GIẢI TRÌNH TỰ GEN
lượt xem 56
download
Có 2 phương pháp chính - Phương pháp hóa học Maxam – Gilbert: đây là phương pháp được sử dụng đầu tiên để xác định trình tự gen nhưng hiện nay không còn được sử dụng phổ biến nữa - Phương pháp Enzyme Sanger Nguyên lý - Sử dụng các chất hóa học cắt đứt sợi DNA lại 1 loại nucleotide đặc hiệu
Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!
Nội dung Text: GIẢI TRÌNH TỰ GEN
- GIẢI TRÌNH TỰ GEN
- C¸c ph¬ng ph¸p g i¶i tr×nh tù g e n Cã 2 ph¬ng ph¸p chÝnh: – Ph¬ng ph¸p ho¸ häc Maxam – Gilbert: ®©y lµ ph ¬ng ph¸p ®îc sö dông ®Çu tiªn ®Ó x¸c ®Þnh tr×nh tù gen nhng hiÖn nay kh«ng cßn ®ù¬c sö dông phæ biÕn n÷a. – Ph¬ng ph¸p Enzyme Sanger
- 1. Ph¬ng ph¸p ho ¸ häc Maxam Gilbe rt Walter Gilbert
- Nguyªn lý Sö dông c¸c chÊt ho¸ häc c¾t ®øt sîi DNA t¹i 1 lo¹i nucleotide ®Æc hiÖu Ph©n tö DNA kÐp ®îc ®¸nh dÊu P 32 t¹i ®Çu 5’ T¸ch rêi 2 sîi ®¬n b»ng nhiÖt Xö lý ho¸ häc sao cho chØ cã 1 lo¹i nucleotide bÞ ph¸ huû ->hµng lo¹t ®o¹n DNA cã kÝch thíc kh¸c nhau ®îc t¹o thµnh (sö dông c¸c chÊt ho¸ häc kh¸c nhau ph¸ huû 4 lo¹i nucleotide b»ng 4 ph¶n øng riªng biÖt)
- TiÕn hµnh ®iÖn di c¸c ®o¹n DNA thu ®ù¬c trªn gel polyacrylamide, chØ quan s¸t ®ù¬c ®o¹n cã g¾n P 32. §o¹n DNA ng¾n nhÊt cã ®¸nh dÊu phãng x¹ sÏ ch¹y nhanh nhÊt díi t¸c dông cña ®iÖn trêng. C¨n cø vµo vÞ trÝ c¸c v¹ch quan s¸t ®îc trªn gel mµ x¸c ®Þnh tr×nh tù c¸c nucleotide.
- MAXAM-GILBERT CHEMICAL Labeled strand (P32) SEQUENCING ddNTP Reaction Mix 5’- Treat with 4 tubes chemicals that specifically C T A G cleave at a G-rxn A>G T>C certain base. 3’ -rxn C-rxn -rxn G C A 5’- T C T C C 5’- A C T A G 5’- G C 5’ autoradiograph of The reaction is done such that each dried sequencing gel strand is cleaved only once Sequence is read directly
- Ph¸ huû c¸c nucleotide Trong ph¬ng ph¸p nµy sö dông 5 ph¶n øng c¬b¶n: Dimethylsulfate ë pH 8.0 sÏ lµm thay ®æi Guanine (G). Piperidine formate ë pH 2.0 sÏ ph¸ vì cÇu nèi glycoside gi÷a deoxyribose víi purine (G,A) Hydrazine: më c¸c vßng pyrimidine (C , T) Hydrazine khi cã mÆt1.5M NaCl chØ cã t¸c dông ®èi víi C 1.2N NaOH ë 900C sÏ ph¸ huû A m¹nh vµ C kÐm.
- KÕt qu¶: Dimethylsulfate at pH 8.0 -----------> G Piperidine formate at pH 2.0 -------> G and A Hydrazine ------------------------------> C and T Hydrazine in 1.5 M NaCl -----------> C 1.2 N NaOH at 90 oC -----------------> A and C
- 3’ X X Dimethyl Piperidine Hydrazine Hydrazine in 1.2 N sulfate pH formate 1.5 M NaCl NaOH at to 8 pH 2 C 90 oC G G+A T+C X A>C X X 5’ GACGTACTTA3’ 5’ X G G+A T+C C A>C
- Nhîc ®iÓm Ho¸ chÊt ®éc CÇn mét lîng lín chÊt phãng x¹ ThiÕu sù tù ®éng §«i khi kÕt qu¶ thu ®ù¬c trªn gel kh«ng chÝnh x¸c
- 2. Ph¬ng ph¸p enzyme Sanger Fred Sanger
- Nguyªn lý Sö dông dideoxynucleotide kh«ng cã nhãm OH ë vÞ trÝ 3’ trong ph¶n øng tæng hîp DNA =>ph¬ng ph¸p dideoxy Ph©n tö DNA kÐp ®îc ®¸nh dÊu P 32 t¹i ®Çu 5 ’ Sîi ®«i DNA bÞ biÕn tÝnh thµnh hai sîi ®¬n vµ ®ù¬c lai víi måi (dµi vµi chôc nu, liÖn kÕt ®ù¬c víi 1 trong 2 m¹ch ®¬n)
- TiÕn hµnh ®ång thêi 4 ph¶n øng riªng lÏvíi 4 lo¹i dideoxynucleotide kh¸c nhau -> c¸c sîi ®¬n DNA ®îc tæng hîp cã ®é dµi ng¾n kh¸c nhau DiÖn di 4 s¶n phÈm cïng lóc trªn gel polyacrylamide §äc kÕt qu¶.
- Dideoxy-Nucleotides Base Base (P)-(P)-(P)- O (P)-(P)-(P)- O OH H H H dNTP ddNTP If a ddNTP is added to a growing DNA chain, the sequence is terminated, because another base can not be added
- SANGER DIDEOXY SEQUENCING èng èng èng èng ddNTP Reaction Mix ph¶n ph¶n ph¶n ph¶n øng A øng C øng G øng T dATP dATP dATP dATP dCTP C T A G dCTP dCTP dCTP dGTP dGTP dGTP dGTP dTTP dTTP dTTP dTTP ddATP ddCTP ddGTP ddTTP §o¹n ADN cÇn gi¶i tr×nh tù Måi Sequencing 3’ ……….CCTATGGAATGC- 5’ * * èng ph¶n øng A *èng ph¶n øng ** C * ** èng ph¶n øng G * * èng ph¶n øng ** T Phãng x¹ tù ghi sîi AND ®¬n tæng hîp trong mçi èng ph¶n øng.
- Ph¬ng ph¸p dideoxy c ¶i tiÕn Ph¬ng ph¸p dideoxy cã thÓ ®îc c¶i tiÕn ®Ó thùc hiÖn c¸c ph¶n øng trong cïng mét èng nghiÖm. Lóc nµy, c¸c ddNTP sÏ ®îc ®¸nh dÊu b»ng c¸c ph©n tö ph¸t huúnh quang mµu kh¸c nhau
- ¦u ®iÓm c ña ph¬ng ph¸p c ¶i tiÕn T¹o ®iÒu kiÖn thuËn lîi cho viÖc tù ®éng ho¸. Gi¶m gi¸ thµnh ph¶n øng T¨ng tèc ®é ph¶n øng =>NhiÒu trung t©m gi¶i tr×nh tù gen ®· sö dông ph¬ng ph¸p nµy vµ hä cã thÓ ®äc ®îc hµng triÖu bp mçi ngµy.
CÓ THỂ BẠN MUỐN DOWNLOAD
-
Kỹ thuật PRC
17 p | 285 | 53
-
Phytase, enzyme phân giải phytate và tiềm năng ứng dụng công nghệ sinh học
9 p | 206 | 47
-
PHƯƠNG PHÁP ĐÁNH DẤU ACID NUCLEIC
18 p | 217 | 36
-
KỸ THUẬT ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƯỢNG DNA BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐO QUANG PHỔ
17 p | 664 | 32
-
Chương trình chi tiết học phần di truyền học I
16 p | 303 | 31
-
Chuyên đề 3: 3 TỈ LỆ VÀ SỐ KIỂU GEN - KH - GIAO TỬ
13 p | 172 | 31
-
Tài liệu: Biểu hiện gen
8 p | 179 | 27
-
Công nghệ gen – vũ khí “huỷ diệt” của tương lai (P.I)
4 p | 168 | 24
-
Biểu hiện gen
10 p | 154 | 20
-
Công nghệ gen_vũ khí hủy diệt của tương lai(p1)
4 p | 103 | 12
-
SỞ GD&ĐT QUẢNG NAM TRƯỜNG THPT PHAN CHÂU TRINH ĐỀ THAM KHẢO ÔN THI TỐT NGHIỆP
5 p | 115 | 10
-
ĐỀ THAM KHẢO ÔN THI TỐT NGHIỆP THPT TRƯỜNG THPT LÊ QUÝ ĐÔN
8 p | 91 | 10
-
Bài giảng Công nghệ Gene: Chương 0 - TS. Nguyễn Ngọc Phương Thảo
5 p | 17 | 3
Chịu trách nhiệm nội dung:
Nguyễn Công Hà - Giám đốc Công ty TNHH TÀI LIỆU TRỰC TUYẾN VI NA
LIÊN HỆ
Địa chỉ: P402, 54A Nơ Trang Long, Phường 14, Q.Bình Thạnh, TP.HCM
Hotline: 093 303 0098
Email: support@tailieu.vn