zunia.vn

Tuyển sinh 2024 dành cho Gen-Z

zunia.vn

» Y Tế - Sức Khoẻ

» Y khoa - Dược

Đánh giá khả năng bài tiết TNF-α của tế bào CAR-T kết hợp với kháng thể kháng PD-1 in vitro

Chia sẻ: _ _ | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:5

Báo xấu

4
lượt xem 1
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Nghiên cứu này nhằm đánh giá khả năng bài tiết TNF-α của liệu pháp điều trị kết hợp kháng thể đơn dòng ức chế PD-1 với tế bào CAR-T trên thực nghiệm để có cơ sở cho việc phát triển kỹ thuật này và ứng dụng trong điều trị trên lâm sàng.

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Đánh giá khả năng bài tiết TNF-α của tế bào CAR-T kết hợp với kháng thể kháng PD-1 in vitro

TẠP CHÍ Y häc viÖt nam tẬP 540 - th¸ng 7 - sè 3 - 2024 tế địa phương cần tăng cường việc sàng lọc để danh sách huyện nghèo, xã đặc biệt khó khăn phát hiện sớm rối loạn lo âu. Khuyến khích người vùng bãi ngang, ven biển và hải đảo giai đoạn 2021-2025. 2022. dân tăng cường tập thể dục, cải thiện sức khỏe 5. Pollack A. A., Weiss B. và Trung L. T. “Mental mình tốt hơn, đồng thời nâng cao kiến thức và health, life functioning and risk factors among kỹ năng ứng phó về thiên tai, bão lụt cho đối people exposed to frequent natural disasters and tượng nghiên cứu. chronic poverty in Vietnam”, BJPsych Open, 2016; 2(3), pp. 221-232. doi: 10.1192/ bjpo.bp.115. 002170 TÀI LIỆU THAM KHẢO 6. Kader Maideen S. F., Mohd Sidik S., Rampal 1. GBD 2019 Disease and Injuries L., Mukhtar F. “Prevalence, associated factors Collaborators. “Global burden of 369 diseases and predictors of anxiety: a community survey in and injuries in 204 countries and territories, 1990- Selangor, Malaysia”, BMC Psychiatry, 2015; 15, 2019: a systematic analysis for the Global Burden pp. 262. of Disease Study 2019”, Lancet, 2020; 396 7. Clare E French, Thomas D Waite, Ben (10258), pp. 1204-1222. doi: 10.1016/S0140- Armstrong, et al. “Impact of repeat flooding on 6736 (20)30925-9. mental health and health-related quality of life: a 2. Brådvik L. “Suicide Risk and Mental Disorders”, cross-sectional analysis of the English National Int J Environ Res Public Health, 2018;15(9), pp. 1-4. Study of Flooding and Health”, BMJ Open, 2019; 3. Goldmann E, Galea S. Mental health 9(11), pp. e031562. consequences of disasters. Annu Rev Public 8. Stanke Carla, Virginia Murray, Richard Amlôt, Health,2014; 35:169–83. doi: 10.1146/annurev- Dr Jo Nurse, Richard Williams. “The effects of publhealth-032013-182435 flooding on mental health: Outcomes and 4. Thủ tướng Chính phủ. Quyết định số 353/QĐ- recommendations from a review of the literature”, TTg ngày 15 tháng 3 năm 2022 về Phê duyệt PLoS Curr, 2012; 4, pp. e4f9f1fa9c3cae. ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG BÀI TIẾT TNF-Α CỦA TẾ BÀO CAR-T KẾT HỢP VỚI KHÁNG THỂ KHÁNG PD-1 IN VITRO Nguyễn Thị Hiền Hạnh1,2, Bùi Khắc Cường1 TÓM TẮT PD-1 (p>0,05). Kết luận: Nồng độ TNF-α tăng lên trong dịch nuôi cấy của tế bào CAR-T và CAR- T kết 79 Mục tiêu: Đánh giá khả năng bài tiết TNF-α của hợp với PD-1 Ab khi nuôi cấy với các tế bào ung thư. tế bào CAR-T kết hợp với kháng thể kháng PD-1. Đối Đặc biệt khi nuôi với tế bào có CD19(+) nồng độ TNF- tượng và phương pháp: Nghiên cứu thực nghiệm α tăng cao hơn so với khi nuôi cấy với tế bào CD19(-). tiến cứu trên 3 dòng tế bào bao gồm: 2 dòng tế bào Từ khóa: CAR-T, PD-1 Ab, TNF-α ung thư CD19(+) (Daudi và Raji) và 1 dòng tế bào CD19(-) (K562). Cả 3 dòng tế bào được đồng nuôi cấy SUMMARY với 4 nhóm PBMC (Peripheral Blood Mononuclear Cell - tế bào đơn nhân máu ngoại vi), kháng thể kháng PD-1 EVALUATION OF TNF-ΑLPHA SECRETION (PD-1 Ab), CAR-T và CAR-T phối hợp với kháng thể CAPACITY OF CAR-T CELLS IN COMBINATION kháng PD-1. Nồng độ cytokine TNF-α tại thời điểm 24 WITH ANTI-PD-1 ANTIBODIES IN VITRO giờ và 48 giờ được xác định bằng bộ sinh phẩm TNF-α Objective: To evaluate the TNF-α secretion Human ELISA Kit của hãng Thermo Fisher Scientific. capacity of CAR-T cells in combination with anti-PD-1 Kết quả: Ở cả hai thời điểm 24 giờ và 48 giờ, nồng antibodies. Materials and methods: We performed độ TNF-α trong dịch nuôi cấy của tế bào CAR-T và a prospective experimental study on 3 cell lines, CAR-T kết hợp với kháng thể kháng PD-1 khi nuôi cấy including 2 CD19(+) leukemia cell lines (Daudi and với các tế bào ung thư bạch cầu Daudi và Raji có Raji) and 1 CD19(-) cell line (K562). All 3 cell lines CD19(+) đều cao hơn có ý nghĩa thống kê so với nồng were co-cultured with 4 groups of PBMC (Peripheral độ TNF-α trong dịch nuôi cấy của tế bào trên với tế Blood Mononuclear Cell), anti-PD-1 antibody (PD-1 bào PBMC (nhóm chứng) và tế bào CD19(-). Tuy Ab), CAR-T cells only, and CAR-T cells in combination nhiên, không thấy có sự khác biệt về các nồng độ with anti-PD-1 antibodies. The TNF-α secretion cytokine này ở nhóm điều trị đơn liệu pháp tế bào capacity at 24 and 48 hours after co-culture was CAR-T và kết hợp tế bào CAR-T với kháng thể kháng determined using the TNF-α Human ELISA Kit from Thermo Fisher Scientific. Results: At both 24 and 48 1Học hours, TNF-α concentrations in the group of CAR-T viện Quân y cells only and CAR-T cells in combination with anti-PD- 2Bệnh viện Quân y 103, Học viện Quân y 1 antibodies when co-cultured with CD19(+) leukemia Chịu trách nhiệm chính: Bùi Khắc Cường cell lines (Daudi and Raji) were significantly higher Email: buikhaccuong@gmail.com than in the PBMC cells (control group) co-cultured with Ngày nhận bài: 22.4.2024 CD19(+) leukemia cell lines and the CD19(-) cell line. Ngày phản biện khoa học: 14.6.2024 However, there was no difference in TNF-α Ngày duyệt bài: 5.7.2024 concentrations between the CAR-T cell only and CAR-T 313
vietnam medical journal n03 - JULY - 2024 cells in combination with anti-PD-1 antibodies (p > đó, chúng tôi tiến hành nghiên cứu này nhằm 0.05). Conclusion: TNF-α concentrations increased in đánh giá khả năng bài tiết TNF-α của liệu pháp culture media of CAR-T cells and CAR-T combined with PD-1 Ab when co-cultured with cancer cells. Especially điều trị kết hợp kháng thể đơn dòng ức chế PD-1 when cultured with CD19(+) cells, TNF-α với tế bào CAR-T trên thực nghiệm để có cơ sở concentrations increased higher than when cultured cho việc phát triển kỹ thuật này và ứng dụng with CD19(-) cells. trong điều trị trên lâm sàng. Keywords: CAR-T, PD-1 Ab, TNF-α II. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU I. ĐẶT VẤN ĐỀ 2.1. Đối tượng, vật liệu nghiên cứu Các tế bào lympho T sở hữu thụ thể tế bào 2.1.1. Đối tượng nghiên cứu đặc hiệu, nhạy cảm và tương tác với các tín hiệu - Tế bào CAR-T CD19+ (sản phẩm của đề tài ung thư, qua đó kích thích đáp ứng miễn dịch mã số KC 10.39/16-20). khi xác định được các kháng nguyên ung thư. - Kháng thể đơn dòng ức chế PD-1 được Tuy nhiên, tế bào T thông thường chỉ có thể tấn nhập khẩu từ Mỹ dưới tên thương mại là công yếu ớt hoặc không thể chống lại tế bào ung Keytruda hàm lượng 25mg/ml. thư đã bị biến đổi do: tính sinh kháng nguyên - Tế bào Daudi (ATCC CCL-231) dòng tế bào nghèo nàn, không biểu hiện kiểu hình rõ ràng và ung thư hạch lympho CD19(+) Burkitt (ATCC, khả năng tương tác và ức chế đáp ứng miễn dịch Hoa Kỳ). Tế bào Raji (ATCC CCL-86) là dòng tế cao của các tế bào biến đổi [1]. Do vậy thụ thể bào ung thư bạch cầu lympho B CD19(+). Tế kháng nguyên dạng khảm (Chimeric Antigen bào K562 (ATCC CCL-243) dòng tế bào ung thư Receptors, CARs) đã được phát triển để kích bạch cầu mạn tính dòng tủy CD19(-). thích và hoạt hoá đáp ứng của tế bào T chống lại 2.1.2. Nguyên vật liệu nghiên cứu tế bào ung thư [1], [2]. Cơ chế tác động chính - Các loại môi trường nuôi cấy tế bào: của tế bào CAR-T là do CARs chuyển các tín hiệu TexMACS, RPMI pha với 10% dung dịch FBS nhận dạng kháng nguyên thành một thác truyền (fetal bovin serum) huyết thanh bào thai bò và tín hiệu tác động lên các chức năng đáp ứng của 1% kháng sinh penicillin, streptomycin. tế bào T như: tiết các nhân tố gây độc, các - Các loại vật tư tiêu hao cho nuôi cấy tế cytokine tiền viêm. PD-1, một protein trên bề bào: Đĩa và chai nuôi cấy tế bào các kích thước mặt của tế bào T, có vai trò hoạt hóa tế bào T (Chai T75, T25; Đĩa 10cm, 6cm, 6 giếng, 12 để chống lại khối u [3]. Sự hiện diện của PD-1 giếng, 24 giếng). Ống falcon các kích cỡ khác trên bề mặt tế bào CAR-T được cho là góp phần nhau (50ml, 15ml). Đầu côn, eppendorf, lọc vi làm giảm chức năng của liệu pháp CAR-T, đặc khuẩn 0,45 µm (ATCC, Hoa Kỳ) và một số dụng biệt là trong khối u rắn. Do vậy phong tỏa PD-1 cụ tiêu hao khác. trên tế bào CAR-T bằng chất ức chế hoặc kháng - Hệ thống phòng thí nghiệm sạch đảm bảo thể loại trừ PD-1 giúp tăng cường hiệu quả tiêu tiêu chuẩn phục vụ nuôi cấy tế bào, kính hiển vi diệt khối u của tế bào CAR-T [4]. Kháng thể soi ngược, tủ ấm CO2, máy ly tâm, tủ mát 40C, tủ kháng PD-1 sẽ kích hoạt tế bào CAR-T giúp tăng -200C, tủ -800C, bình bảo quản chứa Nitơ lỏng. cường hiệu quả, nâng cao chức năng của tế bào - Bộ kít ELISA định lượng nồng độ TNF-α CAR-T từ đó sẽ cải thiện được tiên lượng, giảm (Thermo Fisher Scientific). sự xuất hiện tác dụng phụ cũng như hiệu quả 2.2. Phương pháp nghiên cứu điều trị. Tế bào CAR-T kết hợp với kháng thể * Thiết kế nghiên cứu: Nghiên cứu được kháng PD-1 đã được sử dụng rộng rãi trong các tiến hành theo phương pháp thực nghiệm, can mô hình tiền lâm sàng và thử nghiệm lâm sàng thiệp, tiến cứu. Nghiên cứu có so sánh với nhóm để nâng cao hiệu quả của liệu pháp điều trị ung chứng. thư. Phong tỏa PD-1 được coi là một hướng mới Khả năng bài tiết cytokine của các tế bào đầy hứa hẹn để cải thiện chức năng của tế bào CAR-T phối hợp với kháng thể kháng PD-1 khi CAR-T mang lại hiệu quả điều trị tốt [5]. Trên đồng nuôi cấy với tế bào CD19+ sẽ được tiến thế giới đã có các nghiên cứu kết hợp hai liệu hành trên hai dòng tế bào ung thư CD19+ là pháp trên bệnh ung thư hạch và có hiệu quả tốt Daudi và Raji tại 2 thời điểm 24 giờ và 48 giờ hơn so với điều trị đơn lẻ. bằng phương pháp ELISA. Tế bào CD19(-) được Yếu tố hoại tử khối u alpha (TNF-α) là một sử dụng đối chứng là K562 và nhóm chứng sử cytokine tiền viêm được sản xuất và tiết ra bởi dụng tế bào PBMC. các tế bào lympho gây độc tế bào khi nhận ra - Nghiên cứu được thiết kế trên 4 nhóm: mục tiêu của khối u, đóng vai trò quan trọng + Nhóm PBMC (chứng) (n=3): 106/mL tế trong liệu pháp miễn dịch điều trị ung thư. Do bào PBMC được nuôi đồng thời cùng 10 6/mL tế 314
TẠP CHÍ Y häc viÖt nam tẬP 540 - th¸ng 7 - sè 3 - 2024 bào ung thư (Daudi/Raji/K562). đồng nuôi cấy với tế bào ung thư Daudi CD19+ + Nhóm PD-1 Ab (n=3): 106/mL tế bào ung đều cao hơn có ý nghĩa thống kê (p0,05). K562). - Sau 24 giờ và 48 giờ hỗn hợp tế bào được thu và tách dịch nuôi cấy tế bào để định lượng nồng độ TNF-α bằng các bộ sinh phẩm TNF-α Human ELISA Kit của hãng Thermo Fisher Scientific. 2.3. Xử lý thống kê. So sánh trung bình của các nhóm bằng phân tích phương sai ANOVA một chiều. Xử lý số liệu nghiên cứu bằng phần mềm SPSS 20.0. Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê khi p< 0,05. III. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1. Kết quả so sánh khả năng bài tiết TNF-α giữa 4 nhóm nghiên cứu (PBMC, CAR-T, PD-1 và CAR-T + PD-1) khi đồng nuôi cấy với các tế bào ung thư máu Hình 3.2. So sánh khả năng bài tiết TNF-α khi đồng nuôi cấy với TB Raji ở 4 nhóm sau 24 và 48 giờ (ns: p > 0,05; **: p < 0,01; ****: p < 0,0001) Kết quả cho thấy tại thời điểm 24 và 48 giờ nồng độ TNF-α trong dịch nuôi cấy của tế bào CAR-T và CAR-T kết hợp với PD-1 Ab khi đồng nuôi cấy với tế bào ung thư Raji có CD19+ đều cao hơn có ý nghĩa thống kê (p0,05). Hình 3.1. So sánh khả năng bài tiết TNF-α khi đồng nuôi cấy với TB Daudi ở 4 nhóm sau 24 và 48 giờ (ns: p > 0,05; ****: p < 0,0001) Sau cả hai thời điểm 24 và 48 giờ kết quả cho thấy nồng độ TNF-α trong dịch nuôi cấy của tế bào CAR-T và CAR-T kết hợp với PD-1 Ab khi 315
vietnam medical journal n03 - JULY - 2024 48 giờ đều cao hơn có ý nghĩa thống kê (p0,05). Hình 3.3. So sánh khả năng bài tiết TNF-α khi đồng nuôi cấy với TB K562 ở 4 nhóm sau 24 và 48 giờ (ns: p > 0,05; ****: p < 0,0001) Nồng độ TNF-α trong dịch nuôi cấy của tế bào CAR-T và CAR-T kết hợp với PD-1 Ab khi đồng nuôi cấy với tế bào ung thư K562 CD19- tại cả hai thời điểm đều cao hơn có ý nghĩa thống kê (p0,05). 3.2. Kết quả so sánh khả năng bài tiết TNF-α của tế bào CAR-T và CAR-T kết hợp với kháng thể kháng PD-1 với ba nhóm tế bào ung thư bạch cầu Hình 3.5. So sánh khả năng bài tiết TNF-α của TB CAR-T kết hợp với PD-1 Ab đồng nuôi cấy với TB ung thư bạch cầu sau 24 và 48 giờ (ns: p > 0,05; ***: p < 0,001) Nồng độ TNF-α trong dịch nuôi cấy của tế bào CAR-T kết hợp với kháng thể kháng PD-1 khi nuôi cấy với các tế bào ung thư có CD19+ (Raji và Daudi) ở cả thời điểm 24 và 48 giờ đều cao hơn có ý nghĩa thống kê (p 0,05; ****: p < 0,0001) α, IL-2, GM-CSF và IFN-γ [7]. Một trong những Nồng độ TNF-α trong dịch nuôi cấy của tế nguồn chính của các cytokine gây viêm là các tế bào CAR-T khi nuôi cấy với các tế bào ung thư bào tủy được kích hoạt trong quá trình trị liệu có CD19+ (Raji và Daudi) ở cả thời điểm 24 và bằng tế bào CAR-T. Sau khi truyền và nhận dạng 316
TẠP CHÍ Y häc viÖt nam tẬP 540 - th¸ng 7 - sè 3 - 2024 tế bào đích, các tế bào CAR-T được kích hoạt và CD19(+) (Raji và Daudi) ở cả thời điểm 24 giờ tiết ra nhiều yếu tố gây viêm khác nhau, chẳng và 48 giờ đều cao hơn có ý nghĩa thống kê hạn như GM-CSF, có thể kích hoạt các tế bào tủy (p

CÓ THỂ BẠN MUỐN DOWNLOAD

THÔNG TIN

TRỢ GIÚP

HỖ TRỢ KHÁCH HÀNG

Theo dõi chúng tôi

Chịu trách nhiệm nội dung:

Nguyễn Công Hà - Giám đốc Công ty TNHH TÀI LIỆU TRỰC TUYẾN VI NA

LIÊN HỆ

Địa chỉ: P402, 54A Nơ Trang Long, Phường 14, Q.Bình Thạnh, TP.HCM

Hotline: 093 303 0098

Email: support@tailieu.vn

Giấy phép Mạng Xã Hội số: 670/GP-BTTTT cấp ngày 30/11/2015 Copyright © 2022-2032 TaiLieu.VN. All rights reserved.