Xây dựng qui trình định lượng paclitaxel bằng phương pháp điện di mao quản

Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 4 * 2019 Nghiên cứu Y học<br /> <br /> <br /> XÂY DỰNG QUI TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG PACLITAXEL BẰNG PHƯƠNG<br /> PHÁP ĐIỆN DI MAO QUẢN<br /> Hứa Hoàng Oanh*, Nguyễn Phương Dung*, Trần Công Luận**<br /> TÓM TẮT<br /> Đặt vấn đề: Điện di mao quản là một kỹ thuật phân tích mới ở Việt Nam và có nhiều ưu điểm so với HPLC<br /> như hiệu lực tách cao, ít tốn dung môi, ít độc hại và ô nhiễm môi trường. Do đó, việc xây dựng quy trình định<br /> lượng paclitaxel bằng phương pháp điện di mao quản sẽ là một đóng góp vào dữ liệu khoa học, cũng như góp<br /> phần ứng dụng trong kiểm nghiệm chế phẩm có thành phần paclitaxel tại Việt Nam.<br /> Mục tiêu nghiên cứu: Xây dựng quy trình định lượng paclitaxel bằng phương pháp điện di mao quản<br /> Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: Xây dựng quy trình định lượng paclitaxel chiết từ lá Thông đỏ lá<br /> dài (Taxus wallichiana Zucc.) trồng ở Lâm Đồng với các điều kiện điện di: hệ thống điện di Agilent G7100A; đầu<br /> dò PDA; cột mao quản - silica gel nung chảy có chiều dài tổng 56 cm; chiều dài hiệu quả 50 cm, đường kính<br /> trong 50 µm. Điện thế: 20 kV. Nhiệt độ: 25oC. Bước sóng phát hiện: 227 nm. Dung dịch điện di nền:<br /> dinatritetraborat 50 mM, pH 10, methanol 10%. Thể tích tiêm mẫu: 50 mbar × 5s.<br /> Kết quả: Quy trình phân tích paclitaxel bằng phương pháp điện di mao quản đã được thẩm định đạt tính<br /> phù hợp hệ thống, có tính đặc hiệu, khoảng tuyến tính rộng, độ lặp lại và độ đúng.<br /> Kết luận: Đề tài đã xây dựng được quy trình định lượng paclitaxel trong cao chiết thông đỏ bằng phương<br /> pháp điện di mao quản.<br /> Từ khoá: điện di mao quản<br /> ASTRACT<br /> VALIDATING CAPILLARY ELECTROPHORESIS METHOD FOR THE DETERMINATION OF<br /> PACLITAXEL<br /> Hua Hoang Oanh, Nguyen Phuong Dung, Tran Cong Luan<br /> * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol. 23 – No. 4 - 2019: 135 – 140<br /> Objectives: Capillary electrophoresis (CE) is a new analytical technique in Vietnam with many advantages<br /> over HPLC, such as high efficiency of separation, short analysis time, remarkably low injection volume,<br /> environmentally friendly. Therefore, construction of quantitative process paclitaxel using capillary electrophoresis<br /> will be a contribution to scientific data, as well as contributing applications to the determination of the products<br /> containing paclitaxel in Vietnam. The aim of this study was to establish the quantitative analysis of paclitaxel by<br /> mean of capillary electrophoresis.<br /> Materials and Methods: The determination of paclitaxel isolated from Taxus wallichiana Zucc. cultivated<br /> in Lam Dong province by CE was performed in a fused silica capillary with a total length of 56 cm, effective<br /> length of 50 cm, i.d 50 µm with G7100A – Agilent Life Sciences 7100 Capillary Electrophoresis Instrument. The<br /> applied voltage for the determination was +20 kV. A 50 mM sodium tetraborate solution (pH 10, 10% methanol)<br /> was used as a separation buffer. Volume of sample injection was 50 mbar × 5s.<br /> Results: The method was suitably validated with respect to linearity, accuracy, specificity, and linearity.<br /> Conclusion: Quantitative procedure of paclitaxel by using capillary electrophoresis was successfully<br /> <br /> *Khoa Y Học Cổ Truyền, Đại học Y Dược TP. Hồ Chí Minh *Trường Đại học Tây Đô<br /> *<br /> <br /> Tác giả liên lạc: ThS.BS. Hứa Hoàng Oanh ĐT: 0334205210 Email: hhoanh@ump.edu.vn<br /> <br /> <br /> <br /> Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền 135<br /> Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 4 * 2019<br /> <br /> established and evaluated.<br /> Keywords: capillary electrophoresis<br /> ĐẶT VẤN ĐỀ di bằng cách thay đổi hệ đệm, pH đệm, nồng<br /> độ đệm và điện thế để tìm ra điều kiện mà tại<br /> Trong các thuốc trị ung thư thì paclitaxel là<br /> đó pic paclitaxel đạt các yêu cầu về các thông<br /> một hợp chất diterpen được phát hiện trong vỏ<br /> số điện di.<br /> loài Thông đỏ Taxus brevifolia ở miền Bắc<br /> California vào năm 1967 và được FDA chính Điều kiện điện di thích hợp để định lượng<br /> thức phê duyệt sử dụng trong điều trị ung thư paclitaxel<br /> vú vào năm 1992(3,4). Việt Nam đã và đang Hệ thống điện di Agilent G7100A; đầu dò<br /> nghiên cứu trồng, chiết xuất paclitaxel và các PDA; cột mao quản - silica gel nung chảy có<br /> taxoid có giá trị làm thuốc điều trị ung thư từ chiều dài tổng 56 cm; chiều dài hiệu quả 50<br /> Thông đỏ lá dài (Taxus wallichiana Zucc.). Bên cm, đường kính trong 50 µm. Điện thế: 20 kV.<br /> cạnh đó, các nghiên cứu về kiểm nghiệm các Nhiệt độ: 25oC. Bước sóng phát hiện: 227 nm.<br /> hoạt chất cũng được tiến hành để góp phần Dung dịch điện di nền: dinatritetraborat 50<br /> khẳng định chất lượng nguồn dược liệu và các mM, pH 10, methanol 10%. Thể tích tiêm mẫu:<br /> chế phẩm liên quan từ Thông đỏ lá dài Việt 50 mbar x 5s.<br /> Nam. Trong các phương pháp kiểm nghiệm Thẩm định quy trình định lượng theo hướng<br /> được nghiên cứu thì điện di mao quản là một kỹ dẫn của Bộ Y tế(1) và ICH(2) gồm các chỉ tiêu: tính<br /> thuật phân tích mới ở Việt Nam và có nhiều ưu phù hợp của hệ thống, tính đặc hiệu, khoảng<br /> điểm so với HPLC nhờ hiệu lực tách tốt, ít tốn tuyến tính, độ lặp lại, độ đúng.<br /> dung môi, ít độc hại và ô nhiễm môi trường. Đó Nơi tiến hành thực nghiệm<br /> là lý do đề tài này chọn ứng dụng phương pháp<br /> Bộ môn Hóa Phân tích – Kiểm nghiệm, Khoa<br /> điện di mao quản để định lượng paclitaxel chiết<br /> Dược, Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh.<br /> từ Thông đỏ lá dài trồng ở Lâm Đồng.<br /> KẾT QUẢ<br /> ĐỐITƯỢNG- PHƯƠNG PHÁPNGHIÊNCỨU<br /> Khảo sát tính phù hợp hệ thống<br /> Thiết kế nghiên cứu<br /> Để đánh giá tính phù hợp hệ thống của chất<br /> Nghiên cứu thí nghiệm.<br /> đối chiếu, pha dung dịch đối chiếu loãng của<br /> Nguyên vật liệu paclitaxel có nồng độ 100 µg/ml. Tiến hành điện<br /> Paclitaxel chuẩn (code T7402) mua từ Sigma- di 6 lần với điều kiện điện di đã chọn. Kết quả<br /> Aldrich. Số lô: MKBT3791V, độ tinh khiết trên được trình bày trong Bảng 1.<br /> nhãn là ≥ 95%. Bảng 1. Bảng kết quả đánh giá tính phù hợp hệ thống<br /> Paclitaxel chiết từ lá Thông đỏ lá dài (Taxus trong mẫu chuẩn<br /> wallichiana Zucc.) trồng ở Lâm Đồng do nhóm Số lần tm (phút) Corr.A (mAu) As<br /> nghiên cứu ở Trung tâm Sâm và Dược liệu Tp. 1 10,508 0,0456 2,0<br /> Hồ Chí Minh cung cấp. 2 10,471 0,0425 2,4<br /> 3 10,458 0,0427 2,5<br /> Dung môi, hóa chất nghiên cứu đạt tiêu 4 10,413 0,0423 2,4<br /> chuẩn tinh khiết mua từ Merk (Đức): 5 10,434 0,0438 2,3<br /> methanol, acetonitril, dinatri tetraborat, acid 6 10,888 0,0408 2,7<br /> boric, natri hydroxyd. TB 10,529 0,0429<br /> SD 0,087 0,0016<br /> Phương pháp nghiên cứu<br /> RSD 1,70 3,77<br /> Khảo sát quy trình điện di Các thông số về thời gian lưu và diện tích<br /> Tiến hành khảo sát một số điều kiện điện đỉnh trong bảng kết quả đều nằm trong giới hạn<br /> <br /> <br /> 136 Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền<br /> Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 4 * 2019 Nghiên cứu Y học<br /> <br /> cho phép và có RSD