Tóm tắt luận văn Thạc sĩ Khoa học: Xác định hàm lượng Anthocyanin trong một số loại rau bằng phương pháp sắc kí

Chia sẻ: _ _ | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:16

Thêm vào BST

Báo xấu

47
lượt xem 3
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Đề tài nghiên cứu nhằm xây dựng và thẩm định phương pháp xác định hàm lượng Anthocyanin trong một số loại rau bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC; áp dụng quy trình kỹ thuật đã xây dựng phân tích một số mẫu rau trên thị trường.

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Tóm tắt luận văn Thạc sĩ Khoa học: Xác định hàm lượng Anthocyanin trong một số loại rau bằng phương pháp sắc kí

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN --------------------- VŨ THỊ HƢƠNG QUỲNH XÁC ĐỊNH HÀM LƢỢNG ANTHOCYANIN TRONG MỘT SỐ LOẠI RAU BẰNG PHƢƠNG PHÁP SẮC KÍ LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội - 2015
ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN --------------------- VŨ THỊ HƢƠNG QUỲNH XÁC ĐỊNH HÀM LƢỢNG ANTHOCYANIN TRONG MỘT SỐ LOẠI RAU BẰNG PHƢƠNG PHÁP SẮC KÍ Chuyên ngành: Hóa phân tích Mã số: 60440118 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS. NGUYỄN XUÂN TRUNG Hà Nội – 2015
LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên cho phép tôi được bày tỏ lòng biết ơn chân thành nhất đến PGS.TS. Nguyễn Xuân Trung, NCS Vũ Thị Trang đã giao đề tài, chỉ dẫn tận tình và tạo mọi điều kiện giúp đỡ tôi trong suốt quá trình làm luận văn. Tôi xin được gửi lời cảm ơn chân thành tới ban lãnh đạo Viện kiểm nghiệm An toàn vệ sinh thực phẩm Quốc gia , các anh chị trong Khoa chất lượng phụ gia và chất hỗ trợ chế biến thực phẩm - Viê ̣n Kiể m nghiê ̣m an toàn vê ̣ sinh thực phẩ m Quố c gia đã quan tâm , giúp đỡ, tạo điều kiện cho tôi được học tập và nghiên cứu trong môi trường hiện đại. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới các thầy cô giảng dạy tại khoa Hoá, đặc biệt là các thầy cô trong bộ môn Hoá Phân tích đã cho tôi những kiến thức quý giá trong quá trình học tập và thực hiện đề tài này. Cuố i cùng , tôi xin gửi lời biế t ơn sâu sắ c tới gia đình , bạn bè đã luôn bên cạnh chia sẻ khó khăn , đô ̣ng viên và giúp đỡ tôi trong ho ̣c tâ ̣p cũng như trong cuộc số ng. Do thời gian thực hiê ̣n đề tài có ha ̣n nên không tránh những thiế u sót , rấ t mong nhâ ̣n đươ ̣c ý kiế n đóng góp của thầ y cô và các ba ̣n để luận văn này được hoàn thiện hơn. Hà Nội, ngày 30 tháng 11 năm 2015 Học viên Vũ Thị Hƣơng Quỳnh
MỤC LỤC MỞ ĐẦU ....................................................................................................................7 CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN................... ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED. 1.1.Giới thiệu chung về anthocyanin ............................... Error! Bookmark not defined. 1.1.1. Cấu trúc hóa học của anthocyanin .............. Error! Bookmark not defined. 1.1.2. Tính chất của anthocyanin .......................... Error! Bookmark not defined. 1.1.3. Tác dụng của anthocyanin .......................... Error! Bookmark not defined. 1.1.4. Sự phân bố của anthocyanin ....................... Error! Bookmark not defined. 1.2.Một số phƣơng pháp xác định anthocyanin ............ Error! Bookmark not defined. 1.2.1. Phương pháp pH vi sai ................................ Error! Bookmark not defined. 1.2.2. Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) ..... Error! Bookmark not defined. CHƢƠNG 2: THỰC NGHIỆM ............. ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED. 2.1. Mục tiêu ......................................................................... Error! Bookmark not defined. 2.2. Nội dung nghiên cứu.................................................... Error! Bookmark not defined. 2.3. Đối tƣợng nghiên cứu .................................................. Error! Bookmark not defined. 2.4. Chất chuẩn, hoá chất, thiết bị .................................... Error! Bookmark not defined. 2.4.1. Chất chuẩn .................................................. Error! Bookmark not defined. 2.4.2. Hoá chất ...................................................... Error! Bookmark not defined. 2.4.3. Thiết bị ........................................................ Error! Bookmark not defined. 2.5. Phƣơng pháp nghiên cứu ........................................... Error! Bookmark not defined. 2.6. Thẩm định phƣơng pháp ........................................... Error! Bookmark not defined. CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN ............ ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED. 3.1. Tối ƣu các điều kiện xác định anthocyanin trên hệ thống HPLC ............... Error! Bookmark not defined. 3.1.1. Chọn detector .............................................. Error! Bookmark not defined. 3.1.2. Chọn bước sóng phát hiện .......................... Error! Bookmark not defined. 3.1.3. Chọn cột tách .............................................. Error! Bookmark not defined.
3.1.4. Chọn thể tích bơm mẫu ............................... Error! Bookmark not defined. 3.1.5. Khảo sát thành phần pha động ................... Error! Bookmark not defined. 3.1.6. Khảo sát nồng độ axit trong pha động ........ Error! Bookmark not defined. 3.1.7. Khảo sát chương trình rửa giải ................... Error! Bookmark not defined. 3.1.8. Khảo sát tốc độ pha động ............................ Error! Bookmark not defined. 3.2. Xây dựng quy trình xử lý mẫu .................................. Error! Bookmark not defined. 3.2.1. Khảo sát ảnh hưởng của thời gian đến quá trình thủy phân ............... Error! Bookmark not defined. 3.2.2. Khảo sát ảnh hưởng của nhiệt độ đến quá trình thủy phân ................. Error! Bookmark not defined. 3.2.3. Khảo sát tỷ lệ dung môi chiết mẫu ............. Error! Bookmark not defined. 3.3. Thẩm định phƣơng pháp phân tích ......................... Error! Bookmark not defined. 3.3.1. Tính đặc hiệu/chọn lọc ................................ Error! Bookmark not defined. 3.3.2. Khoảng tuyến tính ....................................... Error! Bookmark not defined. 3.3.3. Độ lặp lại ..................................................... Error! Bookmark not defined. 3.3.4. Độ thu hồi ................................................... Error! Bookmark not defined. 3.4. Ứng dụng phƣơng pháp xác định anthocyanin trong một số rau củ ......... Error! Bookmark not defined. TÀI LIỆU THAM KHẢO ........................................................................................9 PHỤ LỤC
DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1: Cấu trúc của 6 chất phổ biến nhất trong nhóm anthocyanin ............ Error! Bookmark not defined. Bảng 1.2: Thông tin chung về 3 chất nghiên cứu ..... Error! Bookmark not defined. Bảng 1.3: Hàm lượng Anthocyanin tổng có trong một số mẫu thực vật tại Việt Nam [7] .............................................................................. Error! Bookmark not defined. Bảng 3.1: Ảnh hưởng của cột tách đến độ rộng đáy pic (W) và thời gian lưu (tR) ................................................................................... Error! Bookmark not defined. Bảng 3.2: Ảnh hưởng của thành phần pha động đến độ rộng đáy pic (W), thời gian lưu (tR), độ phân giải (RS) của del, cya, pel. ............. Error! Bookmark not defined. Bảng 3.3: Rửa giải chất phân tích theo chế độ đẳng dòng ...... Error! Bookmark not defined. Bảng 3.4: Chương trình gradient 1............................ Error! Bookmark not defined. Bảng 3.5: Chương trình gradient 2............................ Error! Bookmark not defined. Bảng 3.6: Chương trình gradient 3............................ Error! Bookmark not defined. Bảng 3.7: Chương trình gradient 4............................ Error! Bookmark not defined. Bảng 3.8: Ảnh hưởng của chương trình gradient đến hệ số đối xứng pic ........ Error! Bookmark not defined. Bảng 3.9: Ảnh hưởng của tốc độ dòng đến thơi gian lưu và chiều cao pic ...... Error! Bookmark not defined. Bảng 3.10: Hàm lượng các chất theo thời gian thủy phân ...... Error! Bookmark not defined. Bảng 3.11: Hàm lượng các chất tại các nhiệt độ thủy phân khác nhau ............ Error! Bookmark not defined. Bảng 3.12: Hàm lượng các chất tại các tỷ lệ dung môi chiết khác nhau .......... Error! Bookmark not defined. Bảng 3.13: Nồng độ và diện tích pic trung bình của các chất. Error! Bookmark not defined. Bảng 3.14: Kết quả so sánh giữa giá trị a với giá trị 0 của phương trình đường chuẩn của 3 anthocyanin ...................................................... Error! Bookmark not defined. Bảng 3.15: Độ lặp lại trên nền mẫu bắp cải tím ........ Error! Bookmark not defined. Bảng 3.16: Độ lặp lại trên nền mẫu khoai lang tím .. Error! Bookmark not defined. Bảng 3.17: Độ thu hồi trên nền mẫu rau dền đỏ ...... Error! Bookmark not defined.
Bảng 3.18: Độ thu hồi trên nền mẫu củ dền ............. Error! Bookmark not defined. Bảng 3.19: Giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng của các chất phân tích Error! Bookmark not defined. Bảng 3.20: Kết quả phân tích một số mẫu rau củ ..... Error! Bookmark not defined.
DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1: Cấu trúc cơ bản aglycon của anthocyanin Error! Bookmark not defined. Hình 1.2: Sự phụ thuộc cấu trúc anthocyanin vào pH ............ Error! Bookmark not defined. Hình 2.1: Sơ đồ cấu tạo hệ thống HPLC ................... Error! Bookmark not defined. Hình 3.1: Phổ hấp thụ của delphinidin ...................... Error! Bookmark not defined. Hình 3.2: Phổ hấp thụ của cyanidin .......................... Error! Bookmark not defined. Hình 3.3: Phổ hấp thụ của pelargonidin .................... Error! Bookmark not defined. Hình 3.4: Sắc ký đồ của dung dịch chuẩn 3 chất với cột sắc kí 1 .. Error! Bookmark not defined. Hình 3.5: Sắc ký đồ của dung dịch chuẩn 3 chất với cột sắc kí 2 .. Error! Bookmark not defined. Hình 3.6: Sắc ký đồ rửa giải các anthocyanin với thành phần pha động là nước và ACN .......................................................................... Error! Bookmark not defined. Hình 3.7: Sắc ký đồ del, cya tại các nồng độ axit trifloaxetic khác nhau ......... Error! Bookmark not defined. Hình 3.8: Sắc ký đồ của hỗn hợp dung dịch chuẩn với chương trình gradient 1 ................................................................................... Error! Bookmark not defined. Hình 3.9: Sắc ký đồ hỗn hợp dung dịch chuẩn với chương trình gradient 2 ... Error! Bookmark not defined. Hình 3.10: Sắc ký đồ hỗn hợp dung dịch chuẩn với chương trình gradient 3 .. Error! Bookmark not defined. Hình 3.11: Sắc ký đồ hỗn hợp dung dịch chuẩn với chương trình gradient 4 .. Error! Bookmark not defined. Hình 3.12: Hàm lượng các chất khi thủy phân trong thời gian khác nhau (60, 90, 120, 150 phút). .......................................................... Error! Bookmark not defined. Hình 3.13: Hàm lượng các chất tại nhiệt độ thủy phân khác nhau Error! Bookmark not defined. Hình 3.14: Hàm lượng các chất theo phần trăm HCl 2 N trong dung môi chiết mẫu ................................................................................... Error! Bookmark not defined. Hình 3.15: Sắc ký đồ dung dịch chuẩn hỗn hợp ....... Error! Bookmark not defined.
Hình 3.16: Sắc ký đồ của mẫu rau không chứa anthocyanin .. Error! Bookmark not defined. Hình 3.17: Sắc ký đồ của mẫu rau không chứa anthocyanin được thêm chuẩn hỗn hợp ............................................................................. Error! Bookmark not defined. Hình 3.18: Đường chuẩn biểu thị mối quan hệ giữa diện tích pic và nồng độ delphinidin................................................................. Error! Bookmark not defined. Hình 3.19: Đường chuẩn biểu thị mối quan hệ giữa diện tích pic và nồng độ cyanidin ..................................................................... Error! Bookmark not defined. Hình 3.20: Đường chuẩn biểu thị mối quan hệ giữa diện tích pic và nồng độ pelargonidin............................................................... Error! Bookmark not defined. DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu Tiếng Anh Tiếng Việt ACN Acetonitrile Acetonitril Association of Official Analytical Hiệp hội cộng đồng phân AOAC Community tích chính thức CYA Cyanidin Cyanidin DEL Delphinidin Delphinidin High performance liquid HPLC Sắc ký lỏng hiệu năng cao chromatography High performance thin layer Sắc ký lớp mỏng hiệu năng HPTLC chromatography cao LC- Liquid chromatography tandem mass Sắc ký lỏng ghép khối phổ MS/MS spectrometry hai lần LOD Limit of detection Giới hạn phát hiện LOQ Limit of quantitation Giới hạn định lượng MeOH Methanol Metanol PDA Photodiod array Detector mảng đi-ốt quang PEL Pelargonidin Pelargonidin
ppm Parts per million Phần triệu R Relative coefficient Hệ số tương quan RSD Relative standard deviation Độ lệch chuẩn tương đối SD Standard Deviation Độ lệch chuẩn Tỷ lệ tín hiệu chia cho S/N Signal to noise ratio nhiễu TFA Trifloroacetic acid Axit Trifloaxetic UV-VIS Ultraviolet-Visible Tử ngoại và khả kiến
MỞ ĐẦU Ngày nay, do ảnh hưởng của điều kiện sống như: ô nhiễm môi trường, tiếng ồn, căng thẳng, lo lắng hay sử dụng các thực phẩm chứa nhiều chất oxy hóa đã tạo điều kiện làm gia tăng gốc tự do, kéo theo sau đó là sự gia tăng các dạng oxy hoạt động. Các dạng oxy hoạt động gia tăng, gây ra nhiều phản ứng bất lợi, tổn thương cho cơ thể và là nguyên nhân của nhiều căn bệnh nan y. Những nghiên cứu tìm hiểu về các chất có khả năng chống oxy hóa mang lại những tác dụng tốt, có lợi cho sức khỏe con người đang ngày càng phát triển. Chất chống oxy hóa là những “chiến binh tốt” chống lại các chất độc hại - các gốc tự do. Chúng được hình thành một cách tự nhiên như là một sản phẩm phụ của quá trình sống liên quan tới oxy. Các chất chống oxy hóa có khả năng giải phóng ra những điện tử, chúng vô hiệu hóa khả năng oxy hóa của các gốc tự do và ngăn chặn chúng tấn công các tế bào khỏe mạnh. Để bảo vệ chính mình, cơ thể luôn tự sản sinh ra các cơ chế chống oxy hóa thiết yếu, nhưng với thời gian chúng dần trở nên kém hiệu quả theo tuổi tác. Đây là lý do tại sao mà việc sử dụng các chất chống oxy hóa cũng như các thực phẩm chứa chất chống oxy hóa là rất quan trọng [3], [11]. Ngày nay, thức ăn không chỉ đảm bảo đủ calo, ngon, sạch, mà còn phải chứa các hoạt chất sinh học tự nhiên cần cho sức khoẻ và sắc đẹp, không chỉ điều khiển được các chức năng hoạt động của từng bộ phận trong cơ thể, tạo cho con người khả năng miễn dịch cao, chống sự lão hoá, tăng tuổi thọ, mà còn giúp phòng chống được một số bệnh, kể cả ung thư. Theo các nghiên cứu thì các hợp chất anthocyanin có các hoạt tính rất tốt như: chống viêm, chống xơ vữa động mạch, ức chế đông tụ tiểu cầu, chống ung thư, thúc đẩy hình thành cytokin điều hòa phản ứng miễn dịch, có hoạt tính chống oxy hóa rất mạnh [21], [22], [28]. Trên thế giới đã có nhiều quy trình xác định hàm lượng tổng anthocyanin hay hoạt chất nhóm anthocyanin bằng các kỹ thuật như: HPLC, UV-VIS, HPTLC, LC- MS [17], [24], [31]. Tại Việt Nam cũng công bố một số nghiên cứu xác định hàm lượng anthocyanin trong thực vật hay thực phẩm [2], [7]. Hầu hết các phương pháp
phân tích này xác định anthocyanin tổng bằng phương pháp UV-VIS có độ chính xác không cao. Việc phân tích riêng lẻ từng hợp chất trong nhóm anthocyanin trong đối tượng mẫu thực vật là cơ sở để đánh giá hoạt tính chống oxy hoá của từng chất trong nhóm, đề xuất nguồn nguyên liệu cho chế biến thực phẩm chức năng. Xuất phát từ thực tiễn trên, chúng tôi đặt vấn đề nghiên cứu đề tài: “Xác định hàm lượng Anthocyanin trong một số loại rau bằng phương pháp sắc ký” Với các mục tiêu sau đây: 1. Xây dựng và thẩm định phương pháp xác định hàm lượng Anthocyanin trong một số loại rau bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC. 2. Áp dụng quy trình kỹ thuật đã xây dựng phân tích một số mẫu rau trên thị trường.
TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt 1. Trần Tử An (2007), Hóa phân tích - tập 2 - Phân tích dụng cụ, Nhà xuất bản Y học, Hà Nội. 2. Huỳnh Thị Kim Cúc, và cộng sự (2004), "Xác định hàm lượng Anthocyanin trong một số nguyên liệu rau quả bằng phương pháp pH vi sai", Tạp Chí Khoa Học và Công Nghệ, Đại Học Đà Nẵng, 3(7), 47-54. 3. Lại Thị Ngọc Hà và Vũ Thị Thư (2009), "Stress oxy hóa và các chất chống oxy hóa tự nhiên", Tạp chí Khoa học và Phát triển, 7(5), 667-677. 4. Trần Từ Hiếu và cộng sự (2003), Hoá học phân tích, Nhà xuất bản đại học quốc gia Hà Nội, Hà Nội. 5. Nguyễn Thị Hiển, Nguyễn Thị Thanh Thủy, Nguyễn Thị Loan (2012), “Nghiên cứu chiết tách Anthocyanin từ đài hoa Hibiscus sabdariffa” - Ứng dụng để sản xuất giấy chỉ thị phát hiện nhanh hàn the trong thực phẩm, Tạp chí Khoa học và phát triển 2012, 10(5), 738-746. 6. Nguyễn Thị Lan và Lê Thị Lạc Quyên (2006), "Nghiên cứu ảnh hưởng của hệ dung môi đến khả năng chiết tách chất màu Anthocyanin có độ màu cao từ quả dâu Hội An", Tạp Chí Khoa Học và Công Nghệ, Đại Học Đà Nẵng, 44, 71-76. 7. Phạm Thị Thanh Nhàn, Nguyễn Hữu Cường và Lê Trần Bình (2011), "Tách chiết và phân tích hàm lượng Anthocyanin trong các mẫu thực vật khác nhau", Tạp chí Sinh Học, 33(4), 79-85. 8. Nguyễn Văn Ri (2009), Các phương pháp tách, Bài giảng Đại học Khoa học Tự Nhiên – ĐHQGHN. 9. Trần Cao Sơn (2010), Thẩm định phương pháp trong phân tích hóa học & vi sinh vật, Nxb Khoa Học và Kỹ Thuật. Tiếng Anh 10. Antonieta Ruiz. (2013), "Anthocyanin profiles in south Patagonian wild berries by HPLC-DAD-ESI-MS/MS", Food Research International, 51, 706–713.
11. Betteridge D. J. (February, 2000), "What is oxidative stress?", Metabolism, 49(2), 3-8. 12. Bhornchai Harakotr., et al (2014), "Anthocyanins and antioxidant acitivity in coloured waxy corn at different maturation stages", Journal of functional foods, 9, 109-118. 13. Bridle P. and Timberlake C.F. (1996), "Anthocyanins as natural food colors- selected aspects", Food Chemistry, 58, 103-109. 14. Cheynier V., Gómez C. and Ageorges A. (2012), "Flavonoids: Anthocyanins", In Fidel Toldra Leo M.L. Nollet, editor, Handbook of Analysis of Active Compounds in Functional Foods, 379-397. 15. Cretu G.C. and Morlock G.E. (1 March 2014), "Analysis of Anthocyanins in powdered berry extracts by planar chromatography linked with bioassay and mass spectrometry", Food Chemistry, 146, 104-112. 16. Korte G. Dreiseitel A., Schreier P., et al (2009), "Berry Anthocyanins and their aglycons inhibit monoamine oxidases A and B", Pharmacol Res, 59(5), 306-311. 17. Durst R.W. and Wrolstad R.E. (2001), "Separation and Characterization of Anthocyanins by HPLC", Current Protocols in Food Analytical Chemistry, F1.3.1-F1.3.13. 18. Francesca Leri., et al, (2012), "Simultaneous determination of Anthocyanins, coumarins and phenolicaxits in fruits, kernels and liqueur of Prunus mahaleb L", Food Chemistry, 135, 2157-2162. 19. Fossen T. and Andersen M. (2000), "Anthocyanins from tubers and shoots of the purple potato, Solanum tuberosum", J. Ilort Sci. Biotech, 75, 360-363. 20. Hybertson B.M., et al (2011), "Oxidative stress in health and disease: The therapeutic potential of Nrf2 activation", Molecular Aspects of Medicine, 32, 234–246. 21. Lakshmi S.V.V., Padmaja G. and Kutala V. K., Kuppusamy P. (December, 2009), "Oxidative Stress in Cardiovascular Disease", Indian Journal of Biochemistry & Biophysics, 46, 421-440.
22. Lila M.A (2004), "Anthocyanins and Human Health: An In Vitro Investigative Approach", Journal of Biomedicine and Biotechnology, 5, 306-313. 23. Longo L. and Vasapollo G. (2006), "Extraction and identification of Anthocyanins from Smilax aspera L. berries", Food Chemistry, 94, 226-231. 24. Marco P.H. and Scarminio I.S. (2007), "Q-mode curve resolution of UV–vis spectra for structural transformation studies of Anthocyanins inaxitic solutions", Analytica Chimica Acta, 583, 138-146. 25. Meng L. Lozano Y., Bombarda I., Gaydou E. and Li B. (2006), "Anthocyanin and flavonoid production from Perilla frutescens: Pilot plant scale processing including cross-flow microfiltration and reverse osmosis", J. Agric. Food Chem, 54, 4297-4303. 26. Merken H.M. and G.R. Beecher (2000), "Liquid chromatographic method for the separation and quantification of prominent flavonoid aglycones", Journal of Chromatography A, 897, 177-184. 27. Miguel M. G (2011), "Anthocyanins: Antioxidant and/or anti-inflammatory activities", Journal of Applied Pharmaceutical Science, 01(06), 07-15. 28. Nantz M.P. Percival S.S., Rowe C.A. and Nieves Jr. C. (2006), "Immunity and Antioxidant Capacity in Humans Is Enhanced by Consumption of a Dried, Encapsulated Fruit and Vegetable Juice Concentrate", The Journal of Nutrition, 136, 2606-2610. 29. Nafiz Oncu Can., et al (2012), "Rapid determination of free Anthocyanins in foodstuff using high performance liquid chromatography". Food Chemistry, 130, 1082-1089. 30. Ovando A.C., et al (2009), "Chemical studies of Anthocyanins: A review", Food Chemistry, 113, 859 - 871. 31. Rosso V.V., et al (2008), "Determination of Anthocyanins from acerola (Malpighia emarginata DC.) and acai (Euterpe oleracea Mart.) by HPLC– PDA–MS/MS", Journal of Food Composition and Analysis, 21, 291-299. 32. Tatsuzawa F., et al (2012), "Flower Colors and their Anthocyanins in Matthiola
incana Cultivars (Brassicaceae)", J. Japan. Soc. Hort. Sci, 81(1), 91-100. 33. Timberlake C. F. and Bridle P. (1982), "Distribution of Anthocyanins in Food Plants", In Pericles Markakis, editor, Anthocyanins as Food Colors, Academic Press. 34. Truong V.D. Deighton N., Thompson R.T., et al (2010), "Characterization of Anthocyanins and Anthocyanidins in Purple-Fleshed Sweetpotatoes by HPLC- DAD/ESI-MS/MS", J. Agric. Food Chem, 58, 404-410. 35. Wu X. (2005), "Identification and characterization of Anthocyanins by HPLC-ESI-MS/MS in common foods in the United States: Vegetables, nuts, and grains", J Agric Food Chem, 53(8), 3101-3113. 36. Xu Z. and Howard L.R. (2012), "Analysis Methods of Anthocyanins", Analysis of Antioxidant-RichPhytochemicals, 5, 945-978. 37. Yafang Shao., et al (2014), "Phenolicaxits, Anthocyanins, and antioxidant capacity in rice (Oryzasativa L.) grains at four stages of development after flowering", Food Chemistry, 143, 90–96. 38. Zhang Z. et al (2004), "Comparison of HPLC Methods for Determination of Anthocyanins and Anthocyanidins in Bilberry Extracts", J. Agric. Food Chem, 52, 688 - 691.