Đề tài "Tìm hiểu đặc tính phân tử Salmonella enterica serovar typhi" trình bày nội dung gồm các phần sau: tổng quan, vật liệu và phương pháp, kết quả, bàn luận, kết luận. Mời các bạn cùng tham khảo để nắm nội dung kiến thức cụ thể được trình bày trong bài thuyết trình này.
AMBIENT/
Chủ đề:
Nội dung Text: Đề tài: Tìm hiểu đặc tính phân tử Salmonella enterica serovar typhi
- LOGO BỘ CÔNG THƯƠNG
TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP HCM
KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM
GVHD: PHAN THỊ KIM LIÊN
SVTH: Lớp 02DHLTP4
NGUYỄN THỊ KIM LIÊN: 2205112012
LÝ MINH TUẤN: 2205112205
VÕ MINH QUỐC: 2205112212
TẠ THỊ VUI: 2205112214
- 1 TỔNG QUAN
2 VẬT LIỆU&PHƯƠNG PHÁP
3G KẾT QUẢ
4 BÀN LUẬN
5 KẾT LUẬN
5 5
- TỔNG QUAN
MỤC ĐÍCH
+Salmonella enterica serovar Typhi là 1 trong những
nguyên nhân gián tiếp gây bệnh sốt thương hàn cho
loài người trên phạm vi toàn cầu.
+Công việc nghiên cứu này được thực hiện nhằm khám
phá đặc điểm phân tử của Salmonella enterica serovar
Typhi được phân lập từ người sốt thương hàn bằng
phương pháp hóa sinh, sinh học và phát hiện gien độc
hại dựa vào kỹ thuật phản ứng chuỗi polymerase
(PCR).
- TỔNG QUAN
+Việc phân lập chuyên sâu cũng khám phá ra loại thuốc
kháng sinh nhạy với khuôn như là một tiêu chuẩn để
đánh giá trong việc quản lý.
- TỔNG QUAN
PHƯƠNG PHÁP & KẾT QUẢ
+Có tổng số 16 mẫu bệnh phẩm được thu nhận từ số
người bệnh như nhau (7 nam và 9 nữ) từ các quận
Coimbatore, Erode, Salem của Tamil Nadu và được
xử lý bằng cách cho S.enterica serovar Typhi phát
triển trên môi trường via dể nhận diện và phân lập.
+Các nghiên cứu vi sinh và hóa sinh đã phát hiện sự
hiện diện của S.Typhi từ 16 mẫu bệnh phẩm.
- TỔNG QUAN
+Các biotype của các mẫu phân lập cho thấy tất cả
đều thuộc biotype IV.
+Phân tích PCR đã xác nhận sự có mặt của invA (gien
xâm chiếm, 244bp), tyv (gien đồng tâm lập thể,
615bp), fliC-d (gien tiên mao thực khuẩn 1 sinh
kháng thể d, 750bp) và viaB (gien kháng thể Vi,
439bp) trong tất cả 16 mẫu bệnh phẩm.
- TỔNG QUAN
+Việc thử nghiệm thuốc kháng sinh nhạy cảm cũng
được tiến hành tương phản riêng biệt giữa 12 tác nhân
chống vi khuẩn, cho thấy 100% ampicillin có sức đề
kháng tốt nhất, 100% carbenicillin, chloramphenicol,
clindamycin, gentamycin, kanamycin và tetracycline có
độ nhạy tốt nhất.
- TỔNG QUAN
KẾT LUẬN, Ý NGHĨA VÀ TÁC ĐỘNG
CỦA NGHIÊN CỨU
+Việc nghiên cứu đã xác nhận có sự liên hệ giữa
giống S. enterica serovar Typhi từ bệnh sốt thương
hàn với con người và cho rằng phương pháp chẩn
đoán PCR sẽ mang lại nhiều lợi ích trong việc
nhận diện nhanh các mẫu phân lập S.Typhi
+Nghiên cứu cũng nhấn mạnh việc sử dụng thuốc
kháng sinh như chloramphenicol hoặc kết hợp các
loại thuốc kháng sinh khác nhau sẽ mang lại hiệu
quả hơn trong việc chế ngự S.Typhi.
- VẬT LIỆU&PHƯƠNG PHÁP
THU THẬP MẪU
+16 mẫu máu của bệnh nhân (7 nam và 9 nữ từ các
bệnh viện và các phòng khám khác nhau ở các
quận Coimbatore, Erode, Salem của Tamil Nadu,
Ấn Độ) được thu thập trong trong suốt tháng 1 và
tháng 2 phải được vô trùng trước khi điều trị bằng
kháng sinh.
+Các mẫu máu được vận chuyển trong thùng đá
lạnh và được xử lý ngay lập tức để nghiên cứu.
+Các dữ liệu của mỗi bệnh nhân cũng được gửi đi.
- VẬT LIỆU&PHƯƠNG PHÁP
PHÂN LẬP&NHẬN DẠNG
+Cho 3÷5ml máu vào 30ml nước thịt pha với dịch tim
óc (tỷ lệ tối thiểu huyết và nước thịt phải được duy
trì với tỉ lệ 1:10)
+Máu sau khi cấy vào nước thịt sẽ được ủ ở 370C
trong 7 ngày
+Tất cả các ống nghiệm đều được kiểm tra hằng
ngày và nếu quan sát thấy có sự phát triển của vi
sinh vật thì cấy sang môi trường XLD trong đĩa petri
và ủ tiếp ở 370C trong 24 giờ.
- VẬT LIỆU&PHƯƠNG PHÁP
+Nhóm vi khuẩn được chọn lọc căn cứ vào kích cỡ,
hình dạng, màu sắc trên thạch XLD và sự tan máu
trên thạch máu và phải bắt màu Gram.
+Vi sinh vật phân lập được nhận dạng dựa vào tiêu
chuẩn xét nghiệm hóa sinh như: thử nghiệm tính di
động, khả năng sử dụng citrate, thử nghiệm methyl
red và VP, sinh khí H2S, khả năng lên men mannitol,
arabinose, sorbitol, dulcitol, lactose, sucrose, glucose.
- VẬT LIỆU&PHƯƠNG PHÁP
CHỦNG PHÂN LẬP
+Việc phân lập nhằm thử nghiệm khả năng lên men
L-arabinose và xylose.
+Các giống S.Typhi có thể được phân loại như sau:
byotypes I (arabinose-, xylose+), II ( arabinose-,
xylose-), III ( arabinose+, xylose+) và IV
( arabinose+, xylose-).
- VẬT LIỆU&PHƯƠNG PHÁP
MÁY QUÉT ĐIỆN TỬ
+Các vi khuẩn được cho phân lập trên đĩa thạch dinh
dưỡng, sẽ được cố định bằng chất hãm màu
Karnovsky (pH 7.3) và được ủ ở 4oC trong 4 giờ.
+Mẫu được rửa 2 lần bằng dung dịch đệm Sodium
Cocodylate 0,1M (pH 7.4); mỗi lần rửa ở 40C trong
15 giây, mỗi dung dịch rửa được ổn định trong 12 giờ
ở 40C, khử nước từ 30÷100% ở nhóm acetone, mỗi
lần khử trong 15 giây ở 4oC.
+Các mẫu được làm khô bằng dung dịch tetra methyl
silane trong 15 giây ở 4oC và bao kín không khí khô
trong 15 giây.
- VẬT LIỆU&PHƯƠNG PHÁP
+Các mẫu được cho vào khung nhôm, mẫu sẽ bám
vào và phủ lớp carbon trong 5 giây, và được máy
quét điện tử phân tích bằng tia polaron.
- VẬT LIỆU&PHƯƠNG PHÁP
PHÁT HIỆN GIEN ĐỘC BẰNG
PHƯƠNG PHÁP PCR
+Gien độc của vi sinh vật được nghiên cứu bằng cách
phát hiện gien xâm chiếm (invA), gien tiên mao
thực khuẩn 1 của kháng nguyên d (fliC-d), gien
đồng tâm lập thể tyvelose (tyv) và gien kháng
nguyên Vi (viaB) bằng phương pháp PCR.
+Gien invA được phát hiện bằng gien đơn PCR,
ngược lại nhiều thành phần PCR được sử dụng để
phát hiện fliC-d, tyv và gien viaB.
- VẬT LIỆU&PHƯƠNG PHÁP
+Các gien xuôi và gien ngược luôn đi đôi với nhau
như gien invA của 244bp là 5’-
acagtgctcgttacgacctgaat-3’ và 5’-
agacgactggtactgatcgataat-3’; các gien fliC-d của
750bp là 5’-aatcaacaacaacctgcagcg-3’ và 5’-
gcatagccaccatcaataacc-3’; gien tyv của 615bp là 5’-
gaggaagggaaatgaagctttt-3’ và 5’-
tagcaaactgtctcccaccatac-3’ và gien viaB của 439bp là
5’gttatttcagcataaggag-3’ và 5’-cttccataccactttccg-3’
bằng cách tổng hợp thương mại.
- VẬT LIỆU&PHƯƠNG PHÁP
+S. enterica serovar Typhi (MTCC 733) và Aeromonas
hydrophila (MTCC 646) được dùng để nhận biết
dương tính hay âm tính.
+ Cho vi sinh vật phát triển trong 200µl nước cất vô
trùng trong 1 ống ly tâm nhỏ, sẽ được ly tâm nhẹ và
đun sôi 10 giây trong bể nước.
+Các vi sinh vật sẽ xuất hiện trên bề mặt sau khi ly
tâm ở 10000rpm trong 5 giây và sẽ được dùng như là
1 mẫu DNA.
- VẬT LIỆU&PHƯƠNG PHÁP
+Khuếch đại 25µl của 2 hỗn hợp PCR chứa 4mM
MgCl2 + 0,4mM dNTPs + 0,5U Taq DNA polymerase
+ 150mM tris HCl, pH 8,5 + 1µM mồi đặc hiệu (tyv-
F, tyv-R, fliC-d-F và fliC-d-R) và 0,2µM mồi đặc
hiệu (viaB-F và viaB-Lane P: đối chứng khẳng định
(S. enterica serovar Typhi MTCC 733)) và 2,5µl mẫu
DNA .
+Các phản ứng PCR sẽ được thực hiện trong một chu
kỳ nhiệt.
+Gien invA sau khi được biến tính ban đầu ở 94oC
trong 4 giây sẽ được khuếch đại trong 1 chu kỳ gồm
các bước: biến tính ở 94oC trong 30 giây, lai ở 56oC
trong 30 giây, tổng hợp ở 72oC trong 2 giây.
- VẬT LIỆU&PHƯƠNG PHÁP
+Đối với gien fliC-d, tyv và viaB, sau khi được biến tính
ban đầu ở 95oC trong 4 giây thì được khuếch đại
trong 1 chu kỳ gồm các bước: biến tính ở 95oC trong
30 giây, lai ở 55oC trong 60 giây, tổng hợp ở 72oC
trong 90 giây.
+Cuối cùng là tổng hợp ở 72oC trong 10 giây.
+Mẫu sản phẩm PCR (5µl) được điện di trên gel
agarose 1,5% trong dung dịch đệm TAE (Tris-acetic
acid-EDTA, pH 8) bị đổi màu bởi dung dịch ethidium
bromide và được quan sát bằng máy gel doc system.
Thêm vào BST
Báo xấu
Download
Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ
