Luận văn : Cố định enzyme – amylase bằng gel alginate part 5

Chia sẻ: Pkjd Opiuj | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:10

Thêm vào BST

Báo xấu

148
lượt xem 46
download

Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ

Cho hổn hợp trên nhỏ từng giọt xuống dung dịch Ca 0.2M từ khoảng cách 20cm tạo thành các hạt có kích thước từ 0.5–4 mm. Để yên trong 2 giờ để các hạt gel tủa lại. Enzyme đã được bao bọc bên trong hạt gel. Phương pháp đánh giá hoạt tính enzyme Chỉ tiêu theo dõi, đánh giá hoạt tính enzyme đường maltose sinh ra sau phản ứng Wihstatetter Schudel : a. Dụng cụ và hoá chất Dụng cụ Buret 2ml, 5ml, 10ml Erlen 250ml Hóa chất Dung dịch tinh bột 0.5% trong dung dịch đệm pH 5.6 Na2S2O3...

Chủ đề:

Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!

Lưu

Nội dung Text: Luận văn : Cố định enzyme – amylase bằng gel alginate part 5

41 –Cho hoån hôïp treân nhoû töøng gioït xuoáng dung dòch Ca 0.2M töø khoaûng caùch 20cm taïo thaønh caùc haït coù kích thöôùc töø 0.5–4 mm. Ñeå yeân trong 2 giôø ñeå caùc haït gel tuûa laïi. Enzyme ñaõ ñöôïc bao boïc beân trong haït gel.  Sô ñoà thöïc hieän: Sodium alginate Nöôùc Khuaáy, ñeå yeân trong 30 phuùt Dung dòch enzyme tæ leä 1:1 Khuaáy. Loaïi boû boït khí Glutaraldehyde Ñeå yeân trong 6giôø Xilanh nhoû gioït CaCl2 0.2M Loaïi enzyme dö. Ñeå yeân trong 2 giôø Gel
42 3.2.2. Phöông phaùp ñaùnh giaù hoaït tính enzyme amylase coá ñònh Chæ tieâu theo doõi, ñaùnh giaù hoaït tính enzyme amylase döïa treân ñònh löôïng ñöôøng maltose sinh ra sau phaûn öùng thuûy phaân tinh boät theo phöông phaùp Wihstatetter Schudel : a. Duïng cuï vaø hoaù chaát Duïng cuï Buret 2ml, 5ml, 10ml Erlen 250ml Hoùa chaát Dung dòch tinh boät 0.5% trong dung dòch ñeäm pH 5.6 Na2S2O3 N/20 NaOH N/10 Dung dòch iod N/10 b. Ñònh löôïng ñöôøng maltose Laáy 2 erlen 250ml Erlen thöù nhaát : (Thöû thaät): Cho vaøo 5ml hoãn hôïp caàn xaùc ñònh ñöôøng maltose, 10ml dung dòch iod N/10, 15ml dung dòch NaOH N/10. Thôøi gian nhoû dung dòch NaOH N/10 phaûi keùo daøi gaàn 2 phuùt (nhoû töøng gioït). Ñeå yeân trong toái 20 phuùt. Sau ñoù laáy ra cho theâm vaøo 2ml H2SO4 2N. Ñònh phaân löôïng thöøa 15 baèng dung dòch Na2S2O3 N/20 (duøng hoà tinh boät cho theâm vaøo luùc cuoái phaûn öùng ñònh phaân ñeå laøm chaát chæ thò maøu) . Erlen thöù hai : (thöû khoâng) : thay 5ml hoãn hôïp caàn xaùc ñònh löôïng ñöôøng maltose baèng 5ml nöôùc caát. Caùc böôùc tieán haønh thöïc hieän töông töï nhö ôû bình thöù nhaát.
43 c. Tính keát quaû  Löôïng ñöôøng maltose sinh ra do taùc duïng phaân giaûi cuûa amylase (V0 Vt ).342 (*) X (g) 20.10 3.2 V0 : laø theå tích Na2S2O3 N/20 duøng ñònh phaân cho bình thöû khoâng. Vt : laø theå tích Na2S2O3 N/20 duøng ñònh phaân cho bình thöû thaät. 342 : troïng löôïng phaûn öùng cuûa maltose.  Hoaït tính cuûa amylase (UI) ñöôïc tính theo coâng thöùc X Hñ A .K (U .I ) (**) m.t X : Löôïng ñöôøng maltose sinh ra do taùc duïng thuûy phaân cuûa amylase. m : Löôïng maãu enzyme söû duïng. K : Heä soá pha loaõng. 3.2.3. Phöông phaùp khaûo saùt hoaït tính enzyme coá ñònh a. Khaûo saùt hoaït tính cuûa enzyme coá ñònh so vôùi enzyme hoøa tan – Söû duïng 25 ml enzyme Termamyl ñaõ ñöôïc pha loaõng vôùi nöôùc caát (heä soá pha loaõng laø 2) tieán haønh qui trình coá ñònh vôùi 25ml dung dòch alginate 3% nhö treân taïo ra ñöôïc 50 ml enzyme coá ñònh. – Laáy 10 erlen 250 ml chia thaønh hai loâ, moãi loâ 5 erlen. Moät loâ tieán haønh thí nghieäm vôùi enzyme coá ñònh, moät loâ tieán haønh vôùi dòch enzyme hoøa tan vôùi heä soá pha loaõng laø 2 ñeå laáy giaù trò trung bình. – Tieán haønh theo baûng sau :
44 Loâ thöù 1 Loâ thöù 2 100ml hoà tinh boät 0.5% 100ml hoà tinh boät 0.5% 10ml enzyme coá ñònh 5ml dòch enzyme hoøa tan Ñaët teân treân maùy laéc ôû nhieät ñoä thöôøng trong 1 giôø Ñem ñònh löôïng ñöôøng maltose sinh ra ÔÛ moãi erlen laáy ra 25ml hoãn hôïp, theâm 10ml dung dòch NaOH 0.5N ñeå laøm amylase, theâm nöôùc cho ñuû 50ml. Laáy 5ml hoãn hôïp vöøa pha loaõng ñeå baát hoaït ñònh löôïng ñöôøng maltose sinh ra sau phaûn öùng thuûy phaân tinh boät theo phöông phaùp Wilistatettet Schudel. b. Khaûo saùt aûnh höôûng cuûa nhieät ñoä ñeán enzyme coá ñònh – Söû duïng 45 ml enzyme Termamyl ñaõ ñöôïc pha loaõng vôùi nöôùc caát (heä soá pha loaõng laø 2) tieán haønh qui trình coá ñònh vôùi 45ml dung dòch alginate 3% nhö treân taïo ra ñöôïc 90 ml enzyme coá ñònh. – Boá trí thí nghieäm theo 3 loâ thí nghieäm, moãi loâ 3 maãu tieán haønh theo doõi hoaït tính cuûa enzyme coá ñònh ôû caùc nhieät ñoä khaùc nhau. – Tieán haønh theo baûng sau : Tieán haønh thí nghieäm Loâ 1 Loâ 2 Loâ 3 Dung dòch tinh boät 0,5% (ml) 100 100 100 Enzyme coá ñònh (ml) 10 10 10 Nhieät ñoä uû (0C) 50 60 70 Thôøi gian uû (h) 1 1 1 Sau thôøi gian uû 1 giôø ôû moãi loâ thí nghieäm laáy ra 25 ml hoãn hôïp, theâm vaøo – amylase, theâm nöôùc cho ñuû 50 ml. 10 ml dung dòch NaOH 0.5N ñeå laøm baát hoaït Laáy ra 5ml hoãn hôïp vöøa pha loaõng ñeå ñònh löôïng löôïng ñöôøng maltose sinh ra sau phaûn öùng thuûy phaân tinh boät theo phöông phaùp Wilistatettet Schudel.
45 c. Khaûo saùt hoaït tính enzyme coá ñònh theo thôøi gian – Söû duïng 75 ml enzyme Termamyl ñaõ ñöôïc pha loaõng vôùi nöôùc caát (heä soá pha loaõng laø 2) tieán haønh qui trình coá ñònh vôùi 75ml dung dòch alginate 3% nhö treân taïo ra ñöôïc 150 ml enzyme coá ñònh Boá trí thí nghieäm theo 5 loâ thí nghieäm, moãi loâ 3 maãu, tieán haønh theo doõi hoaït tính cuûa enzyme coá ñònh ôû caùc khoaûng caùch thôøi gian khaùc nhau. Tieán haønh theo baûng sau : Tieán haønh thí nghieäm Loâ 1 Loâ 2 Loâ 3 Loâ 4 Loâ 5 Dòch hoà tinh boät 0.5% (ml) 100 100 100 100 100 Enzyme coá ñònh (ml) 10 10 10 10 10 Thôøi gian uû ôû nhieät ñoä thöôøng (h) 1.5 2 2.5 3 3.5 Sau thôøi gian uû nhaát ñònh ôû moãi loâ thí nghieäm laáy ra 25 ml hoãn hôïp, theâm vaøo 10 ml dung dòch NaOH 0.5N ñeå laøm baát hoaït – amylase, theâm nöôùc cho ñuû 50 ml. Laáy ra 5ml hoãn hôïp vöøa pha loaõng ñeå ñònh löôïng löôïng ñöôøng maltose sinh ra sau phaûn öùng thuûy phaân tinh boät theo phöông phaùp Wilistatettet Schudel. d. Thí nghieäm söû duïng enzyme coá ñònh trong thieát bò doøng chaûy lieân tuïc tuaàn hoaøn Tieán haønh khaûo saùt hoaït tính cuûa enzyme coá ñònh trong coät coá ñònh hình truï troøn vôùi theå tích 300ml, chieàu cao 40cm, tieán haønh phaûn öùng thuûy phaân tinh boät theo daïng thieát bò tuaàn hoaøn lieân tuïc. – Nhoài vaøo coät 150 ml enzyme coá ñònh. Tieán haønh chaïy thieát bò vôùi löu löôïng nguyeân lieäu ñaàu vaøo 50 ml/ 1 giôø; Löu löôïng saûn phaåm 50 ml/ 1 giôø; Löu löôïng doøng tuaàn hoaøn 30 ml/ 1 giôø. – Sau nhöõng khoaûng thôøi gian nhaát ñònh tieán haønh xaùc ñònh haøm löôïng ñöôøng maltose sinh ra trong saûn phaåm thu ñöôïc, ñaùnh giaù hoaït tính enzyme coá ñònh, ñoàng thôøi khaûo saùt thôøi gian söû duïng ñöôïc enzyme moät caùch lieân tuïc. Tuy nhieân do thôøi gian ôû phoøng thí nghieäm khoâng cho pheùp khaûo saùt lieân tuïc trong nhieàu giôø do
46 ñoù sau moãi laàn söû duïng enzyme coá ñònh ñöôïc röûa qua dung dòch CaCl2 0,2 M vaø sau ñoù ñöôïc ngaâm trong dung dòch CaCl2 0,2 M ñaët ôû nhieät ñoä laïnh. Hình 3.1: Moâ hình thieát bò tuaàn hoaøn lieân tuïc
47 Phaàn 4 KEÁT QUAÛ VAØ THAÛO LUAÄN 4.1. Keát quaû khaûo saùt hoaït tính cuûa enzyme coá ñònh so vôùi enzyme hoøa tan Sau khi tieán haønh khaûo saùt hoaït tính cuûa enzyme coá ñònh so vôùi enzyme hoaø tan theo phöông phaùp ñaõ ñöôïc trình baøy ôû phaàn III.3, thu ñöôïc keát quaû nhö sau (Baûng 4.1; Baûng 4.2) : Baûng 4.1: Keát quaû hoaït tính cuûa enzyme coá ñònh ôû nhieät ñoä thöôøng LOÂ THÖÙ NHAÁT (E. COÁ ÑÒNH) STT V0(ml) Vt(ml) X(g) Hoaït tính (UI) 1 22,5 19,9 0.0222 0.0062 2 22,5 20.5 0.0171 0.0048 3 22,5 20.4 0.0180 0.0050 4 22,5 21 0.0128 0.0036 5 22,5 19.9 0.0222 0.0062 Tb 0.0052 22,5 20.34 0.0185 Baûng 4.2: Keát quaû hoaït tính cuûa enzyme hoøa tan ôû nhieät ñoä thöôøng LOÂ THÖÙ HAI (E. HOØA TAN) STT V0(ml) Vt(ml) X(g) Hoaït tính (UI) 0.0077 1 22,5 19.3 0.0274 0.0086 2 22,5 18.9 0.0308 0.0074 3 22,5 19.4 0.0265 0.0060 4 22,5 20 0.0214 0.0086 5 22,5 18.9 0.0308 Tb 0.0077 22.5 19.3 0.0274
48 Trong ñoù : Vo : theå tích Na2S2O3 N/20 duøng ñònh phaân cho bình thöû khoâng. Vt : theå tích Na2S2O3 N/20 duøng ñònh phaân cho bình thöû thaät. X : Khoái löôïng ñöôøng maltose sinh ra ñöôïc tính theo coâng thöùc (*) Hoïat tính enzyme ñöôïc tính theo coâng thöùc (**)  Nhaän xeùt – amylase coá ñònh giaûm 32,5% so vôùi hoaït tính enzyme Hoaït tính enzyme hoøa tan. Ñieàu naøy laø do : – Haïn cheá khaû naêng tieáp xuùc giöõa enzyme vaø cô chaát. – Tinh boät laø nguoàn cô chaát cao phaân töû do ñoù khaû naêng thaåm thaáu qua maøng alginate thaáp daãn ñeán haïn cheá chaát löôïng saûn phaåm taïo ra. 4.2. Keát quaû khaûo saùt aûnh höôûng cuûa nhieät ñoä ñeán hoaït tính enzyme coá ñònh Keát quaû khaûo saùt aûnh höôûng cuûa nhieät ñoä ñeán enzyme coá ñònh ñöôïc trình baøy trong baûng 4.3 Baûng 4.3: Keát quaû hoïat tính cuûa enzyme coá ñònh ôû caùc nhieät ñoä khaùc nhau Loâ 1 (500C) Loâ 2 (600C) Loâ 3 (700C) Nhieät ñoä Vt Bercher thöù1 (ml) 19.0 18.5 17 Vt Bercher thöù 2 (ml) 18.0 18.7 16.3 Vt Bercher thöù 3 (ml) 19.3 18.4 15.5 Giaù trò Vt trung bình (ml) 19.03 18.53 16.27 Haøm löôïng ñöôøng maltose X(g) 0.03 0.034 0.053 Hoaït tính enzyme (UI) 0.0083 0.0095 0.0149 Vo : theå tích Na2S2O3 N/20 duøng ñònh phaân cho bình thöû khoâng (22.5ml) Vt : theå tích Na2S2O3 N/20 duøng ñònh phaân cho bình thöû thaät. X : Khoái löôïng ñöôøng maltose sinh ra ñöôïc tính theo coâng thöùc (*) Hoaït tính enzyme ñöôïc tính theo coâng thöùc (**)
49
50  Nhaän xeùt Hoaït tính enzyme taêng roõ reät khi ta gia taêng nhieät ñoä phaûn öùng ñeán 70 0C. ÔÛ nhieät ñoä naøy, hieäu suaát söû duïng cao hôn, mang laïi hieäu quaû söû duïng cao hôn. Tuy nhieân, theo nhaän ñònh cuûa caûm quan, ta khoâng theå tieáp tuïc gia taêng nhieät ñoä, vì ôû nhieät ñoä cao hôn haït gel seõ khoâng beàn vöõng, haït gel bò meàm ñi khi ñoù enzyme seõ thoaùt ra ngoaøi. Ñaây cuõng laø moät trôû ngaïi raát lôùn khi ta söû duïng gel alginate ñeå coá ñònh enzyme coù nhieät ñoä toái öu cao nhö enzyme – amylase. 4.3. Keát quaû khaûo saùt hoaït tính enzyme coá ñònh theo thôøi gian Baûng 4.4 : Keát quaû khaûo saùt hoaït tính enzyme coá ñònh theo thôøi gian Thôøi gian Loâ 1 Loâ 2 Loâ 3 Loâ 4 Loâ 5 Vt Bercher thöù1 (ml) 19,2 18,7 18,1 18,3 18,2 Vt Bercher thöù 2 (ml) 19,3 18,6 17,8 18,1 18,2 Vt Bercher thöù 3 (ml) 19,3 18,9 18,2 17,9 18,0 Giaù trò Vt trung bình (ml) 19,27 18,73 18,03 18,10 18,13 Haøm löôïng ñöôøng maltose X(g) (*) 0,0276 0,0322 0,0382 0,0376 0,0373 0,0052 0,0045 0,0043 0,0035 0,0030 Hoaït tính enzyme (**) Vo : theå tích Na2S2O3 N/20 duøng ñònh phaân cho bình thöû khoâng(22.5ml) Vt : theå tích Na2S2O3 N/20 duøng ñònh phaân cho bình thöû thaät. X : Khoái löôïng ñöôøng maltose sinh ra ñöôïc tính theo coâng thöùc (*) Hoaït tính enzyme ñöôïc tính theo coâng thöùc (**) Töø baûng keát quaû treân, ta ruùt ra ñöôïc söï thay ñoåi hoaït tính cuûa enzym e coá ñònh theo thôøi gian nhö sau: Baûng 4.5 : Söï thay ñoåi hoaït tính cuûa enzyme theo thôøi gian Thôøi gian (giôø) 1 1.5 2 2.5 3 3.5 0.0052 0.0052 0.0045 0.0043 0.0035 0.0030 Hoaït tính amylase