩn theo mô
tả của Cruz et al., (2012).
Áp dụng 5 mức bón phân đạm và lân cho thí nghiệm
trồng cây trong chậu. (F0): không N và không P; (F1):
25% N và 25% P; (F2): 50% N và 50% P; (F3): 75%
N và 75% P; (F4) 100% N và 100% P. Trong thí
nghiệm ngoài đồng, có 4 mức phân bón N và P được
áp dụng, kế thừa kết quả của thí nghiệm trong chậu.
Mức phân bón được sử dụng theo khuyến cáo của
Trung tâm Nghiên cứu Ứng dụng Mía đường Thành
Thành Công, cho mia trồng trên đất xám.
Đối với thí nghiệm trong chậu, hom mía sau khi chủng
dịch khuẩn và hom đối chứng (không chủng vi khuẩn)
được trồng vào trong các chậu nhựa có kích thước 40
x 30 x 20 cm3 chứa sẵn 20 dm3 đất lấy từ khu khu thí
nghiệm C1-TSX thuộc Trung tâm này. Các chậu cây
được bố trí theo kiểu lô chính phụ (Split-Plot Design)
(Gomez and Gomez, 1984) (Hình 3.1).
15
- (F0): không N và không P; (F1): 25% N và 25% P;
(F2): 50% N và 50% P; (F3): 75% N và 75% P; (F4)
100% N và 100% P. (B0): không chủng vi khuẩn;
(B1): vi khuẩn nội sinh; (B2): vi khuẩn vùng rễ; (B3):
tổ hợp vi khuẩn nội sinh và vi khuẩn vùng rễ.
Hình 3.1: Sơ đồ bố trí thí nghiệm trồng mía trong chậu
theo kiểu lô chính phụ
Các chậu được đặt tại khu thí nghiệm C1-TSX thuộc
Trung tâm. Kết quả thúc đẩy tăng trưởng thực vật của
các vi khuẩn trên cây mía trồng trong chậu đã được
đánh giá khi sau 180 ngày trồng. Các chỉ tiêu đánh giá
bao gồm: số lóng, chiều cao thân, đường kính thân
(cm), năng suất mía (tấn/ha), độ Brix, chữ đường
(CCS %) và năng suất đường (tấn/ha).
Thí nghiệm ngoài đồng cũng được bố trí theo kiểu lô
chính phụ, với 4 lần lặp (Hình 3.2). Yếu tố phân bón
giảm còn 4 mức: (F0): không N và không P; (F1):
50% N và 50% P; (F2): 75% N và 75% P; (F3): 100%
N và 100% P, ứng với 4 lô chính. Diện tích mỗi lô phụ
16
- (ô thí nghiệm) là 42 m2; bên trong có 2 hàng mía. Mỗi
hàng dài 15m và cách nhau 1,5 m. Rạch hàng sâu
khoảng 30 cm.
(F0): không N và không P; (F1): 50% N và 50% P; (F2):
75% N và 75% P; (F3): 100% N và 100% P.(B0): không
chủng vi khuẩn; (B1): vi khuẩn nội sinh; (B2): vi khuẩn vùng
rễ; (B3): tổ hợp vi khuẩn nội sinh và vi khuẩn vùng rễ.
Hình 3. 2: Sơ đồ bố trí thí nghiệm trồng mía ngoài đồng
theo kiểu lô phụ
Kết quả thúc đẩy tăng trưởng thực vật của các vi
khuẩn trên cây mía trồng ngoài đồng đã được đánh giá
sau 12 tháng trồng. Các tiêu chí đánh giá: số lóng,
chiều cao thân (cm), năng suất mía thực tế (tấn/ha), độ
Brix (%), chữ lượng đường (CCS %) và năng suất
đường (tấn/ha).
Số liệu định lượng được kiểm định thống kê và trắc
nghiệm phân hạng theo phương pháp LSD áp dụng
17
Thêm vào BST
Báo xấu
Download
Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ
