zunia.vn

Tuyển sinh 2024 dành cho Gen-Z

zunia.vn

» Khoa Học Tự Nhiên

Giáo trình thực tập vi sinh cở sở part 6

Chia sẻ: Afsjkja Sahfhgk | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:10

Báo xấu

111
lượt xem 30
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Trong sinh học, nhiều phân tử, khái niệm, quá trình có tính phổ biến và tổng quát chung cho tất cả các dạng sống. Ví dụ, mọi dạng sống đều có cấu tạo tế bào, và các tế bào đều được cấu thành từ các phân tử hữu cơ giống nhau. Tất cả các sinh vật đều truyền thông tin di truyền của mình thông qua các vật liệu di truyền mà được cấu tạo từ phân tử nucleic acid (đa số là phân tử DNA (xem hình) chứa đựng mã di truyền thống nhất trên toàn bộ sinh giới...

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Giáo trình thực tập vi sinh cở sở part 6

Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only. Th c t p vi sinh cơ s - Trư ng Đ i h c M Tp. HCM Nguy n Văn Minh phân bi t v ikhu n là thu c lo i G ram[+] hay Gram [-]. Do s khác bi t v c u trúc vách t bào nên trong quá trình nhu m G ram, vi khu n Gram [+] s gi đư c ph c h p tím Gentian-iode không b t y màu b i alcool, trong khi vi khu n Gram [-] không gi đ ư c p h c h p màu này, do v y k t qu sau khi nhu m là vi khu n G ram [+] v n gi đư c màu tím c a gentian, còn vi khu n G ram [-] ă n màu h ng c a p h m màu safranin hay fuchsin. Ø Thao tác: - Đ t tiêu b n đã ph t kính và c đ nh m u lên thanh th y tinh ch U, trên thau nh a. - Đ t mi ng gi y l c lên vòng ph t kính. - Nh dd Crystal violet th m ư t h t gi y l c. Đ t 1 – 2 phút ( n u vi khu n l y t canh l ng đ 2 phút, l y t th ch dinh dư ng đ 1 phút ). R a nư c, th m khô. - T y c n 96o t 1 5 – 30 giây ( t canh l ng t y 15 giây, t th ch dinh dư ng t y 30 giây ). R a nư c, th m khô. T y c n b n g cách đ nghiêng tiêu b n, cho c n ch y t t m ép trên phi n kính. Quan sát mép dư i cho đ n khi gi t c n v a m t màu tím. - Đ t mi ng gi y l c lên v t khu n, nh d ung d ch Fuschin ki m loãng (ho c Safranin O), đ 1 phút. R a nư c, th m khô. - Quan sát b ng v t kính d u, đ phóng đ i 1.000 l n. Vi khu n Gr+ b t màu tím Crystal violet, vi khu n G r– b t màu h ng Fuschin(Safranin O). C hú ý: - Trư c m i l n nh thu c nhu m lên tiêu b n, ph i đ t mi ng gi y l c ph lên v t bôi. - Sau m i l n nhu m đ u ph i r a nư c và th m khô tiêu b n. 51
Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only. Th c t p vi sinh cơ s - Trư ng Đ i h c M Tp. HCM Nguy n Văn Minh Hình 23: Sơ đ th t nhu m G ram Ø Đ c k t qu : - Quan sát ph t nhu m Gram qua kính hi n vi, dư i v t kính d u, chúng ta s th y vi khu n G ram[+] ăn màu tím, còn vi khu n Gram[-] ăn màu h ng. - K hi tr l i m t k t q u nhu m G ram, ph i tr l i các chi ti t sau: + Hình dáng vi khu n. + Cách s p x p các vi khu n. + Cách ăn m àu c a vi khu n, t c là vi khu n Gram [+] hay Gram [-]. 2/ Phương pháp nhu m Ziehl – Neelsen: Dùng phân bi t vi khu n Lao v i các vi khu n khác: 52
Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only. Th c t p vi sinh cơ s - Trư ng Đ i h c M Tp. HCM Nguy n Văn Minh Ø Nguyên t c: Do t bào vi khu n kháng acid có l p v sáp bao b c nên khi đã nhu m đư c ph c h p màu carbolfuchsin, ph c h p này s không b t y màu b i dung d ch t y màu m nh (acid, alcool acid). Tuy nhiên đ ph c h p màu này có th th m xuyên qua l p v sáp c a vi khu n, có hai cách: (1) Đun nóng ph t nhu m v i dung d ch màu carbolfuchin, nh đó mà carbolfuchsin th m qua lpv sáp c a vi khu n đ nhu m màu vi khu n; đây là phương pháp nhu m nóng Ziehl Neelsen. (2) Phương p háp th hai là phương pháp nhu m l nh còn g i là phương pháp Kinyoun, trong phương pháp này ngư i ta dùng dung d ch carbolfuchsin đ m đ c, nh v y khi ph d ung d ch màu đ m đ c này lên ph t nhu m v i th i gian lâu, carbolfuchsin v n có th th m qua l p v sáp đ nhu m màu vi khu n. Ø Thao tác: - Đ t tiêu b n đã ph t kính và c đ nh m u lên thanh th y tinh ch U, đ t trên thau nh a. - Đ t mi ng gi y l c lên vòng ph t kính. - N h dung d ch Fuschin đ m đ c th m ư t h t gi y l c, hơ nóng liên t c t 5 – 7 phút. - Trong khi hơ ph i nh b sung thu c nhu m liên t c đ gi y l c luôn th m ư t. - R a nư c, th m khô. - T y c n – acid đ n khi không còn màu h ng c a Fuschin đ m đ c (kho ng 30 giây). - R a nư c, th m khô. - Q uan sát b ng v t kính d u, đ phóng đ i 1.000 l n. - V i khu n lao b t màu h ng Fuschin, vi khu n khác b t màu xanh methylen. 53
Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only. Th c t p vi sinh cơ s - Trư ng Đ i h c M Tp. HCM Nguy n Văn Minh C hú ý: Trư c m i l n nh thu c nhu m lên tiêu b n, ph i đ t mi ng gi y l c ph lên v t bôi. Sau m i l n nhu m đ u ph i r a nư c và th m khô. Trong khi hơ nóng: dung d ch nhu m không đư c sôi, thu c nhu m ph i luôn th m ư t gi y, không đư c khô. Không đư c nh m lãn gi a c n – acid ( nhu m Ziehl Neelsen ) và c n 96o (dùng nhu m Gram). Ø Đ c k t qu : - Quan sát ph t nhu m kháng acid qua kính hi n vi, dư i v t kính d u, tr c k hu n kháng acid ăn màu đ cánh sen, c òn vi - Khu n thư ng cũng như các n n khác như t bào bi u mô hay b ch c u ăn màu xanh methylene blue. - Khi tr l i m t k t qu nhu m kháng acid, không đư c k t lu n là dương tính M. Tuberculosis mà ch tr l i có hi n di n tr c khu n kháng acid. 3/ Nhu m bào t : M t s vi khu n như Bacillus hay Clostridium có kh năng t o thành bào t . Bào t có th t n t i trong môi trư ng thi u ch t dinh dư ng, ch u đư c nhi t và m t s các hóa ch t mà th sinh dư ng không th . K hác v i bào t n m s i (hay n m m c), bào t vi khu n (nha bào ) không ph i là cơ quan sinh s n và thư ng có hai d ng: hình c u và hình b u d c. Khi t bào vi khu n s ng trong môi trư ng không thích h p cho s sinh trư ng và phát tri n, do thi u ch t d inh dư ng hay đ m th p, thì bào t đư c hình thành. Nhưng khi môi trư ng tr 54
Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only. Th c t p vi sinh cơ s - Trư ng Đ i h c M Tp. HCM Nguy n Văn Minh nên thích h p thì bào t l i h i sinh và t bào l i có th ti p t c phân chia. Bào t r t khó nhu m b i đa s các thu c nhu m do màng bào t d ày, ch c, khó b t màu và ch a nhi u lipid. Vì th , c n thi t p h i có nh ng phương pháp nhu m đ c bi t đ i v i bào t . Tuy nhiên, đ i v i b t kì phương pháp nào thì t bào trư c h t đư c x lý b ng nhi t hay/ và acid đ t bào ch t bào t d b t màu. Sau đó, nhu m c t bào ch t c a bào t và t b ào v i thu c nhu m có tính ho t nhu m m nh r i t y màu c a t bào ch t đ i và nhu m nó v i m t thu c nhu m phân bi t khác. Khi đó, t bào ch t s mang m t màu, và bào t s mang màu khác. Đ ôi khi b ào t đ ư c nhìn th y bên trong t b ào. Hình thái c a b ào t còn giúp nh n d i n vi khu n. Hình dáng và kích thư c bào t p h thu c vào v trí c a nó trong t bào và kích thư c b ngang c a t bào mang nó. Bào t thư ng n m trong t bào sinh dư ng ba v trí khác nhau: n u n m tâm t bào thì đ ư c g i là bào t ki u Bacillus, n u n m l ch tâm – ki u Clostridium và n u n m c c t b ào thì g i là bào t ki u Plectidium. m t s gi ng vi khu n khác, các bào t có th t n t i t do b i vì các t bào xung quanh nó đ ã tan rã. V t li u và d ng c : - G i ng vi khu n Bacillus cereus trên môi trư ng th ch nghiêng 30oC. dinh dư ng đã trong 3 – 4 ngày đ n 2 tu n - Thu c nhu m: 1 trong 3 cách 3. L c malachite và thu c nhu m safranin. 4. Fuschin, HCl 0.5%, H2SO4 1 %, và xanh methylene ( Loeffler). 5. Xanh methylene và đ trung tính. - G iá nhu m và phi n ph t kính nhu m - C c beesse và b p đun. 55
Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only. Th c t p vi sinh cơ s - Trư ng Đ i h c M Tp. HCM Nguy n Văn Minh Cách ti n hành: a. V i thu c nhu m l c malachite và thu c nhu m safranin 1- Ch n b v t bôi trên phi n kính s ch và hơ nóng nh . 2- Thêm 1 ít nư c vào c c beesse và đun sôi. 3- Đ t giá nhu m lên c c beesse r i đ t phi n kính lên nó. 4- Đ t nh m u gi y th m (nh hơn ph n kính m t chút) lên trên phi n kính.M u gi y này s giúp gi thu c nhu m l i trên phi n kính. 5- Ph phi n kính v i thu c nhu m l c malachite và hơ hơi nư c trong vòng 5 phút. Ti p t c thêm thu c nhu m đ tránh tình tr ng thu c nhu m b khô trên phi n kính. 6- K h màu v i nư c trong 30 giây b ng cách cho nư c ch y lên phi n kính. Các t bào sinh dư ng s b m t màu, còn bào t s gi màu l i. 7- N hu m l i v i safranin trong 30 giây r i r a l i v i nư c trong 30 giây n a. Th m khô c n th n. 8- Q uan sát dư i kính hi n vi v i v t kính đâu (x100). Bào t s có màu xanh còn t bào sinh dư ng s có màu h ng. Ghi l i k t qu . Lưu ý: K hi nhu m Gram, các bào t không b nhu m nên t bào trông gi ng có các l bên trong. b. V i thu c nhu m Fuschin, HCl 0.5, H2SO 4 1% và xanh methylene 1- Làm v t bôi trên m t phi n kính s ch và đ khô t nhiên. 2- N h vài gi t HCl 0.5% lên v t bôi, hơ nóng trên ng n l a đèn c n cho b c hơi trong 2 phút r i r a v i nư c. 3- N hu m v t bôi v i thu c nhu m Fuschin, qua mi ng gi y l c, hơ nóng cho đ n khi b c hơi trong vòng 5 phút. 4- R a v t bôi b ng nư c 56
Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only. Th c t p vi sinh cơ s - Trư ng Đ i h c M Tp. HCM Nguy n Văn Minh 5- T y màu b ng dung d ch H2SO4 1 % trong 2 phút. 6- R a v t bôi b ng nư c. 7- N hu m v t bôi b ng xanh methylene trong 5 – 15 phút. 8- R a l i v i nư c và đ khô t nhiên. 9- Q uan sát dư i kính hi n vi v i v t kính d u ( x100). Bào t s có màu xanh còn t bào sinh dư ng s có màu xanh. Ghi l i k t qu . c. V i thu c nhu m Xanh methylene và đ trung tính: 1- Làm v t bôi trên m t phi n kính s ch. 2- C đ nh tiêu b n trên ng n l a đèn c n. 3- N hu m xanh methylene trong 1 phút có hơ nóng t b ên dư i 4- R a v t bôi b ng nư c cho đ n khi h t màu. 5- N hu m v i đ trung tính 0.5% trong 1 phút. 6- R a l i b ng nư c, đ khô. 7- Q uan sát dư i kính hi n vi v i v t kính d u ( x100 ).Bào t s có màu xanh còn t b ào sinh dư ng s có màu đ . G hi l i k t qu . III/ TH C HÀNH. Sinh viên th c hành làm các tiêu b n: - G i t ép, gi t treo. - N hu m gram vi khu n đư c phòng thí nghi m chu n b . - N hu m Kháng acid t vaccine BCG. - N hu m bào t vi khu n Bacillus subtilis (malachite và thu c nhu m safranin) IV/ BÁO CÁO. Sinh viên báo cáo cách ti n hành và k t qu nhu m 57
Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only. Th c t p vi sinh cơ s - Trư ng Đ i h c M Tp. HCM Nguy n Văn Minh Bài 7, 8: CÁC Đ C TÍNH SINH HÓA C A V I SINH V T Mu n đ nh danh vi sinh v t, ta c n xác đ nh m t s đ c đi m sinh hóa c a chúng. Các đ c đi m này bi u hi n s trao đ i ch t c a vi sinh v t, th hi n qua s chuy n hóa các thành ph n đã bi t c a môi trư ng dinh dư ng dùng nuôi c y vi sinh v t (ch y u là ho t đ ng c a enzyme ). Ph m vi chương trình c a môn h c này ch gi i thi u sơ lư c và t ng quát m t s ph n ng sinh hóa cơ b n. I. XÁC Đ N H KH NĂNG S D NG CÁC CH T HYDRAT CARBON: Các vi sinh v t đư c đ c trưng b ng kh năng s d ng khác nhau ngu n hydrat carbon đ làm ngu n năng lư ng. 1. Kh năng lên men đư ng. Thư ng s d ng các lo i đư ng Glucose, Lactose, Galactose, Frutose, Saccharose, Maltose, Rhamnose, và m t s rư u như Glycerin, Mannit,… Ø Cơ ch : Các acid + VSV CO2 Đ ư ng Acid pyruvic Các acid không CO2 V i sinh v t có các enzyme phân gi i các lo i đư ng trên, t o các acid h u cơ, làm pH c a môi trư ng nuôi c y gi m, và có th t o m t s ch t khí như H 2, CO2. pH c a môi trư ng gi m, làm ch th màu 58
Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only. Th c t p vi sinh cơ s - Trư ng Đ i h c M Tp. HCM Nguy n Văn Minh phenol red chuy n t đ sang vàng. Các ch t khí sinh ra s tích t vào ng Durham, phát hi n đư c b ng m t thư ng. Ø Môi trư ng: - Canh dinh dư ng (NB) b sung 1% đư ng, pH ≈ 7 ( môi trư ng lên men đư ng). - Ch th m àu phenol red. - ng durham. Ø Thao tác: c y VK (E.coli ) vào môi trư ng lên men đư ng, sau nhi t đ 37oC/24h l y ra đ c k t qu . khi Ø K t qu : - Lên men, sinh hơi: Phenol red trong ng môi trư ng chuy n t đ sang vàng, ng Durham có hơi. Ký hi u: ( +, h ) ho c ( +, G ). - Lên men, không sinh hơi: Phenol red trong ng môi trư ng chuy n t đ sang vàng, ng Durham không có hơi. Ký hi u: (+). - Không lên men: Phenol red v n gi nguyên màu đ . T t nhiên, ng Durham không có hơi. Ký hi u: (-). 2. Ph n ng MR (Methyl Red). 59
Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only. Th c t p vi sinh cơ s - Trư ng Đ i h c M Tp. HCM Nguy n Văn Minh Ø Cơ ch : M t s nhóm đư ng ru t như E. coli, Salmonella,… chuy n hóa glucose thành acid pyruvic.R i ti p t c chuy n hóa acid pyruvic thành ethanol, acid acetic, acid lactic, acid succinic. Các acid t o ra làm pH môi trư ng gi m m nh, pH ≈ 4 – 4,5. pH này methyl red màu đ , ngư c l i, pH cao hơn thì Methyl red s chuy n sang màu vàng. Ø Môi trư ng và thu c th : MT Clark – Lubs pH ≈ 7, thu c th Methyl red Ø Thao tác: C y VK E. coli, vào MT Clark – Lubs, 37oC/48h,l y ra nh 5 – 10 gi t MR, đ c k t qu . - + Ø Đ c k t qu : - Ph n ng Methyl red dương tính: dung d ch Methyl red trong môi trư ng v n gi nguyên màu đ . Ký hi u: MR (+). - Ph n ng Methyl red âm tính: dd Methyl red trong môi trư ng chuy n t đ sang vàng. Ký hi u: MR (-). 3. Ph n ng VP ( Voges – Proskauer ). Ø Cơ ch : Vi sinh v t chuy n hóa glucose thành acid pyruvic.R i ti p t c chuy n hóa acid pyruvic thành acetyl methyl carbinol ( AMC ). AMC tác d ng v i α - naphtol trong môi trư ng ki m t o thành diacetyl. Diacetyl ph n ng v i nhân guanidine (arginine) có trong pepton đ cho h p ch t màu h ng đ . 60

CÓ THỂ BẠN MUỐN DOWNLOAD

THÔNG TIN

TRỢ GIÚP

HỖ TRỢ KHÁCH HÀNG

Theo dõi chúng tôi

Chịu trách nhiệm nội dung:

Nguyễn Công Hà - Giám đốc Công ty TNHH TÀI LIỆU TRỰC TUYẾN VI NA

LIÊN HỆ

Địa chỉ: P402, 54A Nơ Trang Long, Phường 14, Q.Bình Thạnh, TP.HCM

Hotline: 093 303 0098

Email: support@tailieu.vn

Giấy phép Mạng Xã Hội số: 670/GP-BTTTT cấp ngày 30/11/2015 Copyright © 2022-2032 TaiLieu.VN. All rights reserved.