Đề tài "Quy trình định lượng S.Aureus bằng phương pháp đếm đĩa" trình bày các nội dung chính như: Tổng quan về vi khuẩn staphylococcus aureus, quy trình định lượng S.aureus, thuyết minh qui trình,...Mời các bạn cùng tham khảo!
AMBIENT/
Chủ đề:
Nội dung Text: Đề tài: Quy trình định lượng S.Aureus bằng phương pháp đếm đĩa
-
BỘ CÔNG THƯƠNG
TRƯỜNG ĐH CÔNG NGHIỆP
THỰC PHẨM TP. HỒ CHÍ MINH
KHOA THỦY SẢN
MÔN:MÔN:
MÔN: PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM
ĐỀ TÀI: QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG S.AUREUS
BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐẾM ĐĨA
GVHD: NGUYỄN THỊ KIM OANH NHÓM THỰC HIỆN: 7
- 1. Tổng quan về vi khuẩn staphylococcus aureus:
Đặc điểm:
Hiếu khí hay kị khí tùy ý
Cầu khuẩn, Gram (+), chùm nho
Có thử nghiệm coagulase, phản ứng DNA, phosphatese
Khả năng lên men đường manitol, trehalose, sucrose
Phản ứng đặc trưng: phản ứng đông tụ huyết tương
Phân bố:
Thịt, cá, rau quả,sữa, trứng,…qua con đường tiếp xúc với
người thao tác trong quá trình chế biến. Ngoài ra còn có trên
lông, mụn nhọt, vết thương,…
- Có khả năng tăng trưởng trong môi trường chứa đến 15%
NaCl.
Hầu hết các vòng tan máu đều tạo sắc tố vàng sau 1 – 2 ngày
nuôi cấy ở nhiệt độ phòng.
Tạo độc tố Enterotoxin bền nhiệt.
- staphylococcus aureus
- Quy trình định
lượng S.aureus
- 2.1 Phạm vi áp dụng:
Phương pháp này tham chiếu theo TCVN 4830 – 1: 2005
( ISO 68881 : 1999)
*TCVN 48301:2005 : tiêu chuẩn này quy định phương pháp
định lượng Staphylococci có phản ứng dương tính với
coagulase trên đĩa thạch có mặt trong các sản phẩm dùng cho
con người hoặc thức ăn chăn nuôi, bằng cách đếm số khuẩn
lạc thu được trên môi trường đặc ( môi trường BairdPacker)
ở 350C – 370C.
- 2.2 Nguyên tắc:
Cấy lên bề mặt của môi trường chọn lọc, một lượng
mẫu qui định (sản phẩm ở dạng lỏng hoặc huyền
phù).
Ủ các đĩa ở điều kiện hiếu khí ở 37oC và kiểm tra
24h hoặc 48h.
Tính số lượng Staphylococcus aureus trong một ml
hoặc một gram mẫu từ những khuẩn lạc điển hình và
không điển hình trên các đĩa ở độ pha loãng khác nhau
và khẳng định bằng kết quả thử coagulase dương tính.
- 2.3 Môi trường và hóa chất:
Môi trường Công dụng
Dung dịch Saline Peptone Water Dung dịch đẳng trương để pha
(SPW) loãng mẫu
Môi trường chọn lọc để nuôi cấy
Môi trường Baird – Parker
S.aureus
Môi trường Trypticase Soy Agar
(TSA) Bảo quản và phục hồi vsv trong quá
trình nuôi cấy
Brain heart broth (BHI)
Huyết tương thỏ Dùng để khẳng định S.aureus
HCl 10%
Chỉnh pH môi trường
NaOH 10%
- 2.5 Qui trình phân tích:
- Chương 3: Thuyết minh qui trình
- Bước 1: chuẩn bị mẫu thử
và huyền phù ban đầu
Lấy 10g ( mẫu rắn) 90ml dung dịch pha
hoặc hút 10ml ( mẫu loãng SPW
lỏng)
( hoặc túi nhựa
vô trùng )
Cho vào máy dập mẫu (mẫu rắn) hoặc lắc đều (mẫu
lỏng) Đồng nhất mẫu
- Bước 2: Pha loãng mẫu
DD 10 2
Hút 1ml dd 10 1
9ml SPW
Nếu cần, lặp lại thao tác trên để có được dung dịch pha loãng 10 3,
10 4, 10 5,… cho đến khi đạt được độ pha loãng thích hợp.
- Bước 3: Phân lập trên môi trường chọn lọc
Hút 0.1ml dd mẫu
BPA
- Bước 4: quan sát, đếm số khuẩn lạc
Đánh dấu
Sau 24h khuẩn lạc
điển hình
Sau 24h tiếp theo
Khuẩn lạc S.aureus dương
tính,đánh dấu khuẩn lạc
không điển hình
- Bước 5+6: Phục hồi và khẳng định
Cấy 5 khuẩn lạc điển hình và 5 khuẩn lạc
không điển hình từ BPA sang các ống
nghiệm tương ứng chứa 5ml môi trường
BHI
Ủ 37 ± 1oC trong 24 ± 3h
Hút 0,1 ml dịch nuôi cấy BHI vào ống nghiệm có
kích thước 10mm × 75mm đã chứa 0,3 ml huyết
tương thỏ ( hoặc theo hướng dẫn của nhà sản
xuất)
- Kiểm tra sự động tụ của huyết tương sau 4, 6, 8,
24h
Xác định tỷ lệ khẳng định dựa trên số khuẩn
lạc đặc trưng và không đặc trưng.
- Báo cáo kết quả
-
Âm tính: không có khối đông, hỗn hợp dung dịch vẫn
đồng nhất như ống không cấy.
-
Dương tính: có khối động tụ huyết tương chiếm ¾.
Âm tính Dương tính
- Bước 7: báo cáo kết quả
- Ví dụ
Số khuẩn lạc
Nồng Số phản
thử nghiệm
độ pha Nt Na ứng Ht Ha
phản ứng
loãng coagulase (+)
coagulase
30 5 5 5/5
102
47 5 2 2/5
5 5 5 5/5
103
8 5 1 1/5
- Kết quả
Thêm vào BST
Báo xấu
Download
Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ
