intTypePromotion=1
zunia.vn Tuyển sinh 2024 dành cho Gen-Z zunia.vn zunia.vn
ADSENSE
 » 
 » 

Bài giảng Kỹ thuật phân tích Protein theo phương pháp Protein Array

Chia sẻ: Năm Tháng Tĩnh Lặng | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:85

Thêm vào BST
Báo xấu
143
lượt xem 10
download
 
  Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Mời các bạn cùng tham khảo nội dung bài giảng "Kỹ thuật phân tích Protein theo phương pháp Protein Array" để nắm bắt được những nội dung về Protein Array Technology, đặc điểm Protein và hệ thống biểu hiện, phân tích so sánh Protein và định lượng, kỹ thuật Protein Array,... Mời các bạn cùng tham khảo để có thêm tài liệu phục vụ nhu cầu học tập và nghiên cứu.

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Bài giảng Kỹ thuật phân tích Protein theo phương pháp Protein Array

  1. Kyõ thuaät Phaân tích Protein Theo Phöông phaùp Protein Array Protein Array Technology Ñaïi Hoïc Noâng Laâm, TP. Hoà Chí Minh Thaùng 10, 2007
  2. Protein Array Technology • - Protein ñoùng vai troø to lôùn trong caùc döôïc phaåm chuyeân bieät. • Tuy nhieân, • - Nghieân cöùu DNA -> Heä di truyeàn vaø ñieàu hoaø phieân maõ, khoâng höôùng ñeán vai troø cuûa caùc Protein ñöôïc bieåu hieän. • - Ñieàu hoøa ôû möùc ñoä mRNA chæ laø moät khía caïnh cuûa quaù trình ñieàu hoaø sinh hoïc treân cô sôû ñaùp öùng veà chöùc naêng sinh hoïc. • - Caùc protein chöùc naêng trong moät cô theå >>> soá gen. • Ñeå hieåu ñöôïc taùc ñoäng giöõa vieäc bieåu hieän Protein vaø moái quan heä hoå töông vôùi chöùc naêng caàn thieát phaûi coù nhöõng nghieân cöùu tröïc tieáp vaán ñeà naøy.
  3. Protein Array Technology Ñaëc ñieåm protein vaø heä thoáng bieåu hieän • Protein ñöôïc hình thaønh coù nhieàu daïng caáu truùc vaø nhieàu ñaëc tính chi phoái chöùc naêng cuûa chuùng. • Caáu truùc khoâng gian 3 chieàu ñöôïc xaùc ñònh thoâng qua caùc trình töï axit amin vaø caùc traïng thaùi xung quanh. • Caùc thay ñoåi trong quaù trình dòch maõ taùc ñoäng ñeán söï gaén keát vaø chöùc naêng cuûa moät soá protein.
  4. + Söï Glycosyl hoùa aûnh höôûng ñeán tính tan, tuoåi thoï vaø hoaït tính cuûa moät soá protein nhö khaû naêng cuûa khaùng theå gaén vôùi boå theå. + Söï phosphoryl hoùa ñieàu hoøa caùc hoaït ñoäng enzyme vaø cho pheùp xaûy ra caùc töông taùc pro-pro thoâng qua caùc thuï theå nhaän bieát caùc phaân töû P. + Caùc thay ñoåi trong dòch maõ phuï thuoäc raát nhieàu vaøo quaù trình bieåu hieän cuûa teá baøo chuû. Neáu moät protein taùi toå hôïp ñöôïc bieåu hieän trong teá baøo vi khuaån thöôøng khoâng ñöôïc Glycosyl hay Phosphoril hoaù, nhöng teá baøo S. cerevisea laïi coù khaû naêng G-hoùa caùc protein tieát ra töø teá baøo ñoäng vaät coù vuù.
  5. Caùc protein caàu coù chöùa caùc phaàn kî nöôùc quay vaøo beân trong vaø beân ngoaøi, neáu söû duïng caùc dung moâi höõu cô hay caùc chaát coù tính chaát taåy röûa, caùc phaàn kî nöôùc beân trong seõ quay ra ngoaøi, laøm maát hoaït tính cuûa protein. Vieäc taùi taïo laïi protein ñaõ bieán tính in vitro laø moät coâng vieäc khoù khaên, ñoøi hoûi phaûi coù caùc phöông phaùp linh hoaït vaø khoù ñaït ñöôïc trong ña soá tröôøng hôïp. ----> Caàn thieát phaûi coù moät phöông phaùp thích hôïp trong nghieân cöùu protein veà chöùc naêng cuõng nhö laø moái töông quan veà caáu truùc.
  6. Protein Array Technology • Laø kyõ thuaät tieân tieán vaø hieäu quaû cao trong saøng loïc söï bieåu hieän protein teá baøo. • Coù theå duøng moät slide kính hieån vi hay caùc giaù theå daïng haït coù chöùa maãu khaùc nhau. • Nhuoäm slide hay haït ñeå phaùt hieän haøng ngaøn bieåu hieän khaùc nhau trong cuøng moät böôùc phaân tích töï ñoäng. • Phaùt hieän: töông taùc Pro-Pro, khaùng nguyeân- khaùng theå, Enzyme-cô chaát, DNA-Pro, Ligand- receptor.
  7. Protein Array Technology Kyõ thuaät array ñöôïc aùp duïng ñeå giaùm saùt cô cheá gen noäi baøo vaø bieåu hieän protein. DNA array: phaân tích di truyeàn cuõng nhö bieåu hieän ôû möùc mRNA. Protein Array: phaân tích ôû möùc ñoä protein vaø caùc töông taùc.
  8. Phaân tích so saùnh vaø ñònh löôïng Protein
  9. Phaân tích so saùnh vaø ñònh löôïng Protein • a) Phaân tích so saùnh genome vaø Proteome: caùc thaønh phaàn töông töï cuûa protein töø nhieàu nguoàn khaùc nhau ñöôïc phaân laäp vaø phaân tích. Caùc phaân töû ñöôïc ñaùnh daáu phaân bieät baèng ñoàng vò phoùng xaï hay nhuoäm huyønh quang. Caùc phaân töû ñích ñöôïc ñaùnh daáu ñaïi dieän cho caùc phenotype khaùc nhau trong hai maøu rieâng bieät. Söï khaùc bieät veà trình töï hay bieåu hieän coù theå ñöôïc kieåm tra nhôø söï phaân tích so saùnh khi söû duïng moät hoãn hôïp caùc phaân töû ñích ñöôïc ñaùnh daáu khaùc nhau. • b) Phaân tích ñònh löôïng ñoàng thôøi protein: Caùc protein ñöôïc ñaùnh daáu fluorochrome coù theå ñöôïc phaùt hieän ñoàng thôøi theo kyõ thuaät microarray. Caùc khaùng theå chuyeân bieät coá ñònh töông taùc vôùi caùc protein ñích töông öùng vôùi chuùng coù trong dung dòch. Maät ñoä tín hieäu coù ñöôïc töông öùng vôùi löôïng maãu ñöôïc gaén keát. Trong moãi array, coù theå coù caùc ñieåm ñoái chöùng khaùc nhau, nhö chöùng döông hay chöùng aâm, hoaëc caùc ñieåm hieäu chuaån. Ñieàu naøy cho pheùp ñònh löôïng chính xaùc caùc tín hieäu.
  10. Protein Array Technology • Caùc ñaëc tính cuûa caùc vaät lieäu laø pha raén hay loûng nhö ñieän tích, ñoä nhôùt, kích thöôùc loå maøng, pH, khaû naêng keát noái chuyeân bieät hay khoâng chuyeân bieät. . ., coù vai troø raát quan troïng trong vieäc taïo ra moät protein array. • Thaùch thöùc lôùn nhaát laø giöõ ñöôïc hoaït tính protein. Ñieàu naøy ñöôïc giaûi quyeát deã daøng neáu gaén ñònh höôùng protein leân moät vuøng coá ñònh, thoâng qua moät vuøng chuyeân bieät (nhö histidin tag) vaø cho pheùp vuøng hoaït tính hoaït ñoäng töï do thöïc hieän caùc töông taùc.
  11. Protein Array Technology • Protein array thöôøng ñöôïc phaân tích vaø quan saùt treân caùc thieát bò töï ñoäng hieän ñaïi. Thoâng thöôøng laø caùc heä thoáng döïa treân nguyeân lyù gaén keát. Söï gaén keát treân beà maët raén thöôøng khoâng nhaïy caûm ñoái vôùi söï bieán ñoåi ñoä nhôùt cuûa maãu. • Haàu heát caùc heä thoáng ghi hình aûnh cho Protein Array laø döïa treân söï phaùt quang, söû duïng quaù trình ñaùnh daáu tröïc tieáp leân ligand hay giaùn tieáp thoâng qua caùc khaùng theå ñöôïc ñaùnh daáu.
  12. Caùc phaân töû gaén keát duøng trong phaân tích protein array Ñeå phaân tích caùc töông taùc chuyeân bieät, nhieàu loaïi phaân töû ñöôïc coá ñònh treân beà maët phaúng ñeå phaûn öùng nhö laø caùc phaân töû gaén keát. a) Töông taùc khaùng nguyeân- khaùng theå. b) Mieãn dòch Sandwich. c) Töông taùc pro-pro. d) Caùc phaân töû aptamer toång hôïp. e) Enzyme-Cô chaát: cô chaát cho kinase ñöôïc coá ñònh vaø ñöôïc phosphoryl hoùa nhôø Kinase. f) Thuï theå-ligand: hôïp chaát toång hôïp coù phaân töû thaáp ñöôïc coá ñònh nhö laø phaân töû gaén keát.
  13. Taïi sao söû duïng kyõ thuaät naøy? • 1. Löôïng maãu caàn ít: – Moät soá maãu raát hieám: beänh phaåm, huyeát thanh chuoät.. 2. Löôïng thoâng tin thu nhaän ñöôïc raát lôùn töø moät maãu: - Giaûm ñaùng keå caùc thí nghieäm. - Thu ñöôïc toaøn boä thoâng tin töø moät thí nghieäm phaân tích. 3. Giaûm löôïng hoùa chaát söû duïng, nhaân coâng 4.Taïo ra ñöôïc nhieàu thoâng tin hoå töông giöõa caùc chaát caàn phaân tích.
  14. Kyõ thuaät Luminex Bead-based • Heä thoáng hoaït ñoäng nhö theá naøo? • - Phaûn öùng xaûy ra treân beà maët cuûa caùc haït polystyrene. • - Moãi haït được nhuộm với hai loaïi thuoác nhuoäm coù chöùa noàng ñoä khaùc nhau: ñoû vaø hoàng ngoaïi • - Haøng traêm haït ñöôïc ñaùnh daáu maøu rieâng: moãi maøu ñöôïc duøng cho moät phaûn öùng rieâng bieät. • Æ DÖÏA TREÂN MAØU CUÛA CAÙC HAÏT.
  15. Kyõ thuaät Luminex Bead- based • Heä thoáng hoaït ñoäng nhö theá naøo? • - Phaûn öùng xaûy ra treân beà maët cuûa caùc haït polystyrene.
  16. Kyõ thuaät Luminex Bead-based • Heä thoáng hoaït ñoäng nhö theá naøo? • - Moãi haït coù chöùa noàng ñoä khaùc nhau cuûa hai loaïi thuoác nhuoäm: ñoû vaø hoàng ngoaïi • - Haøng traêm haït ñöôïc ñaùnh daáu maøu rieâng: moãi maøu ñöôïc duøng cho moät phaûn öùng rieâng bieät. • Æ DÖÏA TREÂN MAØU CUÛA CAÙC HAÏT.
  17. Kyõ thuaät Luminex Bead-based vaø Kyõ thuaät ELISA thoâng thöôøng • Kyõ thuaät ELISA thoâng thöôøng phaân tích cuøng luùc treân nhieàu gieáng moät chæ tieâu. • Ñöôïc thöïc hieän treân caùc plaque 96 gieáng.
  18. Kyõ thuaät Luminex Bead-based vaø Kyõ thuaät ELISA thoâng thöôøng • Kyõ thuaät Bead Arrays cho pheùp phaân tích cuøng luùc nhieàu chæ tieâu treân cuøng moät gieáng hay moät oáng nghieäm. • Ñöôïc thöïc hieän treân caùc haït nhuoäm maøu coù gaén keát caùc thuï theå ñaëc hieäu.
  19. Kyõ thuaät Luminex Bead- based • Kyõ thuaät Bead Arrays duøng caùc haït ñöôïc maõ hoùa bôûi maøu baèng caùch söû duïng moät daõy caùc tín hieäu huyønh quang khaùc nhau cuûa hai maøu nhuoäm.
ADSENSE

CÓ THỂ BẠN MUỐN DOWNLOAD

THÔNG TIN
TRỢ GIÚP
HỖ TRỢ KHÁCH HÀNG
Theo dõi chúng tôi

Chịu trách nhiệm nội dung:

Nguyễn Công Hà - Giám đốc Công ty TNHH TÀI LIỆU TRỰC TUYẾN VI NA

LIÊN HỆ

Địa chỉ: P402, 54A Nơ Trang Long, Phường 14, Q.Bình Thạnh, TP.HCM

Hotline: 093 303 0098

Email: support@tailieu.vn

Giấy phép Mạng Xã Hội số: 670/GP-BTTTT cấp ngày 30/11/2015 Copyright © 2022-2032 TaiLieu.VN. All rights reserved.

 

Đồng bộ tài khoản
9=>0