Biệt hóa tế bào gốc trung mô từ mô mỡ thành tế bào tiết insulin để ứng dụng điều trị bệnh tháo đường type 2

Nghiên cứu Y học<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Số 2 * 2014<br /> <br /> BIỆT HÓA TẾ BÀO GỐC TRUNG MÔ TỪ MÔ MỠ THÀNH TẾ BÀO<br /> TIẾT INSULIN ĐỂ ỨNG DỤNG ĐIỀU TRỊ BỆNH THÁO ĐƯỜNG TYPE 2<br /> Trần Đặng Xuân Tùng*, Đặng Vạn Phước**, Lê Thị Bích Phượng*, Phạm Văn Phúc***<br /> <br /> TÓM TẮT<br /> Mục tiêu: nghiên cứu này nhằm phân lập, nuôi cấy, tăng sinh và biệt hóa tế bào gốc (TBG) từ mô mỡ thành<br /> tế bào tiết insulin giống tế bào beta.<br /> Đối tượng và phương pháp: mô mỡ được thu nhận từ người tình nguyện. Sau đó, tế bào gốc từ mô mỡ<br /> được phân tách bằng bộ kit ADSC extraction kit và nuôi cấy trong môi trường MSCult kit để làm giàu tế bào gốc<br /> ứng viên. Các tế bào gốc này được khẳng định các đặc điểm của tế bào gốc trung mô bằng cách xác định các<br /> marker bề mặt. Cuối cùng tế bào gốc được biệt hóa thành tế bào tiết insulin trong môi trường chuyên biệt bổ sung<br /> các chất nicotinamide, exendin-4, B27.<br /> Kết quả: qui trình này là thu nhận được 1,01 x 106 tế bào trong 1 gram mỡ , trong đó có 78,3 ± 5,7% tế bào<br /> sống và tỷ lệ tế bào gốc là 7,15 ± 2,22%, qui trình biệt hóa thành công tế bào gốc này thành tế bào tiết insulin.<br /> Kết luận: số lượng tế bào gốc thu được đủ dùng trong các nghiên cứu và nhân lên ứng dụng trong điều trị,<br /> qui trình biệt hóa tế bào gốc thành tế bào tiết insulin là hoàn toàn khả thi.<br /> Từ khóa: Tế bào gốc, tế bào gốc từ mô mỡ, tế bào tiết insulin, biệt hóa.<br /> <br /> ABSTRACT<br /> DIFFERENTIATION THE ADIPOSE DEVIRED STEM CELL TO INSULINE PRODUCING CELL<br /> FOR DIABETTES MELLITUS TREATMENT<br /> Tran Dang Xuan Tung, Dang Van Phuoc, Le Thi Bich Phuong, Pham Van Phuc<br /> * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 18 - No 2 - 2014: 50 - 54<br /> Purposes: This research is carried out in order to subdivide, culture, multiple and differentiate adipose<br /> derived stem cell (ADSC) to insulin producing cells, which similar to beta cells.<br /> Subjects and Methods: Adipose tissue was obtained from healthy volunteer. Adipose derived cells is<br /> isolated by ADSC extraction kit and cultured in MSCult kit to enrich stem cell candidate. These cells are<br /> identified as stem cells by defining surface markers following the definition of Mesenchymal stem cells. Finally,<br /> ADSC is differentiated to insulin producing cells in specific medium supplemented with nicotinamide, exendin-4,<br /> B27.<br /> Results: we can obtain1,01 x 106 cells in 1 gram of adipose tissue with stem cell percentage be 7,15± 2,22%,<br /> it is 78,3 ± 5,7% life cells and 7,15 ± 2,22% stem cells. ADSC is differentiated successfully to Insulin producing<br /> cells.<br /> Conclusion: the quality of stem cell have been derived, that is enough for research and culture to clinical<br /> treatment. The process for differentiation stem cell to insulin producing cell is realizable.<br /> Key words: stem cell, adipose devised stem cell (ADSC), insulin producing cell, differentiation<br /> đối của cơ thể. Đặc trưng của bệnh là tình trạng<br /> GIỚI THIỆU<br /> đường huyết tăng cao, kèm theo đó là các rối loạn<br /> Đái tháo đường là một bệnh mãn tính, gây ra<br /> quan trọng chuyển hóa carbohydrate, protein,<br /> do tình trạng thiếu insulin tuyệt đối hoặc tương<br /> lipid và chất khoáng. Các rối loạn này sẽ dẫn đến<br /> * *Bệnh viện đa khoa Vạn Hạnh<br /> **Đại Học Y Dược TpHCM ***Đại Học Khoa Học Tự Nhiên TpHCM<br /> Tác giả liên lạc: ThS. Trần Đặng Xuân Tùng<br /> ĐT: 0903120280<br /> Email: dr_xuantung@yahoo.com<br /> <br /> 50<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Số 2 * 2014<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> <br /> nhiều biến chứng cấp tính và mạn tính.<br /> <br /> HCV thông qua các xét nghiệm PCR. Lượng mỡ<br /> <br /> Nhằm ngăn ngừa các biến chứng cũng như tử<br /> vong từ bệnh đái tháo đường, bệnh nhân cần<br /> phải kiểm soát đường huyết chặt chẽ tùy theo<br /> mục tiêu của từng đối tượng. Khi những tiềm<br /> năng to lớn của tế bào gốc được khám phá, nó<br /> mang lại hi vọng sử dụng tế bào gốc như một<br /> phương pháp điều trị hứa hẹn cho bệnh nhân đái<br /> tháo đường. Trong vòng hai thập niên qua, nhiều<br /> nghiên cứu về liệu pháp tế bào gốc trong điều trị<br /> bệnh đái tháo đường được tiến hành. Các nghiên<br /> cứu này đã điều trị được nguyên nhân gây bệnh<br /> và mang lại kết quả ổn định lâu dài(3,8).<br /> <br /> thu nhận tối thiểu 100ml (kể cả chất gây tê).<br /> <br /> Tại Việt Nam, nhiều tác giả đã thành công<br /> trong việc biệt hóa tế bào gốc thu nhận từ máu<br /> cuống rốn hoặc tủy xương thành tế bào tiết<br /> insulin và đã thử nghiệm thành công trên mô<br /> hình động vật(7). Tuy nhiên, những phương pháp<br /> này còn có những hạn chế nhất định như tính<br /> xâm lấn trong việc thu nhận tế bào gốc từ tủy<br /> xương hay người bệnh không có nguồn lưu trữ<br /> máu cuống rốn hay dây rốn… Do đó, việc phát<br /> hiện ra tế bào gốc từ mô mỡ đã mở ra một tương<br /> lai mới trong việc ứng dụng tế bào gốc trong điều<br /> trị đái tháo đường do những ưu điểm: mô mỡ dễ<br /> phân tách, thủ thuật thu nhận ít xâm lấn(9).<br /> Với những kết quả trên, chúng tôi tiến hành<br /> nghiên cứu này nhằm (1) xây dựng quy trình thu<br /> nhận tế bào gốc trung mô từ mô mỡ, (2) biệt hóa<br /> tế bào gốc trung mô từ mô mỡ thành tế bào tiết<br /> insulin, (3) đánh giá chất lượng tế bào đã biệt hóa<br /> để ứng dụng vào điều trị bệnh đái tháo đường<br /> type 2, đồng thời là những thử nghiệm cơ bản với<br /> các số liệu ban đầu mang tính chất tham khảo<br /> cho các nghiên cứu lớn sau này.<br /> <br /> VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP<br /> Phương pháp nghiên cứu: In vitro<br /> <br /> Sinh phẩm nghiên cứu<br /> Mô mỡ của người tình nguyện được lấy tại<br /> Bệnh viện Đa khoa Vạn Hạnh TP.Hồ Chí Minh.<br /> <br /> Tiêu chuẩn chọn mẫu<br /> Mô mỡ có kết quả âm tính với HIV, HBV,<br /> <br /> Tiêu chuẩn loại mẫu<br /> Mô mỡ được lấy ở những người tình nguyện<br /> có bệnh lý gây viêm hoặc có dấu hiệu nhiễm<br /> trùng vùng lấy mẫu.<br /> Các quy trình và thao tác được thực hiện tại<br /> Phòng thí nghiệm nghiên cứu và ứng dụng Tế<br /> bào gốc và Phòng thí nghiệm Phân tích trung<br /> tâm, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên TP.Hồ<br /> Chí Minh.<br /> Qui trình nghiên cứu gồm các giai đoạn sau:<br /> Thu nhận mỡ.<br /> Thu nhận SVF và nuôi cấy TBG từ mô mỡ.<br /> Định lượng, định danh TBG sau phân tách.<br /> Biệt hóa tế bào gốc thành tế bào tiết insulin.<br /> Kiểm tra sự nhiễm khuẩn, nhiễm nấm và bộ<br /> NST của tế bào tiết insulin.<br /> Đánh giá sự biệt hóa thành tế bào tiết insulin.<br /> Giai đoạn 1: Thu nhận mỡ bụng<br /> Bệnh nhân được gây mê mask thanh quản<br /> phối hợp tê tại chỗ bằng lidocaine. Thu mỡ dưới<br /> da của vùng bụng dưới rốn, hút đều hai bên đối<br /> xứng qua đường trắng giữa bụng. Bơm vào mô<br /> mỡ 100ml nước muối sinh lí với hỗn hợp nồng độ<br /> Lidocain 1% và adrenaline 1/1000000. Hút mỡ<br /> bằng tay nhẹ nhàng tránh tổn thương các tế bào.<br /> Số lượng hút là 100ml hỗn hợp mô mỡ và nước<br /> muối sinh lý trên 1 tình nguyện viên.<br /> Giai đoạn 2: Thu nhận phân đoạn mạch nền<br /> (SVF) và nuôi cấy tế bào gốc từ mô mỡ:<br /> Bước 1: Xử lí sơ bộ mẫu.<br /> Bước 2: Rửa mẫu bằng Washing buffer 1.<br /> Bước 3: Lặp lại bước 2.<br /> Bước 4: Rửa mẫu bằng Washing buffer 2.<br /> Bước 5: Lặp lại bước 4.<br /> Bước 6: Phân tách mẫu.<br /> Bước 7: Thu nhận tế bào.<br /> Bước 8: Rửa tế bào.<br /> Bước 9: Sử dụng hay nuôi cấy tế bào.<br /> <br /> 51<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Số 2 * 2014<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> Huyền phù cặn trong môi trường<br /> DMEM/F12 10% FBS nuôi ở điều kiện 370C, 5%<br /> CO2.<br /> Thay môi trường 3 ngày/lần đến khi tế bào<br /> phát triển 70% bề mặt flask và cấy chuyền dùng<br /> hóa chất trypsin 0,25%.<br /> <br /> Giai đoạn 3: Định lượng, định danh tế bào gốc<br /> sau phân tách:<br /> Tế bào gốc có trong mẫu được phân tích<br /> bằng kĩ thuật flow cytometry trên máy FACS<br /> calibur (BD Bioscience) theo hướng dẫn của của<br /> nhà sản xuất.<br /> Tế bào gốc trung mô phải có kết quả về các<br /> marker như sau:<br /> (+) với các marker CD13, CD44, CD73,<br /> CD90, CD105.<br /> (-) với các marker CD14, CD34, CD45,<br /> HLA-DR.<br /> Giai đoạn 4: Biệt hóa tế bào gốc thành tế bào<br /> tiết Insulin<br /> Bước 1: Tế bào nuôi tăng sinh trong MSCCult<br /> được tách bằng trypsin/EDTA 0,25% cấy vào đĩa<br /> 6 giếng, mỗi giếng 100.000 tế bào. Nuôi tế bào<br /> trong môi trường IPC-M1 trong 5-7 ngày ở 370 C,<br /> với chế độ thay môi trường 3 ngày/lần.<br /> Bước 2: Thay môi trường nuôi tế bào thành<br /> IPC-M2 nuôi trong 7 ngày.<br /> Bước 3: Thay môi trường nuôi tế bào thành<br /> IPC-M3. Tiếp tục nuôi như bước 1, trong 3<br /> ngày. Sau đó tách tế bào bằng trypsin/EDTA<br /> 0,25% rồi nuôi lại trong cùng giếng của đĩa. Tế<br /> bào này được tiếp tục nuôi trong 4-5 ngày.<br /> Tất cả môi trường trên được cung cấp bởi<br /> công ty GeneWorld, HCM, VN.<br /> Giai đoạn 5: Đánh giá sự nhiễm khuẩn, nhiễm<br /> nấm và bộ NST của tế bào tiết insulin: bằng<br /> các tiêu chí sau:<br /> Bảng 1. Tiêu chuẩn đánh giá chất lượng TBG<br /> Tiêu chí<br /> Nhiễm vi khuẩn<br /> Nhiễm nấm<br /> Nhiễm sắc thể (NST)đồ<br /> <br /> 52<br /> <br /> Phương pháp phát hiện<br /> Cấy khuẩn trên đĩa petri<br /> Cấy nấm trên đĩa petri<br /> Tiến hành NST đồ<br /> <br /> Giai đoạn 6: Đánh giá sự biệt hóa tế bào tiết<br /> insulin:<br /> Tiến hành chạy Realtime RT-PCR. Với các<br /> Gen: Pdx-1, Ngn3, Insulin.<br /> Dùng phương pháp 2-∆∆Ct của Livak để định<br /> lượng biểu hiện của gen nghiên cứu và gen tham<br /> chiếu (GAPDH).<br /> Dùng phương pháp nhuộm Dithizone<br /> (DTZ) để nhận biết sự tiết insulin trong các tiểu<br /> đảo tụy của tuyến tụy hay các cụm tế bào giống<br /> tiểu đảo tụy.<br /> Đánh giá khả năng tiết insulin của tế bào sau<br /> khi biệt hóa phụ thuộc vào nồng độ glucose trong<br /> môi trường nuôi. Cho tế bào vào 2 giếng A và B<br /> có môi trường IPC-M3 với nồng độ glucose lần<br /> lượt là 5.5mmol/L và 23mmol/L. Ủ tế bào trong<br /> điều kiện nuôi 24 giờ. Sau đó, định lượng sự hiện<br /> diện của insulin trong dịch nuôi tế bào bằng kĩ<br /> thuật HPLC.<br /> Phân tích thống kê<br /> Nghiên cứu được thực hiện trên 7 mẫu. Số<br /> liệu nghiên cứu được xử lí bằng phần mềm Excel<br /> 2010 với độ tin cậy 95%.<br /> <br /> KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN<br /> Tế bào gốc trung mô được thu nhận từ mô<br /> mỡ, tăng sinh in vitro và biểu hiện các marker<br /> đặc trưng sau vài lần cấy chuyền<br /> Chúng tôi đã thành công với tỷ lệ 100% (7/7)<br /> trong việc tác chiết SVF từ mô mỡ. Tổng số tế bào<br /> thu nhận được là 1.0126 ± 0.0933 × 106 tế bào, tỷ lệ<br /> sống đạt 78,3 ± 5,7% (n=7). Sử dụng kĩ thuật flow<br /> cytometry với các marker đặc trưng cho tế bào<br /> gốc trung mô, kết quả đánh giá cho thấy cho<br /> 7,12± 2,22% tế bào phân đoạn SVF là tế bào gốc<br /> trung mô. Số lượng này đủ để dùng trong các<br /> nghiên cứu và nhân lên ứng dụng trong điều trị.<br /> Bảng 2: Kết quả định lượng tế bào SVF và tế bào gốc<br /> trong mô mỡ của các lần thí nghiệm<br /> Tế bào có nhân Tế bào/gam (x Phần trăm tế Phần trăm<br /> 6<br /> 6<br /> SVF (x 10 )<br /> 10 )<br /> bào sống (%) TBG (%)<br /> 103,6<br /> 1,036<br /> 78<br /> 7,123<br /> 82,4<br /> 0,97<br /> 82<br /> 9,562<br /> 72,8<br /> 1,103<br /> 70<br /> 9,457<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Số 2 * 2014<br /> Tế bào có nhân Tế bào/gam (x Phần trăm tế Phần trăm<br /> 6<br /> 6<br /> SVF (x 10 )<br /> 10 )<br /> bào sống (%) TBG (%)<br /> 45,2<br /> 1,0511<br /> 74<br /> 7,983<br /> 65<br /> 0,8228<br /> 77<br /> 6,786<br /> 89,8<br /> 1,0322<br /> 69<br /> 5,994<br /> 98,8<br /> 1,0739<br /> 84<br /> 3,124<br /> Mean<br /> 1,0126<br /> 78,2857<br /> 7,147<br /> SD<br /> 0,0933<br /> 5,6779<br /> 2,2178<br /> <br /> Kết quả này là tương đương với các nghiên<br /> cứu khác trên thế giới(1). SVF đã được chứng minh<br /> có chứa đến 3% là tế bào gốc trong tổng số tế bào,<br /> gấp 2.500 lần so với tần số tế bào gốc trong tuỷ<br /> xương ngươzi(4). Như vậy SVF là nguồn tế bào gốc<br /> phong phú, an toàn và hiệu quả hiện nay.<br /> Kết quả nuôi cấy ADSC<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> khi nuôi cấy<br /> Theo kết quả trên chúng tôi đã bước đầu<br /> chứng minh khả năng tách triết được ADSC<br /> trong mô mỡ của tình nguyện viên.<br /> <br /> Biệt hóa thành công tế bào gốc trung mô từ<br /> mô mỡ thành tế bào tiết insulin<br /> Sau 12 ngày biệt hóa, có sự co cụm và rút<br /> ngắn của tế bào dồn chúng lại trong một vị trí<br /> hình thành một nhóm tế bào ngày càng nén chặt.<br /> Từ đó một số cụm tế bào giống đảo tụy bắt đầu<br /> xuất hiện vào khoảng ngày thứ 14.<br /> Khi nhuộm với dithizone, 100% cụm tế bào<br /> giống đảo tụy này bắt màu đỏ với thuốc nhuộm.<br /> <br /> Sau 7 ngày nuôi, các tế bào tăng sinh mạnh<br /> và bắt đầu hợp dòng. Khi tế bào chiếm 70-80%<br /> diện tích bề mặt nuôi, tiến hành cấy chuyền theo<br /> tỷ lệ 1:3. Tốc độ phát triển của tế bào tương đối<br /> như nhau giữa các lần cấy chuyền và cao hơn<br /> trong nuôi cấy sơ cấp.<br /> <br /> Hình 2. Các tế bào sau khi co cụm lại thành tụy đảo<br /> bắt màu với thuốc nhuộm Dithizone (20x)<br /> Các tế bào được kiểm tra các gen chuyên biệt<br /> ở tế bào β tụy đảo so với tế bào chưa biệt hóa (đối<br /> chứng), được bình thường hóa bằng gen đối<br /> chứng nội GAPDH theo công thức của Lavik.<br /> Hình 1. Tế bào ứng viên gốc trung mô có hình thoi,<br /> trải dài trên bề mặt nuôi cấy (20x)<br /> Các tế bào gốc trung mô ứng viên biểu hiện<br /> các marker của tế bào gốc trung mô.<br /> <br /> Biểu đồ 1: Kết quả biểu hiện marker của tế bào sau<br /> <br /> Bảng 2. Mức độ biểu hiện Gen chuyên biệt của tế bào<br /> β tụy đảo<br /> Gen<br /> Insulin<br /> Pdx-1<br /> Ngn-3<br /> <br /> Mẫu<br /> 552<br /> 2702<br /> 1640<br /> <br /> GAPDH<br /> 97<br /> 487<br /> 6<br /> <br /> 13<br /> 15<br /> 4<br /> <br /> Kết quả đánh giá sự tiết insulin bằng kỹ thuật<br /> HPLC ở 7 lô thí nghiệm đạt 100% dương tính với<br /> insulin. Điều này chứng tỏ các tế bào sau khi biệt<br /> hóa thành công không những có khả năng biểu<br /> hiện các gen liên quan đến kiểu hình tế bào β tụy<br /> đảo mà còn có khả năng dịch mã thành công<br /> insulin và tiết ra ngoài. Insulin là sản phẩm cuối<br /> cùng trong suốt quá trình chuyển biệt hóa của tế<br /> bào gốc trung mô thành tế bào tiết insulin. Sự<br /> <br /> 53<br /> <br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Số 2 * 2014<br /> <br /> Nghiên cứu Y học<br /> xuất hiện insulin được phát hiện bằng HPLC<br /> chứng tỏ chúng tôi đã biệt hóa thành công tế bào<br /> gốc trung mô từ mô mỡ thành tế bào tiết insulin.<br /> Để đánh giá tính toàn vẹn về tính năng của<br /> một tế bào β tụy đảo, chúng tôi tiến hành đánh<br /> giá khả năng tiết insulin phụ thuộc vào nồng độ<br /> đường kích thích. Kết quả là 6/6 (tỷ lệ 100%) mẫu<br /> tế bào biệt hóa có khả năng đáp ứng tốt với lượng<br /> đường. Cụ thể, lượng đường cao hơn thì lượng<br /> insulin tiết ra nhiều hơn.<br /> Bảng 3. Mức dộ đáp ứng tiết Insuline theo nồng độ<br /> đường.<br /> Mẫu 1<br /> Mẫu 2<br /> Mẩu 3<br /> Mẫu 4<br /> Mẫu 5<br /> Mẫu 6<br /> <br /> Nồng độ 5 mmol/l<br /> 91,4 ng/ml<br /> 210,7 ng/ml<br /> 560 ng/ml<br /> 310 ng/ml<br /> 790 ng/ml<br /> 430 ng/ml<br /> <br /> Nồng độ 23 mmol/l<br /> 166,6 ng/ml<br /> 417,9 ng/ml<br /> 650 ng/ml<br /> 410 ng/ml<br /> 930 ng/ml<br /> 460 ng/ml<br /> <br /> Trong kết quả nghiên cứu của Kim và cộng<br /> (5)<br /> sự , họ cho răzng chỉ có tế bào gốc ở màng xương<br /> mới có khả năng biệt hóa thành tế bào tiết insulin<br /> mà đáp ứng được với lượng đươzng. Tuy nhiên<br /> kết quả của nhiều nhóm nghiên cứu khác lại cho<br /> thấy tế bào tiết insulin biệt hóa tưz mô mỡ có khả<br /> năng đáp ứng với lượng đươzng, kết quả này<br /> tương đương với nghiên cứu của Chardar(2),<br /> Mohamad Buang(6). Kết quả nghiên cứu của<br /> chúng tôi cho thấy sự sản xuất Insulin của tế bào<br /> gốc trung mô tưz mô mỡ sau khi biệt hóa thành tế<br /> bào tiết insulin có khả năng được điều hòa bởi sự<br /> thay đổi của nồng độ glucose.<br /> <br /> Tế bào sau khi biệt hóa có chất lượng tốt<br /> Các tế bào sao khi biệt hóa không phát hiện<br /> nhiễm nấm hay vi khuẩn khi quan sát dưới kính<br /> hiển vi. Kết quả nhuộm G-banding cho thấy bộ<br /> NST của tế bào ổn định về số lượng và cấu trúc<br /> sau nhiều lần cấy chuyền và biệt hóa thành tế bào<br /> tiết insulin. 100% (3/3) mẫu tế bào được lấy ngẫu<br /> nhiên đều không quan sát thấy đột biến NST.<br /> <br /> 54<br /> <br /> KẾT LUẬN<br /> Qua nghiên cứu này, chúng tôi bước đầu xây<br /> dựng qui trình thu nhận tế bào gốc trung mô từ<br /> mô mỡ, đồng thời chứng minh khả năng biệt hóa<br /> của ADSC thành thế bào tiết insuline. Các tế bào<br /> sau khi biệt hóa đều có khả năng tiết insuline và<br /> đều có khả năng thay đổi nồng độ insuline tiết ra<br /> theo nồng độ đường.<br /> <br /> TÀI LIỆU THAM KHẢO<br /> 1.<br /> <br /> 2.<br /> <br /> 3.<br /> <br /> 4.<br /> <br /> 5.<br /> <br /> 6.<br /> <br /> 7.<br /> <br /> 8.<br /> <br /> 9.<br /> <br /> Arakawa M, Ebato C, Mita T, Hirose T, Kawamori R, Fujitani<br /> Y, Watada H (2009), "Effects of exendin-4 on glucose<br /> tolerance, insulin secretion, and beta-cell proliferation depend<br /> on treatment dose, treatment duration and meal contents",<br /> Biochem Biophys Res Commun, 390(3), p. 809-814<br /> Chandra V, Muthyala S, Jaiswal AK, Bellare JR, Nair PD,<br /> Bhonde RR (2011), "Islet-like cell aggregates generated from<br /> human adipose tissue derived stem cells ameliorate<br /> experimental diabetes in mice", PLoS One, 6(6) p. 20615<br /> Figlinzzi M et al. (2009), "Bone marrow derived mesenchymal<br /> stem cells improve islet graft function in diabetic rats",<br /> Transplant Proceeding, 41(5) p. 1797-1800<br /> Gronthos S, F.D., Leddy HA, Robey PG, Storms RW, Gimble<br /> JM (2001), "Surface protein characterization of human adipose<br /> tissue-derived stromal cells", J Cell Physiol, 189, p.54-63.<br /> Kim SJ, Ko ES, Lim SM, Lee CW, Kim DI (2012), "Glucosestimulated insulin secretion of various mesenchymal stem<br /> cells after insulin-producing cell differentiation", J Biosci<br /> Bioeng, 113(6) p. 771-777.<br /> Mohamad Buang ML, S.H., Chung LH, Saim AB, Idrus RB<br /> (2012), "In vitro generation of functional insulin-producing<br /> cells from lipoaspirated human adipose tissue-derived stem<br /> cells", Arch Med Res, 43(1) p. 83-88.<br /> Phan Kim Ngọc, Dương Thanh Thủy, Phạm Lê Bửu Trúc,<br /> Phạm V…n Phúc (2010), "So sánh hiệu quả điều trị bệnh đái<br /> tháo đường bằng cách cấy ghép tế bào gốc trung mô tủy<br /> xương và tế bào tiết insulin trên mô hình chuột", Hội nghị khoa<br /> học Công nghệ sinh học: khu vực miền trung và tây nguyên.<br /> Phạm Lê Bửu Trúc, Dương Thanh Thủy, Phạm V…n Phúc,<br /> Phan Kim Ngọc (2009), "Đánh giá hiệu quả điều trị bệnh đái<br /> tháo đường bằng cách ghép tế bào tiết insulin trên mô hình<br /> chuột", Hội nghị công nghệ sinh học toàn quốc khu vực phía Nam,<br /> p. 23-24.<br /> Trần Thị Như Mai, Vương Gia Tuệ, Khổng Hiệp, Phạm V…n<br /> Phúc, Phan Kim Ngọc (2008), "Thu nhận và biệt hóa tế bào<br /> gốc trung mô từ mô mỡ người", Hội nghị khoa học lần thứ 6:<br /> Trường Đại học Khoa học Tự nhiên.<br /> <br /> Ngày nhận bài báo:<br /> Ngày phản biện đánh giá bài báo:<br /> Ngày bài báo được đăng:<br /> <br /> 28/02/2014<br /> 10/03/2014<br /> 20/03/2014<br /> <br />