Luận văn Thạc sĩ Sinh học: Xây dựng phương pháp điện biến nạp cho Bacillus subtilis 1012 và Bacillus subtilis WB800N

ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH<br /> TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN<br /> <br /> PHẠM THỊ MỸ TIÊN<br /> <br /> XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN BIẾN NẠP<br /> CHO BACILLUS SUBTILIS 1012 VÀ BACILLUS SUBTILIS WB800N<br /> <br /> LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC<br /> <br /> TP. Hồ Chí Minh – Năm 2015<br /> <br /> ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH<br /> TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN<br /> <br /> PHẠM THỊ MỸ TIÊN<br /> <br /> XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN BIẾN NẠP<br /> CHO BACILLUS SUBTILIS 1012 VÀ BACILLUS SUBTILIS WB800N<br /> <br /> Chuyên ngành: Vi sinh<br /> Mã số chuyên ngành: 60 42 40<br /> <br /> LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC<br /> <br /> Người hướng dẫn khoa học: TS. PHAN THỊ PHƯỢNG TRANG<br /> <br /> TP. Hồ Chí Minh – Năm 2015<br /> <br /> LỜI CẢM ƠN<br /> Trước hết, em xin gửi lời cảm ơn đến tất cả các thầy cô khoa Sinh – Trường Đại<br /> học Khoa học Tự nhiên thành phố Hồ Chí Minh và các thầy cô thỉnh giảng đã tận tình<br /> truyền đạt cho em những kiến thức quý báu trong suốt 2 năm học.<br /> Em xin bày tỏ sự kính trọng và lòng biết ơn chân thành đến GS. TS Trần Linh<br /> Thước. Thầy luôn là tấm gương sáng cho em trên con đường học tập và nghiên cứu.<br /> Đặc biệt, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến cô Phan Thị Phượng Trang và thầy<br /> Nguyễn Đức Hoàng. Thầy cô đã tận tâm hướng dẫn, định hướng và truyền đạt cho em<br /> những kiến thức và kinh nghiệm nghiên cứu vô cùng quý báu, đồng thời luôn hỗ trợ em<br /> hết mình trong quá trình học tập, nghiên cứu cũng như tạo mọi điều kiện cho em có thể<br /> phát huy tốt năng lực của mình. Cảm ơn thầy cô vì tất cả những thành quả em đạt được<br /> ngày hôm nay.<br /> Em xin cảm ơn các anh chị, các em và các bạn đang học tập và làm việc tại<br /> Trung tâm Khoa học và Công nghệ Sinh học đã luôn hỗ trợ, động viên em trong suốt<br /> quá trình làm thí nghiệm, đồng thời chia sẻ những kinh nghiệm nghiên cứu cũng như<br /> mọi vui buồn trong công việc. Đặc biệt là cảm ơn anh Trí Nam, chị Ngọc Phương, anh<br /> Tuấn Anh, anh Hoài Nam, anh Lương Thắng và các bạn Tinh Tươm, Kiều Thanh, Châu<br /> Duyên, các em Huy, Vương, Toàn, Phương, Trí, Lan, Lệ. Mọi người đã giúp đỡ em rất<br /> nhiều trong thời gian qua. Cảm ơn tập thể cán bộ phòng thí nghiệm Công nghệ Sinh học<br /> phân tử đã luôn hỗ trợ và tạo mọi điều kiện tốt nhất cho em trong quá trình nghiên cứu.<br /> Và trên hết, con xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành nhất đến ba mẹ và gia đình,<br /> những người đã luôn ở bên cạnh con, luôn yêu thương và là chỗ dựa vững chắc nhất cho<br /> con khi bước đi trên con đường mà con đã chọn.<br /> TP. Hồ Chí Minh tháng 4 năm 2015<br /> Phạm Thị Mỹ Tiên<br /> <br /> Mục lục<br /> <br /> MỤC LỤC<br /> MỤC LỤC .........................................................................................................................i<br /> DANH MỤC BẢNG ......................................................................................................vii<br /> DANH MỤC BIỂU ĐỒ .................................................................................................vii<br /> DANH MỤC HÌNH ........................................................................................................ix<br /> DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT.......................................................................................xi<br /> LỜI MỞ ĐẦU .................................................................................................................. 1<br /> TỔNG QUAN<br /> 1.1.<br /> <br /> Tổng quan về Bacillus subtilis ........................................................................... 3<br /> 1.1.1.<br /> 1.1.2.<br /> <br /> Đặc điểm vách tế bào ................................................................................... 4<br /> <br /> 1.1.3.<br /> <br /> Dinh dưỡng và sinh trưởng .......................................................................... 6<br /> <br /> 1.1.4.<br /> <br /> Ưu điểm của B. subtilis 1012 và B. subtilis WB800N ................................ 6<br /> <br /> 1.1.5.<br /> 1.2.<br /> <br /> Đặc điểm chung ........................................................................................... 3<br /> <br /> Ứng dụng của B. subtilis trong sản xuất protein tái tổ hợp ......................... 7<br /> <br /> Một số phương pháp biến nạp vật chất di truyền vào B. subtilis ....................... 8<br /> 1.2.1.<br /> <br /> Phương pháp biến nạp tự nhiên ................................................................... 8<br /> <br /> 1.2.1.1.<br /> <br /> Nguyên tắc ............................................................................................ 8<br /> <br /> 1.2.1.2.<br /> <br /> Ưu và nhược điểm ................................................................................. 8<br /> <br /> 1.2.2.<br /> <br /> Phương pháp biến nạp qua protoplast .......................................................... 9<br /> <br /> 1.2.2.1.<br /> <br /> Nguyên tắc ............................................................................................ 9<br /> <br /> Trang i<br /> <br /> Mục lục<br /> 1.2.2.2.<br /> 1.2.3.<br /> <br /> Ưu và nhược điểm ............................................................................... 10<br /> <br /> Phương pháp điện biến nạp........................................................................ 10<br /> <br /> 1.2.3.1.<br /> 1.2.3.2.<br /> <br /> Tác động của dòng điện đến màng tế bào ........................................... 11<br /> <br /> 1.2.3.3.<br /> 1.3.<br /> <br /> Nguyên tắc .......................................................................................... 10<br /> <br /> Ưu và nhược điểm của phương pháp điện biến nạp ........................... 12<br /> <br /> Các yếu tố ảnh hưởng tần suất biến nạp của phương pháp điện biến nạp........ 12<br /> 1.3.1.<br /> <br /> Đặc điểm của tế bào khả nạp ..................................................................... 13<br /> <br /> 1.3.2.<br /> <br /> Môi trường tăng trưởng và ảnh hưởng của điều kiện nuôi cấy lên<br /> <br /> tính khả nạp ............................................................................................................. 14<br /> 1.3.2.1.<br /> <br /> Áp suất thẩm thấu và các chất thẩm thấu trong môi trường<br /> <br /> tăng trưởng ........................................................................................................... 15<br /> 1.3.2.2.<br /> <br /> Các chất tác động lên vách tế bào trong quá trình nuôi cấy ............... 16<br /> <br /> 1.3.2.3.<br /> <br /> Nhiệt độ ............................................................................................... 17<br /> <br /> 1.3.3.<br /> <br /> Ảnh hưởng của cấu trúc và kích thước DNA lên tính khả nạp.................. 17<br /> <br /> 1.3.4.<br /> <br /> Thông số điện biến nạp .............................................................................. 18<br /> <br /> 1.4.<br /> <br /> Ảnh hưởng của điện trường đến tế bào vi khuẩn ............................................. 18<br /> <br /> 1.5.<br /> <br /> Tình hình nghiên cứu phương pháp điện biến nạp cho Bacillus ...................... 19<br /> <br /> VẬT LIỆU – PHƯƠNG PHÁP<br /> 2.1.<br /> <br /> Địa điểm nghiên cứu......................................................................................... 20<br /> <br /> 2.2.<br /> <br /> Vật liệu ............................................................................................................. 20<br /> <br /> Trang ii<br /> <br />